MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon
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Chapitre IV – Les Protagonistes de la Détergence<br />
Compte tenu de l’activité enzymatique observée en présence de l’alcool gras polyéthoxylé isoC 13 E 8 , nous<br />
avons souhaité tester d’autres tensioactifs non ioniques :<br />
- un alcool gras polyéthoxylé à 25 moles d’oxyde d’éthylène ;<br />
- l’oxyde de diméthyl-lauryl amine ;<br />
- un alcool gras alkoxylé.<br />
L’analyse des Western blot (résultats non présentés) montre qu’aucun de ces tensioactifs non ioniques<br />
n’améliore l’activité enzymatique, par rapport au tensioactif non ionique déjà présent dans l’Aniosyme<br />
N2.<br />
Nous avons également testé un autre tensioactif amphotère : le cocoamphodipropionate disodique.<br />
Comme précédemment, aucune amélioration de l’activité enzymatique n’a été observée.<br />
Etant donné que les interactions entre les tensioactifs et les protéines sont en partie fonction de la nature<br />
des tensioactifs [Deep et Ahluwalia 2001, Durchschlag, et al. 2000, Xiong, et al. 2001], il parait<br />
intéressant de tester des tensioactifs dont la nature diffère de ceux présents dans l’Aniosyme N2. Ainsi,<br />
dans un deuxième temps, nous nous sommes intéressés aux tensioactifs cationiques et anioniques.<br />
Pour cela, nous avons substitué les tensioactifs de l’Aniosyme N2 par un tensioactif cationique (C + ) : le N<br />
alkyl « coco » di(pentadécahydroxyéthyl) méthylammonium-méthylsulfate. Comme précédemment, l’HC<br />
est traité par la formulation « C + » avec ou sans séquestrant (SQ). Les résultats sont présentés en triplicats<br />
sur la figure IV-11.<br />
N2 C + sans SQ C + avec SQ<br />
PK - + - + - + - + - + - + - +<br />
Figure IV-11 : Western blot de la PrP traitée par l’Aniosyme N2 et sa variante cationique (C + ) avec<br />
ou sans séquestrant (SQ). L’activité enzymatique est inhibée par la chaleur et la PrP est précipitée<br />
par l’acide phosphotungstique. N2 : Aniosyme N2 ; PK : protéinase K.<br />
La comparaison des résultats obtenus pour cette formulation « C + » avec et sans séquestrant, met en<br />
évidence une différence d’activité enzymatique essentiellement liée à la présence ou non de séquestrant.<br />
Lorsque la formulation en est exempte, la protéine prion détectée est essentiellement de la PrPsc. En<br />
revanche, nous observons de la PrPres en présence de séquestrant. Comme nous l’avons souligné<br />
précédemment, l’activité enzymatique est particulièrement sensible à la présence des cations métalliques.<br />
Quoi qu’il en soit, le tensioactif cationique contenu dans la formulation ne permet pas d’améliorer<br />
l’activité enzymatique de la protéase, comparativement aux tensioactifs de l’Aniosyme N2.<br />
Puis, dans la même logique, nous avons substitué les tensioactifs de l’Aniosyme N2 par un tensioactif<br />
anionique (A - ) : le lauryléthersulfate à 3 moles d’oxyde d’éthylène. L’HC est traité par la formulation<br />
« A - » avec ou sans séquestrant (SQ).<br />
Nous avons dû, face à des résultats « biaisés », modifier le mode d’inhibition de l’activité enzymatique. Il<br />
semblerait en effet, que la présence du tensioactif anionique modifie la thermorésistance de la protéine<br />
prion, avec une disparition du signal de la PrP en Western blot (Annexe 4) Pour contourner ce biais<br />
méthodologique, nous avons inhibé l’activité enzymatique en acidifiant le pH de la solution. Pour cela, de<br />
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