MR thèse 2006-21 - Bibliothèque Ecole Centrale Lyon

Chapitre IV – Les Protagonistes de la Détergence
peuvent agir sur les surfaces. Néanmoins, elles ne sont pas suffisantes. Vis-à-vis de la surface, une
solution d’enzymes ne montre pas d’activité détergente supérieure à celle de l’eau de réseau. Il est donc
nécessaire de les formuler pour pouvoir observer le bénéfice apporté par ces molécules. Cependant, si la
présence de composés détergents favorise leur activité, il semble en être autrement en présence de
principes actifs antimicrobiens.
II. OBSERVATION EN MILIEU HOMOGENE SUR LA PROTEINE PRION
L’addition d’enzymes dans les produits nettoyants et/ou pré-désinfectants est devenue courante
puisqu’elle permet d’améliorer considérablement les performances des formulations. Dans le cadre des
maladies à prions, l’efficacité du nettoyage est un enjeu majeur pour limiter les risques de transmission.
Compte tenu de la synergie observée précédemment entre les protéases et la formulation vis-à-vis des
protéines adsorbées, il parait important d’optimiser l’activité enzymatique vis-à-vis de la protéine prion.
Les techniques surfaciques mises en œuvre précédemment ne pouvant être appliquées spécifiquement aux
risques prions, nous proposons d’étudier l’activité enzymatique des formulations en milieu liquide. Cette
approche nous permettra de déterminer l’influence des facteurs chimiques et physiques sur la dégradation
enzymatique de la PrP. Nous montrerons également l’effet antagoniste du principe actif antimicrobien sur
l’activité enzymatique de la formulation Aniosyme N2.
II.1. Optimisation de l’activité enzymatique de l’Aniosyme N2
Compte tenu de son efficacité dans les procédés de nettoyage et de son activité enzymatique, il est
opportun de s’intéresser à la formulation Aniosyme N2 pour chercher à optimiser cette activité
enzymatique. Nous étudierons essentiellement deux types de facteurs pouvant influer sur son activité
enzymatique : les facteurs chimiques et physiques. Ces derniers, que sont la température et le pH, sont
extrêmement importants puisqu’ils conditionnent l’activité enzymatique. Cependant, nos contraintes de
travail sont définies par les conditions d’utilisation des formulations (pH neutre, température ambiante).
Ces deux paramètres ne seront donc étudiés, après optimisation des autres facteurs, que dans des gammes
limitées de pH et de température.
II.1.1. Les facteurs chimiques
Dans ce travail, les facteurs chimiques représentent les molécules entrant dans la composition de
l’Aniosyme N2. Dans un premier temps, et compte tenu de sa complexité, nous focaliserons notre
attention sur les tensioactifs et le séquestrant. Dans un deuxième temps, nous nous intéresserons à
l’incidence d’une augmentation de la concentration en enzymes sur la dégradation de la protéine prion,
ainsi qu’à l’activité de différentes protéases, seules ou en association.
Nous avons montré, dans la première partie de ce travail, que la protéase de la formulation Aniosyme N2
pouvait agir sur la surface du matériau et que le fait d’être formulée favorisait son activité et/ou la
désorption du complexe enzyme-substrat. Afin de déterminer le rôle de la formulation sur l’activité
enzymatique, nous avons incubé des homogénats de cerveau de MCJs et de cerveau sain (Témoin) en
présence soit de la formulation Aniosyme N2 (N2), soit de la protéase non formulée (P0,004%).
Les essais contrôles sont :
- L’eau du réseau (H 2 Or) servant à la dilution des formulations et de la protéase ;
- L’Aniosyme N2 sans les enzymes (N2Z-) ;
- L’Aniosyme N2 sans la protéase (N2P-)
- La protéase à 0,8% correspondant à la quantité de protéase dans l’Aniosyme N2 concentré.
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