MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Chapitre IV – Les Protagonistes de la Détergence
Z- N2 Pro Pro+
ENF
2%
ENF
0,7%
Figure IV-15 : Western blot de la PrP traitée par différentes protéases ou association de protéases
formulées dans l’Aniosyme N2. Z- : contrôle sans enzymes, Pro : Protamex ; Pro+ : Protamex
Plus ; ENF : Espérase 0,8L + Neutrase 0,8L + Flavourzyme 500L.
La radiographie présentée sur la figure IV-15 montre en effet que les enzymes testées seules ou en
association ne montrent pas d’activité enzymatique significativement différente de la protéase de
l’Aniosyme N2.
En ce qui concerne l’association de plusieurs protéases, les résultats ne sont pas plus intéressants. En
effet, aucune différence n’est observée comparativement à l’Aniosyme N2. Ces données nous permettent
de confirmer le fait que l’augmentation de la concentration en enzymes n’améliore en rien la dégradation
de la protéine prion, dans nos conditions.
L’optimisation de l’activité enzymatique vis-à-vis de la protéine prion via les facteurs chimiques est un
réel défi. Les paramètres testés, à partir de la formulation Aniosyme N2, n’ont pas permis d’améliorer
l’activité enzymatique de la protéase vis-à-vis de la protéine prion. L’activité enzymatique étant
également régie par des facteurs physiques, on peut se demander si la température et le pH favoriseraient
la digestion de la PrPsc.
II.1.2. Les facteurs physiques
La température :
La vitesse de la plupart des réactions chimiques augmente quand on élève la température. Il en est de
même pour les réactions enzymatiques. Cependant, la vitesse de la réaction enzymatique n’augmente avec
la température que jusqu’à une valeur maximale au-delà de laquelle elle décroît rapidement puisque la
chaleur dénature l’enzyme et sa vitesse de dénaturation augmente avec la température. La température
pour laquelle la vitesse de la réaction est maximale est définit comme la température optimale de
l’enzyme.
Il semble donc intéressant d’étudier l’incidence de la température sur l’activité enzymatique de la
protéase de l’Aniosyme N2. Trois températures ont été testées : 20°C, 37°C et 60°C, cette dernière étant
la température optimale de la protéase étudiée. Ayant montré que l’activité enzymatique vis-à-vis de la
protéine prion était indépendante de la concentration en protéase, nous avons souhaité vérifier cette
donnée sous l’influence conjointe de la température et du temps. Ainsi, la protéase a été formulée à 3% et
5% dans l’Aniosyme N2 et évaluée pour des temps de contact 15 et 30 minutes. L’essai contrôle consiste
à traiter l’HC par de l’eau du réseau 15 minutes à 20°C. Les résultats sont présentés sur la figure IV-16.
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