PCEM1 CAHIER D'EXERCICES de BIOCHIMIE 4. Biologie ...

Cahier d'Exercices de Biochimie / PCEM1 Biologie Moléculaire / 16
5.8.4. En adoptant la même représentation que celle du gène de l’enzyme E, représentez la
structure du transcrit primaire, celle de l’ARNm et celle d’un ARNm qui résulterait
d’un épissage alternatif de votre choix
Pour chacune des trois molécules, positionnez s’il y lieu, la coiffe et la queue polyA, en
abrégé.
5.8.5. a) Quel est le nom de la molécule complète qui constitue la coiffe
b) Quel est le nom de chacune des molécules simples qui composent la coiffe
c) Citez deux fonctions de la coiffe
5.8.6. Que signifie polyA
5.8.7. Quelle est la taille totale des séquences codantes du gène qui code l’enzyme E
5.8.8. Quel est le nombre d’acides aminés de l’enzyme E
5.8.9. Compte tenu des éléments dont vous disposez sur le schéma, quelle est la séquence
d’acides aminés en N-et en C-terminal de la protéine
5.8.10. Une paire d’amorces correspondant aux deux séquences nucléotidiques indiquées sur
le schéma, est utilisée pour réaliser une amplification par PCR, d’ADN complémentaire
(ADNc).
a) Pouvez-vous utiliser l’ADNc de n’importe quel tissu de l’organisme (entourez)
Justifiez en une phrase votre réponse
Quelle est la taille attendue du fragment amplifié
b) Pour réaliser la PCR, quels sont les réactifs que vous devez ajouter au milieu qui contient
déjà l’ADNc à amplifier et les amorces
c) Combien de températures différentes utiliserez-vous pour chaque cycle de PCR
5.8.11. Vous analysez la séquence de l’extrémité 3’ du
premier exon par méthode enzymatique. Vous disposez
pour cela de l’ADN complémentaire et d’une amorce
simple brin ATg gCA
a) Indiquez le nom complet et le nom abrégé (entre
parenthèses), du nucléotide spécifique qui a été utilisé
pour réaliser la réaction de séquençage dont le produit a
été déposé dans chacun des 4 puits du gel
d’électrophorèse représenté ci-dessous (voir b)
b) Représentez l’emplacement attendu des bandes sur le
gel d’électrophorèse (en noircissant les cases
correspondantes)
5.9. Un gène de 10 kilobases (Kb) a subi une mutation au niveau d’un seul nucléotide :
remplacement d’une cytosine par une guanine. On cherche à identifier la mutation en
soumettant le gène normal et le gène muté à l’action d’une série d’ endonucléases de
restriction (étudiées indépendamment). Après électrophorèse en gel d’agarose, on
obtient les résultats suivants exprimés en kb
(précision de la méthode + 0,05 kb)
Enzyme utilisée Spécificité Gène normal Gène muté
EcoR I GAATTC 7,4+2,6 7,4+2,6
Bgl II AGATCT 10 10
Pst I CTGCAG 6+4 10
Sac I GAGCTC 10 6+4
a- Quelles sont vos conclusions en ce qui concerne l’effet de chaque enzyme sur
chaque gène
b- A la lumière de ces conclusions, reconstituez une séquence de 9 nucléotides en
précisant le siège de la mutation.
Faculté de Médecine Pierre & Marie Curie