MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Chapitre IV – Les Protagonistes de la Détergence
DD1
DD1 sans
PHMB
30 kDa
27 kDa
22 kDa
Figure IV-18 : Western blot de la protéine prion traitée par la formulation Aniosyme DD1 avec ou
sans PHMB.
L’intensité des signaux observés pour la protéine prion avec et sans PHMB est significativement
différente. La quantité de protéine prion détectée est nettement moins importante en absence de PHMB,
ce qui conforte l’hypothèse d’un effet antagoniste de ce principe actif antimicrobien sur l’activité
enzymatique de la protéase. Le profil électrophorétique particulier, observé en présence de PHMB,
suggère également l’existence d’une interférence entre la protéine prion et le PHMB. En effet, les trois
glycoformes de la protéine prion ne sont pas résolues sur ce profil et nous pouvons observer une traînée
du signal. Dès lors, il convient de se demander si les effets antagonistes du PHMB sont dus à une
inhibition directe ou indirecte de l’activité enzymatique. En effet, l’étendue de la traînée vers les plus
faibles poids moléculaires suggère une rétention des produits de dégradation de la protéine prion. Ceci
pourrait donc témoigner d’une activité enzymatique effective de la protéase mais également d’une
interaction de ces produits de dégradation avec le PHMB, qui verraient donc leur migration
électrophorétique ralentie.
La confrontation des différents résultats obtenus jusqu’à présent semble converger vers l’hypothèse d’un
antagonisme direct du PHMB sur l’efficacité de la détergence et indirect sur l’activité enzymatique. Dans
le chapitre II, nous avons mis en évidence l’adsorption irréversible du biguanide sur les substrats d’AISI
304, que ceux-ci soient ou non souillés par l’HC (figure II-8 et II-12). Dans le chapitre III, nous avons
observé la « rétention » de la protéine prion sur les fils d’acier inoxydable lorsque ces fils étaient nettoyés
par la formulation Aniosyme DD1. L’emploi de la formulation Aniosyme N2 en seconde intention ne
permettait pas d’améliorer l’efficacité du nettoyage malgré les performances détergentes de cette
formulation (figure III-17). Compte tenu des différences qualitatives en biguanide entre l’Aniosyme N2 et
DD1, nous avions émis l’hypothèse que le biguanide pouvait être responsable de cet effet. Associé aux
présents résultats sur le comportement électrophorétique de la protéine prion en présence de PHMB, il
semble que l’effet antagoniste de ce principe actif antimicrobien soit donc lié à sa forte capacité
d’adsorption. Ce phénomène de « coating » du PHMB a été confirmé par Carole Bolot (Laboratoires
ANIOS) dans le cadre de son Master. Elle a en effet montré qu’un prétrempage de la salissure dans une
solution de PHMB compromettait la phase de nettoyage ultérieure. Ce coating a également pu être
visualisé par l’intermédiaire d’un fluoresceur anionique. Ainsi, le coating du PHMB sur la salissure
adsorbée empêcherait d’une part la protéase d’accéder à son substrat et empêcherait d’autre part l’action
détersive des tensioactifs. Ce phénomène explique par conséquent les moindres performances, à la fois
détergente et enzymatique, de la formulation Aniosyme DD1.
Le PHMB est un principe actif antimicrobien polymérique et cationique utilisé dans diverses applications
telles que la désinfection des piscines, le traitement des systèmes de refroidissement d’eau ou encore la
prévention de la formation de la plaque dentaire [Rosin, et al. 2001]. C’est un polymère extrêmement
basique existant sous forme cationique jusqu’à pH 10, ce qui lui permet d’interagir fortement et
rapidement avec les espèces anioniques. Les groupements cationiques sont séparés par des chaînes
hexaméthylènes qui confèrent également à cette molécule un caractère hydrophobe favorisant par
conséquent les interactions de cette nature.
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