MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

More documents

Recommendations

Info

Chapitre V – Interface BSA/métal température, contrairement à ce qui est suggéré par les travaux de Glavin portant sur la sublimation des acides aminés sous vide partiel de 30 Pa à 450°C [Glavin et Bada 1998]. Les acquisitions centrées sur le niveau de cœur 1s de l’azote ont mis en évidence, sur le substrat CrOx et Au, la présence d’une nouvelle composante à plus faible énergie de liaison. Bien que cette composante soit particulièrement observée dans les premiers angströms de l’interface BSA/CrOx, elle n’est pas totalement atténuée par la croissance de la couche de BSA, le rapport N 398,6 /N-C=O devenant constant dès 0,3 nm. La constance de ce rapport est également observée dans le cas de l’or. Il est donc probable que cette composante soit une caractéristique de la BSA sublimée sous vide à 245°C. Cette contribution, à plus faible énergie de liaison, représente approximativement 20% et 16% de l’azote détecté respectivement sur CrOx et Au. Or, l’analyse théorique de la structure chimique de la BSA indique que l’azote contenu dans cette protéine est impliqué à environ 80% dans les fonctions amides du squelette carboné. On retrouve donc 20% d’azote dans les chaînes latérales de la protéine. Il est donc possible que la sublimation génère une déstructuration des liaisons chimiques azotées des chaînes latérales qui se traduirait par une légère augmentation de la densité électronique autour de l’azote. Cette première approche met en exergue la difficulté d’accéder à la formation de l’interface entre les protéines et les surfaces métalliques. La BSA est une protéine de 68kDa dont les dimensions sont environ 4 x 4 x 14 nm [Terashima et Tusuji 2002]. On peut donc supposer que l’épaisseur minimale d’une monocouche de protéines adsorbées soit du même ordre de grandeur que son axe le plus court [Blomberg, et al. 1998]. Sachant que les interactions que nous cherchons à observer s’établissent sur des distances inférieures à 0,3 nm, et que 63% de l’intensité du signal provient d’une profondeur de l’ordre de grandeur du libre parcours moyen (λ), la dimension de la protéine apparaît donc comme un facteur limitant fortement l’accès à l’interface. En résumé : La stœchiométrie du carbone et de l’azote de la BSA est conservée au cours de sa sublimation. Cependant, la quantité d’oxygène semble diminuer et le soufre n’est pas détecté. La principale modification chimique observée concerne une augmentation de la densité électronique autour de l’azote qui se traduit par l’apparition d’une nouvelle composante à plus faible énergie de liaison : 398,6 eV. Il est probable que cette contribution soit associée à une dégradation partielle des liaisons impliquant l’azote dans les chaînes latérales de la protéine. IV.3. Analyse de l’interface BSA/métal par désorption thermique sous vide Afin d’augmenter la sensibilité des analyses XPS à l’interface BSA/surfaces métalliques, nous avons envisagé l’approche inverse de la précédente et procéder à la désorption thermique de la BSA pour accéder à l’interface préalablement formée avec la surface métallique. Les substrats : IV.3.1. Matériel et méthode de travail Les dépôts de chrome et d’or sont réalisés par nos soins sur des wafers de silicium par pulvérisation cathodique magnétron en atmosphère neutre d’argon (0,1 Pa). Un second dépôt de chrome est cependant réalisé par pulvérisation cathodique magnétron en atmosphère réactive d’oxygène (0,1 Pa). Les atomes éjectés (pulvérisés) de la cathode métallique vont se combiner avec les molécules gazeuses d’oxygène et ainsi former un oxyde métallique à la surface du wafer de silicium. - 142 -
Chapitre V – Interface BSA/métal Nous disposons donc de deux substrats de chrome chimiquement différents : - Un substrat de chrome essentiellement métallique, une faible composante oxyde étant cependant observée (figure V-17 a) ; - Un substrat d’oxyde de chrome dont la composition semble complexe puisque deux états d’oxydation sont mis en évidence par XPS (figure V-17 b). Les énergies de liaison de 575,8 eV et 578,2 eV pourraient correspondre respectivement aux états d’oxydation +3 et +6 du chrome [deVos, et al. 2001]. CrOx CrMet a) b) CrOx II CrOx I 582 580 578 576 574 Energie de liaison (eV) 572 582 580 578 576 574 Energie de liaison (eV) FigureV-17 : Niveau de cœur 2p 3/2 du chrome a) du substrat de chrome métallique ; b) du substrat d’oxyde de chrome. 