MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon
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Chapitre IV – Les Protagonistes de la Détergence<br />
DD1<br />
DD1 sans<br />
PHMB<br />
30 kDa<br />
27 kDa<br />
22 kDa<br />
Figure IV-18 : Western blot de la protéine prion traitée par la formulation Aniosyme DD1 avec ou<br />
sans PHMB.<br />
L’intensité des signaux observés pour la protéine prion avec et sans PHMB est significativement<br />
différente. La quantité de protéine prion détectée est nettement moins importante en absence de PHMB,<br />
ce qui conforte l’hypo<strong>thèse</strong> d’un effet antagoniste de ce principe actif antimicrobien sur l’activité<br />
enzymatique de la protéase. Le profil électrophorétique particulier, observé en présence de PHMB,<br />
suggère également l’existence d’une interférence entre la protéine prion et le PHMB. En effet, les trois<br />
glycoformes de la protéine prion ne sont pas résolues sur ce profil et nous pouvons observer une traînée<br />
du signal. Dès lors, il convient de se demander si les effets antagonistes du PHMB sont dus à une<br />
inhibition directe ou indirecte de l’activité enzymatique. En effet, l’étendue de la traînée vers les plus<br />
faibles poids moléculaires suggère une rétention des produits de dégradation de la protéine prion. Ceci<br />
pourrait donc témoigner d’une activité enzymatique effective de la protéase mais également d’une<br />
interaction de ces produits de dégradation avec le PHMB, qui verraient donc leur migration<br />
électrophorétique ralentie.<br />
La confrontation des différents résultats obtenus jusqu’à présent semble converger vers l’hypo<strong>thèse</strong> d’un<br />
antagonisme direct du PHMB sur l’efficacité de la détergence et indirect sur l’activité enzymatique. Dans<br />
le chapitre II, nous avons mis en évidence l’adsorption irréversible du biguanide sur les substrats d’AISI<br />
304, que ceux-ci soient ou non souillés par l’HC (figure II-8 et II-12). Dans le chapitre III, nous avons<br />
observé la « rétention » de la protéine prion sur les fils d’acier inoxydable lorsque ces fils étaient nettoyés<br />
par la formulation Aniosyme DD1. L’emploi de la formulation Aniosyme N2 en seconde intention ne<br />
permettait pas d’améliorer l’efficacité du nettoyage malgré les performances détergentes de cette<br />
formulation (figure III-17). Compte tenu des différences qualitatives en biguanide entre l’Aniosyme N2 et<br />
DD1, nous avions émis l’hypo<strong>thèse</strong> que le biguanide pouvait être responsable de cet effet. Associé aux<br />
présents résultats sur le comportement électrophorétique de la protéine prion en présence de PHMB, il<br />
semble que l’effet antagoniste de ce principe actif antimicrobien soit donc lié à sa forte capacité<br />
d’adsorption. Ce phénomène de « coating » du PHMB a été confirmé par Carole Bolot (Laboratoires<br />
ANIOS) dans le cadre de son Master. Elle a en effet montré qu’un prétrempage de la salissure dans une<br />
solution de PHMB compromettait la phase de nettoyage ultérieure. Ce coating a également pu être<br />
visualisé par l’intermédiaire d’un fluoresceur anionique. Ainsi, le coating du PHMB sur la salissure<br />
adsorbée empêcherait d’une part la protéase d’accéder à son substrat et empêcherait d’autre part l’action<br />
détersive des tensioactifs. Ce phénomène explique par conséquent les moindres performances, à la fois<br />
détergente et enzymatique, de la formulation Aniosyme DD1.<br />
Le PHMB est un principe actif antimicrobien polymérique et cationique utilisé dans diverses applications<br />
telles que la désinfection des piscines, le traitement des systèmes de refroidissement d’eau ou encore la<br />
prévention de la formation de la plaque dentaire [Rosin, et al. 2001]. C’est un polymère extrêmement<br />
basique existant sous forme cationique jusqu’à pH 10, ce qui lui permet d’interagir fortement et<br />
rapidement avec les espèces anioniques. Les groupements cationiques sont séparés par des chaînes<br />
hexaméthylènes qui confèrent également à cette molécule un caractère hydrophobe favorisant par<br />
conséquent les interactions de cette nature.<br />
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