MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Chapitre IV – Les Protagonistes de la Détergence
Compte tenu de l’activité enzymatique observée en présence de l’alcool gras polyéthoxylé isoC 13 E 8 , nous
avons souhaité tester d’autres tensioactifs non ioniques :
- un alcool gras polyéthoxylé à 25 moles d’oxyde d’éthylène ;
- l’oxyde de diméthyl-lauryl amine ;
- un alcool gras alkoxylé.
L’analyse des Western blot (résultats non présentés) montre qu’aucun de ces tensioactifs non ioniques
n’améliore l’activité enzymatique, par rapport au tensioactif non ionique déjà présent dans l’Aniosyme
N2.
Nous avons également testé un autre tensioactif amphotère : le cocoamphodipropionate disodique.
Comme précédemment, aucune amélioration de l’activité enzymatique n’a été observée.
Etant donné que les interactions entre les tensioactifs et les protéines sont en partie fonction de la nature
des tensioactifs [Deep et Ahluwalia 2001, Durchschlag, et al. 2000, Xiong, et al. 2001], il parait
intéressant de tester des tensioactifs dont la nature diffère de ceux présents dans l’Aniosyme N2. Ainsi,
dans un deuxième temps, nous nous sommes intéressés aux tensioactifs cationiques et anioniques.
Pour cela, nous avons substitué les tensioactifs de l’Aniosyme N2 par un tensioactif cationique (C + ) : le N
alkyl « coco » di(pentadécahydroxyéthyl) méthylammonium-méthylsulfate. Comme précédemment, l’HC
est traité par la formulation « C + » avec ou sans séquestrant (SQ). Les résultats sont présentés en triplicats
sur la figure IV-11.
N2 C + sans SQ C + avec SQ
PK - + - + - + - + - + - + - +
Figure IV-11 : Western blot de la PrP traitée par l’Aniosyme N2 et sa variante cationique (C + ) avec
ou sans séquestrant (SQ). L’activité enzymatique est inhibée par la chaleur et la PrP est précipitée
par l’acide phosphotungstique. N2 : Aniosyme N2 ; PK : protéinase K.
La comparaison des résultats obtenus pour cette formulation « C + » avec et sans séquestrant, met en
évidence une différence d’activité enzymatique essentiellement liée à la présence ou non de séquestrant.
Lorsque la formulation en est exempte, la protéine prion détectée est essentiellement de la PrPsc. En
revanche, nous observons de la PrPres en présence de séquestrant. Comme nous l’avons souligné
précédemment, l’activité enzymatique est particulièrement sensible à la présence des cations métalliques.
Quoi qu’il en soit, le tensioactif cationique contenu dans la formulation ne permet pas d’améliorer
l’activité enzymatique de la protéase, comparativement aux tensioactifs de l’Aniosyme N2.
Puis, dans la même logique, nous avons substitué les tensioactifs de l’Aniosyme N2 par un tensioactif
anionique (A - ) : le lauryléthersulfate à 3 moles d’oxyde d’éthylène. L’HC est traité par la formulation
« A - » avec ou sans séquestrant (SQ).
Nous avons dû, face à des résultats « biaisés », modifier le mode d’inhibition de l’activité enzymatique. Il
semblerait en effet, que la présence du tensioactif anionique modifie la thermorésistance de la protéine
prion, avec une disparition du signal de la PrP en Western blot (Annexe 4) Pour contourner ce biais
méthodologique, nous avons inhibé l’activité enzymatique en acidifiant le pH de la solution. Pour cela, de
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