MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon
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Chapitre IV – Les Protagonistes de la Détergence<br />
Z- N2 Pro Pro+<br />
ENF<br />
2%<br />
ENF<br />
0,7%<br />
Figure IV-15 : Western blot de la PrP traitée par différentes protéases ou association de protéases<br />
formulées dans l’Aniosyme N2. Z- : contrôle sans enzymes, Pro : Protamex ; Pro+ : Protamex<br />
Plus ; ENF : Espérase 0,8L + Neutrase 0,8L + Flavourzyme 500L.<br />
La radiographie présentée sur la figure IV-15 montre en effet que les enzymes testées seules ou en<br />
association ne montrent pas d’activité enzymatique significativement différente de la protéase de<br />
l’Aniosyme N2.<br />
En ce qui concerne l’association de plusieurs protéases, les résultats ne sont pas plus intéressants. En<br />
effet, aucune différence n’est observée comparativement à l’Aniosyme N2. Ces données nous permettent<br />
de confirmer le fait que l’augmentation de la concentration en enzymes n’améliore en rien la dégradation<br />
de la protéine prion, dans nos conditions.<br />
L’optimisation de l’activité enzymatique vis-à-vis de la protéine prion via les facteurs chimiques est un<br />
réel défi. Les paramètres testés, à partir de la formulation Aniosyme N2, n’ont pas permis d’améliorer<br />
l’activité enzymatique de la protéase vis-à-vis de la protéine prion. L’activité enzymatique étant<br />
également régie par des facteurs physiques, on peut se demander si la température et le pH favoriseraient<br />
la digestion de la PrPsc.<br />
II.1.2. Les facteurs physiques<br />
La température :<br />
La vitesse de la plupart des réactions chimiques augmente quand on élève la température. Il en est de<br />
même pour les réactions enzymatiques. Cependant, la vitesse de la réaction enzymatique n’augmente avec<br />
la température que jusqu’à une valeur maximale au-delà de laquelle elle décroît rapidement puisque la<br />
chaleur dénature l’enzyme et sa vitesse de dénaturation augmente avec la température. La température<br />
pour laquelle la vitesse de la réaction est maximale est définit comme la température optimale de<br />
l’enzyme.<br />
Il semble donc intéressant d’étudier l’incidence de la température sur l’activité enzymatique de la<br />
protéase de l’Aniosyme N2. Trois températures ont été testées : 20°C, 37°C et 60°C, cette dernière étant<br />
la température optimale de la protéase étudiée. Ayant montré que l’activité enzymatique vis-à-vis de la<br />
protéine prion était indépendante de la concentration en protéase, nous avons souhaité vérifier cette<br />
donnée sous l’influence conjointe de la température et du temps. Ainsi, la protéase a été formulée à 3% et<br />
5% dans l’Aniosyme N2 et évaluée pour des temps de contact 15 et 30 minutes. L’essai contrôle consiste<br />
à traiter l’HC par de l’eau du réseau 15 minutes à 20°C. Les résultats sont présentés sur la figure IV-16.<br />
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