PCEM1 CAHIER D'EXERCICES de BIOCHIMIE 4. Biologie ...

Cahier d'Exercices de Biochimie / PCEM1 Biologie Moléculaire / 14
5.5 Vous voulez étudier un fragment d'ADN de 536 paires de base correspondant à la région
régulatrice située en amont (5') du gène de votre protéine favorite. Cette séquence est la
suivante :
Brin sens :
5' GATTCAGGAGATTCACAC - - 500 nucléotides - - TCGGTACAGCTATACAGG 3'
Brin antisens:
3' CTAAGTCCTCTAAGTGTG - - 500 nucléotides - - AGCCATGTCGATATGTCC 5'
5.5.1 Parmi les 8 amorces suivantes quelles sont les 2 amorces (à désigner par leurs
lettres) qui permettront l'amplification par PCR de ce fragment
a) 5' GATTCAGGAGATTCACAC 3'
b) 5' CTAAGTCCTCTAAGTGTG 3'
c) 5' CACACTTAGAGGACTTAG 3'
d) 5' TCGGTACAGCTATACAGG 3'
e) 5' AGCCATGTCGATATGTCC 3'
f) 5' GTGTGAATCTCCTGAATC 3'
g) 5' CCTGTATAGCTGTACCGA 3'
h) 5' GGACATATCGACATGGCT 3'
5.5.2 Décrire brièvement mais précisément les différents ingrédients requis et le principe
de base de cette méthode de PCR.
5.5.3 Quelle expérience simple vous permettra de savoir si l'amplification spécifique de
votre fragment a réussi.
5.6 Les ARN extraits du cytosol de différents tissus sont analysés par la technique dite du
"Northern" en utilisant comme sonde un oligonucléotide correspondant à une partie du
premier exon du gène de la calcitonine (hormone hypocalcémiante).
Thyroïde Cerveau Foie Rein Muscle Rate
Sens de
migration
a. Interprétez cette image en indiquant les différentes hypothèses possibles.
b. Lorsque la même expérience est réalisée sur des ARN nucléaires de thyroïde ou de
cerveau, on observe surtout des bandes très faibles et diffuses, de plus haut poids
moléculaire qu'en partant d'ARN cytosolique. A quoi correspondent-elles
5.7 La question porte sur un gène codant une protéine humaine synthétisée exclusivement par
le foie.
Vous devez étudier un segment d’ADN codant de ce gène, dont la séquence la plus
fréquente dans la population générale est la suivante:
Faculté de Médecine Pierre & Marie Curie
5’ ACT AAG GCA AAA TTC CGA GAG GCC CTA GAA GAT ACA CGA 3’
La première étape de l’étude va consister à amplifier, à partir de l’ADN génomique, la
totalité de ce segment par PCR (Réaction de Polymérisation en Chaîne).
5.7.1 Pouvez-vous utiliser indifféremment l’ADN extrait de cellules sanguines, de la peau,
du foie ou d’autres tissus pour cette étude
5.7.2 Vous devez synthétiser des amorces oligonucléotidiques dont la longueur vous est
imposée: chacune d’elles doit comporter 9 nucléotides.
Compte tenu de cet impératif, donnez la séquence de chacune des amorces.