PCEM1 CAHIER D'EXERCICES de BIOCHIMIE 4. Biologie ...

Cahier d'Exercices de Biochimie / PCEM1 Biologie Moléculaire / 13
5.4 Diagnostic d'une maladie génétique
5.4.1- Au cours de l’exploration d’une famille atteinte d’hypercalcémie hypocalciurique
familiale, des mutations inactivatrices du récepteur sensible au calcium, (responsables
d’une augmentation du niveau de
calcémie à partir duquel la sécrétion de
PTH et la réabsorption du calcium par le
tubule rénal sont inhibées) ont été
mises en évidence par la technique de
séquençage de Sanger chez un sujet
atteint de la maladie.
a. En comparant les gels de
séquence ci-contre d’un sujet
normal et d’un patient atteint,
dites où est située la mutation
b. De quel type est-elle
c. Quel est le mode probable de
transmission de cette maladie
5.4.2 Pour rechercher la mutation chez les apparentés du sujet étudié, une étude par PCR-
RFLP a été pratiquée.
a. Quel est le principe de cette méthodeet son intérêt par rapport au southern
blot
b. Avec la séquence mutée apparait un site supplémentaire de digestion par l’enzyme de
restriction BslI qui coupe le palindrome (imparfait) suivant :
5’ CCnnnnn/nnGG 3’
n= nucléotide indéterminé
Fragment d’ADN amplifié de 504 pb:
"/"= site de coupure.
Séquence normale :
L’amplification par PCR de
l’exon concerné du gène du
récepteur du calcium, conduit à
l’obtention d’un fragment de 504
paires de bases. Ce fragment est
soumis ensuite à une digestion
par BslI qui génère différents
types de fragments (cf. schéma).
Séquence mutée :
Bsl I
Bsl I
87 pb 313 pb
104 pb
Bsl I
Bsl I
Bsl I
87 pb 133 pb 180 pb
104 pb
Sur l’arbre généalogique ci-contre
est représenté le résultat de la
migration sur gel d’agarose de ce
produit de PCR, non digéré puis
digéré par BslI, issu de
l’amplification de l’ADN
génomique des individus A, B, C
et D.
Lesquels de ces sujets
présentent la mutation
615 bp
492 bp
369 bp
A
B
C
D
246 bp
123 bp
Faculté de Médecine Pierre & Marie Curie