MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Chapitre IV – Les Protagonistes de la Détergence
pas d’influence significative sur l’efficacité de la formulation en rapport à la surface (figure IV-8). Mais
qu’en est-il en milieu liquide vis-à-vis de la protéine prion
Pour répondre à cette question, nous avons évalué par Western blot, l’activité enzymatique de la
formulation Aniosyme N2 contenant des concentrations croissantes de 0,8% à 7% de protéase sur un HC
témoin, exempt de PrPsc et sur un HC de MCJs. Du point de vue méthodologique, l’activité enzymatique
est inhibée par un abaissement du pH de la formulation après 15 minutes de contact à température
ambiante (19-23°C). La protéine prion est précipitée par l’acide phosphotungstique. L’essai contrôle est
traité par de l’eau du réseau (H 2 Or).
Les résultats présentés sur la figure IV-14 montrent que la PrPc de l’HC témoin est totalement digérée en
15 minutes, quelle que soit la concentration en protéase de la formulation. Notons qu’une concentration
de 0,8% est suffisante.
MCJs
Témoin
H 2 0r 0,8% 2% 5% 7%
- + - + - + - + - +
+ - + - + - + - + -
Figure IV-14 : Incidence de la concentration en protéase dans la formulation Aniosyme N2 sur la
digestion de la PrPc dans un HC témoin et de la PrPsc dans un HC de MCJs. Les concentrations en
protéases testées sont 0,8% ; 2% ; 5% et 7%. Les concentrations en protéase n’influent pas sur
l’inactivation de la PrPsc en 15 minutes. La PrPc est intégralement digérée quelle que soit la
concentration en protéase testée.
En ce qui concerne la dégradation de la protéine prion, on observe une activité de la protéase puisque la
PrP détectée est de la PrPres, mais cette activité est indépendante de la concentration en enzymes de la
formulation. En effet, l’intensité des signaux observés n’est pas significativement différente pour les
quatre concentrations de protéase testées.
Ainsi, quel que soit le référant étudié (la surface ou le milieu liquide), l’augmentation de la concentration
en enzyme n’optimise ni l’efficacité de la formulation, ni la digestion de la protéine prion en 15 minutes.
Contenu du fait qu’une augmentation de concentration en enzyme se traduit généralement par une
augmentation de la vitesse initiale de la réaction catalysée, nous étions en droit de nous attendre à de
meilleures performances.
Nous avons également souhaité évaluer l’activité enzymatique d’autres protéases, seules ou en
association, dans l’Aniosyme N2 vis-à-vis de la protéine prion. Différentes classes de protéases ont été
testées, notamment des protéases à sérine, des protéases à aspartate ou encore des métallo-protéases.
Toutes ces enzymes digèrent complètement la PrPc d’un HC témoin en 15 minutes (résultats non
présentés), mais aucune d’entre elle ne présente d’activité enzymatique significativement plus
intéressante que la protéase de l’Aniosyme N2 vis-à-vis de la PrPsc. De la même façon, aucune des
associations d’enzymes testées ne s’est révélée pertinente. Un extrait des résultats obtenus est présenté sur
la figure IV-15 pour deux protéases (Pro et Pro+) ainsi que pour une association de protéases formulée à
0,7% et 2%.
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