MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon
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Chapitre IV – Les Protagonistes de la Détergence<br />
peuvent agir sur les surfaces. Néanmoins, elles ne sont pas suffisantes. Vis-à-vis de la surface, une<br />
solution d’enzymes ne montre pas d’activité détergente supérieure à celle de l’eau de réseau. Il est donc<br />
nécessaire de les formuler pour pouvoir observer le bénéfice apporté par ces molécules. Cependant, si la<br />
présence de composés détergents favorise leur activité, il semble en être autrement en présence de<br />
principes actifs antimicrobiens.<br />
II. OBSERVATION EN MILIEU HOMOGENE SUR LA PROTEINE PRION<br />
L’addition d’enzymes dans les produits nettoyants et/ou pré-désinfectants est devenue courante<br />
puisqu’elle permet d’améliorer considérablement les performances des formulations. Dans le cadre des<br />
maladies à prions, l’efficacité du nettoyage est un enjeu majeur pour limiter les risques de transmission.<br />
Compte tenu de la synergie observée précédemment entre les protéases et la formulation vis-à-vis des<br />
protéines adsorbées, il parait important d’optimiser l’activité enzymatique vis-à-vis de la protéine prion.<br />
Les techniques surfaciques mises en œuvre précédemment ne pouvant être appliquées spécifiquement aux<br />
risques prions, nous proposons d’étudier l’activité enzymatique des formulations en milieu liquide. Cette<br />
approche nous permettra de déterminer l’influence des facteurs chimiques et physiques sur la dégradation<br />
enzymatique de la PrP. Nous montrerons également l’effet antagoniste du principe actif antimicrobien sur<br />
l’activité enzymatique de la formulation Aniosyme N2.<br />
II.1. Optimisation de l’activité enzymatique de l’Aniosyme N2<br />
Compte tenu de son efficacité dans les procédés de nettoyage et de son activité enzymatique, il est<br />
opportun de s’intéresser à la formulation Aniosyme N2 pour chercher à optimiser cette activité<br />
enzymatique. Nous étudierons essentiellement deux types de facteurs pouvant influer sur son activité<br />
enzymatique : les facteurs chimiques et physiques. Ces derniers, que sont la température et le pH, sont<br />
extrêmement importants puisqu’ils conditionnent l’activité enzymatique. Cependant, nos contraintes de<br />
travail sont définies par les conditions d’utilisation des formulations (pH neutre, température ambiante).<br />
Ces deux paramètres ne seront donc étudiés, après optimisation des autres facteurs, que dans des gammes<br />
limitées de pH et de température.<br />
II.1.1. Les facteurs chimiques<br />
Dans ce travail, les facteurs chimiques représentent les molécules entrant dans la composition de<br />
l’Aniosyme N2. Dans un premier temps, et compte tenu de sa complexité, nous focaliserons notre<br />
attention sur les tensioactifs et le séquestrant. Dans un deuxième temps, nous nous intéresserons à<br />
l’incidence d’une augmentation de la concentration en enzymes sur la dégradation de la protéine prion,<br />
ainsi qu’à l’activité de différentes protéases, seules ou en association.<br />
Nous avons montré, dans la première partie de ce travail, que la protéase de la formulation Aniosyme N2<br />
pouvait agir sur la surface du matériau et que le fait d’être formulée favorisait son activité et/ou la<br />
désorption du complexe enzyme-substrat. Afin de déterminer le rôle de la formulation sur l’activité<br />
enzymatique, nous avons incubé des homogénats de cerveau de MCJs et de cerveau sain (Témoin) en<br />
présence soit de la formulation Aniosyme N2 (N2), soit de la protéase non formulée (P0,004%).<br />
Les essais contrôles sont :<br />
- L’eau du réseau (H 2 Or) servant à la dilution des formulations et de la protéase ;<br />
- L’Aniosyme N2 sans les enzymes (N2Z-) ;<br />
- L’Aniosyme N2 sans la protéase (N2P-)<br />
- La protéase à 0,8% correspondant à la quantité de protéase dans l’Aniosyme N2 concentré.<br />
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