MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon
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Chapitre IV – Les Protagonistes de la Détergence<br />
l’acide chlorhydrique (HCl) 1M est ajouté à la formulation jusqu’à l’obtention d’un pH 3. La protéine<br />
prion est précipitée par l’acide phosphotungstique.<br />
Les résultats sont présentés sur la figure IV-12<br />
N2<br />
A - avec SQ<br />
PK - + - + - +<br />
A - sans SQ<br />
- + - +<br />
Figure IV-12 : Western blot de la PrP traitée par l’Aniosyme N2 et sa variante anionique (A - ) avec<br />
ou sans séquestrant (SQ). L’activité enzymatique est inhibée par l’acidité du pH et la PrP est<br />
précipitée par l’acide phosphotungstique. N2 : Aniosyme N2 ; PK : protéinase K.<br />
Comparativement à l’Aniosyme N2, la présence du tensioactif anionique et du séquestrant n’améliore pas<br />
l’activité enzymatique de la protéase. On peut néanmoins observer que le traitement secondaire par la<br />
protéinase K est favorisé en présence de ce tensioactif. Une fois encore, on constate l’importance du<br />
séquestrant pour favoriser l’activité enzymatique de la protéase.<br />
Mode d’action du séquestrant:<br />
La présence du séquestrant favorise considérablement l’activité enzymatique de la protéase vis-à-vis de la<br />
protéine prion. Cet effet de synergie est observé pour toutes les formulations testées : la formulation<br />
Aniosyme N2 (figure IV-10), la formulation cationique (figure IV-11) et la formulation anionique (figure<br />
IV-12). L’hypo<strong>thèse</strong> la plus probable est un rôle inhibiteur des cations métalliques présents dans l’eau du<br />
réseau. Le séquestrant permettrait donc de pallier à l’effet inhibiteur de ces cations par ces fonctions de<br />
séquestrant (Kumar 1998). Néanmoins, on ne peut exclure la possibilité d’une synergie liée à la molécule<br />
elle-même. Le séquestrant pourrait en effet être un effecteur de l’activité enzymatique. Afin de s’assurer<br />
du rôle du séquestrant et de justifier le rôle inhibiteur des cations métalliques sur l’activité enzymatique,<br />
nous avons introduit des ions Cu 2+ dans les formulations, saturant ainsi préalablement le séquestrant. Les<br />
résultats obtenus sont présentés sur la figure IV-13(a) et (b) pour les formulations anioniques<br />
respectivement sans et avec Cu 2+ .<br />
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