MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Chapitre IV – Les Protagonistes de la Détergence
sont susceptibles de former des savons et que la solubilité de ces savons est fonction du sel auxquels ils
sont associés, nous avons ajusté les pH par trois bases différentes : l’hydroxyde de sodium (NaOH) et
l’hydroxyde de potassium (KOH), qui sont des agents alcalins forts, et la monoéthanolamine (MEA), un
agent alcalinisant faible. Les résultats sont présentés sur la figure IV-17.
NaOH KOH MEA
pH8 pH10 pH11 pH10 pH11 pH10 pH11
Témoin
- + - + - + - + - +
- +
- +
MCJs + - + - + - + - + -
+ -
+ -
Figure IV-17 : Influence du pH sur l’activité enzymatique de la protéase l’Aniosyme N2 pour des
temps de contact de 15 minutes.
Les résultats observés montrent que les bases utilisées pour ajuster les pH n’ont pas d’incidence sur
l’activité enzymatique. La PrPc est complètement digérée quel que soit le pH de la formulation. La PrPres
est observée à pH 8, le pH optimal de l’enzyme, ainsi qu’à pH 10 sans différence significative de
l’activité de la protéase. En revanche, il semble qu’à pH 11 l’activité enzymatique de la protéase soit
inhibée puisque les profils électrophorétiques ne correspondent plus à celui de la PrPres. Ce pH dénature
vraisemblablement la protéase.
Les études récentes, conduites sur l’inactivation biologique de la protéine prion par les enzymes dont le
pH optimal est alcalin, montrent que leur activité sur la protéine prion requiert qu’elles puissent être
actives à pH 12 [McLeod, et al. 2004]. Bien que l’on ne connaisse pas exactement les effets des pH
fortement alcalins sur la stabilité structurale de la PrPsc, il est probable qu’elle soit significativement
réduite permettant ainsi d’augmenter sa sensibilité aux protéases.
La température et le pH n’ont donc pas d’influence significative sur l’activité enzymatique de la protéase
formulée. Ces données corroborant les résultats obtenus à propos des facteurs chimiques, nous pouvons
conclure que l’activité enzymatique est optimale dans la formulation Aniosyme N2. En effet, aucune de
nos tentatives n’a pu aboutir compte tenu des contraintes de temps, de pH et de température de nos
conditions expérimentales et de la résistance physico-chimique intrinsèque de la protéine prion.
II.2. Minimisation de l’activité enzymatique par les principes actifs
antimicrobiens de l’Aniosyme DD1
Nous avons pu constater, dans la partie consacrée aux observations surfaciques, que le
polyhexaméthylène biguanide (PHMB) était néfaste vis-à-vis de l’efficacité détergente des formulations.
(figure IV-5). Il a également été suggéré que les principes actifs antimicrobiens puissent avoir un effet
inhibiteur sur l’activité enzymatique (figure IV-3 et III-19). Dans ce contexte, nous avons évalué les
capacités de la protéase à digérer la protéine prion lorsqu’elle est formulée dans l’ Aniosyme DD1 soit
avec, soit sans PHMB. Les résultats sont présentés sur la figure IV-18.
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