572 Avant de procéder à l’adsorption de la BSA, les substrats sont dégazés sous vide à 400°C. Dépôt de la BSA et désorption thermique : Afin de limiter la contamination carbonée des substrats au moment de l’adsorption de la BSA, celle-ci est réalisée dans le sas d’introduction de l’appareillage UHV. Pour cela, le vide primaire est cassé à l’azote sec et une goutte d’une solution aqueuse de BSA à 1 mg/ml est directement déposée sur chaque substrat dans le sas d’introduction. L’eau de la solution est évaporée sous vide par le pompage primaire. Les substrats sont alors transférés dans la chambre d’analyse et sont chauffés de 50°C à 450°C par effet joule via la tige du porte échantillon. La desorption thermique de la BSA est suivie par XPS pour chaque élévation de 50°C de la température. IV.3.2. Interfaces BSA/CrMet et BSA/CrOx Les résultats obtenus sur la désorption thermique de la BSA adsorbée sur les substrats de chrome métallique (CrMet) et d’oxyde de chrome (CrOx) sont présentés en parallèle. Les figures V-18 et V-19 montrent l’allure générale des spectres XPS obtenus respectivement sur les substrats CrMet et CrOx en fonction de l’élévation de la température. L’intensité des pics Cr2p augmente avec la température ce qui traduit une diminution de l’épaisseur de la couche de BSA adsorbée. La protéine semble donc se désorber sous l’influence d’une élévation de la température. - 143 -
Page 1:
N° d’ordre 2006-21 Année 2006 T
Page 5 and 6:
SOMMAIRE INTRODUCTION GENERALE CHAP
Page 7:
CHAPITRE V: INTERFACE BSA/METAL I.
Page 10 and 11:
et quantitativement l’efficacité
Page 12 and 13:
Chapitre I - Les ATNC, un Problème
Page 14 and 15:
Chapitre I - Les ATNC, un problème
Page 16 and 17:
Page 18 and 19:
Page 20 and 21:
Page 22 and 23:
Page 24 and 25:
Page 26 and 27:
Page 28 and 29:
Page 30 and 31:
Page 32 and 33:
Page 34 and 35:
- 26 - Chapitre II - Evaluation du
Page 36 and 37:
- 28 - Chapitre II - Evaluation du
Page 38 and 39:
Chapitre II - Evaluation du Nettoya
Page 40 and 41:
Page 42 and 43:
Page 44 and 45:
Page 46 and 47:
Page 48 and 49:
Page 50 and 51:
Page 52 and 53:
Page 54 and 55:
Page 56 and 57:
Page 58 and 59:
Page 60 and 61:
Page 62 and 63:
Page 64 and 65:
Chapitre III - Efficacité du Netto
Page 66 and 67:
Page 68 and 69:
Page 70 and 71:
Page 72 and 73:
Page 74 and 75:
Page 76 and 77:
Page 78 and 79:
Page 80 and 81:
Page 82 and 83:
Page 84 and 85:
Page 86 and 87:
Page 88 and 89:
Page 90 and 91:
Page 92 and 93:
Page 94 and 95:
Page 96 and 97:
Page 98 and 99:
Page 100 and 101: Chapitre III - Efficacité du Netto
Page 106 and 107: - 98 - Chapitre IV - Les Protagonis
Page 108 and 109: Chapitre IV - Les Protagonistes de
Page 132 and 133: - 124 - Chapitre V - Interface BSA/
Page 134 and 135: Chapitre V - Interface BSA/métal l
Page 136 and 137: Chapitre V - Interface BSA/métal L
Page 138 and 139: Chapitre V - Interface BSA/métal I
Page 140 and 141: Chapitre V - Interface BSA/métal m
Page 146 and 147: Chapitre V - Interface BSA/métal C
Page 148 and 149: Chapitre V - Interface BSA/métal
Page 154 and 155: Chapitre V - Interface BSA/métal A
Page 156 and 157: Chapitre V - Interface BSA/métal (
Page 158 and 159: Chapitre V - Interface BSA/métal D
Page 164 and 165: Chapitre V - Interface BSA/métal E
Page 166 and 167: Chapitre V - Interface BSA/métal m
Page 168 and 169: Chapitre V - Interface BSA/métal F
Page 170 and 171: Chapitre V - Interface BSA/métal U
Page 174 and 175: Chapitre V - Interface BSA/métal (
Page 176 and 177: Chapitre V - Interface BSA/métal A
Page 180 and 181: Chapitre V - Interface BSA/métal P
Page 182 and 183: Chapitre V - Interface BSA/métal V
Page 188 and 189: Chapitre V - Interface BSA/métal R
Page 190 and 191: - 182 - Chapitre V - Interface BSA/
Page 192 and 193: Conclusion Générale résiduelle,
Page 194 and 195: - 186 -
Page 196 and 197: Annexe 1 - La Spectroscopie de Phot
Page 198 and 199: Annexe 1 - La Spectroscopie de Phot
Page 200 and 201:
Annexe 2 - Marquage des protéines
Page 202 and 203:
Annexe 3 - Le Western blot Le princ
Page 204 and 205:
Annexe 3 - Le Western blot Les cond
Page 206 and 207:
- 198 - Annexe 3 - Le Western blot
Page 208 and 209:
Annexe 4 - Les Biais Méthodologiqu
Page 210 and 211:
Annexe 4 - Les Biais Méthodologiqu
Page 212 and 213:
Annexe 5 - Calculs des épaisseurs
Page 214 and 215:
- 206 -
Page 216:
- 208 -
show all

MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?