MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Chapitre IV – Les Protagonistes de la Détergence
l’acide chlorhydrique (HCl) 1M est ajouté à la formulation jusqu’à l’obtention d’un pH 3. La protéine
prion est précipitée par l’acide phosphotungstique.
Les résultats sont présentés sur la figure IV-12
N2
A - avec SQ
PK - + - + - +
A - sans SQ
- + - +
Figure IV-12 : Western blot de la PrP traitée par l’Aniosyme N2 et sa variante anionique (A - ) avec
ou sans séquestrant (SQ). L’activité enzymatique est inhibée par l’acidité du pH et la PrP est
précipitée par l’acide phosphotungstique. N2 : Aniosyme N2 ; PK : protéinase K.
Comparativement à l’Aniosyme N2, la présence du tensioactif anionique et du séquestrant n’améliore pas
l’activité enzymatique de la protéase. On peut néanmoins observer que le traitement secondaire par la
protéinase K est favorisé en présence de ce tensioactif. Une fois encore, on constate l’importance du
séquestrant pour favoriser l’activité enzymatique de la protéase.
Mode d’action du séquestrant:
La présence du séquestrant favorise considérablement l’activité enzymatique de la protéase vis-à-vis de la
protéine prion. Cet effet de synergie est observé pour toutes les formulations testées : la formulation
Aniosyme N2 (figure IV-10), la formulation cationique (figure IV-11) et la formulation anionique (figure
IV-12). L’hypothèse la plus probable est un rôle inhibiteur des cations métalliques présents dans l’eau du
réseau. Le séquestrant permettrait donc de pallier à l’effet inhibiteur de ces cations par ces fonctions de
séquestrant (Kumar 1998). Néanmoins, on ne peut exclure la possibilité d’une synergie liée à la molécule
elle-même. Le séquestrant pourrait en effet être un effecteur de l’activité enzymatique. Afin de s’assurer
du rôle du séquestrant et de justifier le rôle inhibiteur des cations métalliques sur l’activité enzymatique,
nous avons introduit des ions Cu 2+ dans les formulations, saturant ainsi préalablement le séquestrant. Les
résultats obtenus sont présentés sur la figure IV-13(a) et (b) pour les formulations anioniques
respectivement sans et avec Cu 2+ .
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