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VIRAPID ® MONO M&G
Chacune des bandelettes comprend également une ligne témoin qui permet
de valider l’essai. Cette ligne doit toujours apparaître, même lorsque
l’échantillon est négatif. Aussi bien sur la partie M que sur la G, la ligne
témoin est constituée d’un anticorps secondaire contre l’une des protéines
du conjugué.
VR001: Test immunochromatographique pour le dépistage qualitatif du
marqueur du virus d’Epstein-Barr (EBV), dans le sérum/plasma citraté
humain. 25 tests.
INTRODUCTION:
Le test VIRAPID ® MONO M&G fait appel à une réaction immunochromatographique
qui permet la détection qualitative de quatre marqueurs
sérologiques du virus d’Epstein-Barr (EBV), deux du type IgM, VCA et
hétérophiles, et deux du type IgG, VCA et EBNA. Ce test, à usage
professionnel, constitue une aide au diagnostic de la mononucléose
infectieuse sur des échantillons de sérum et de plasma citraté.
Le virus Epstein-Barr (EBV) appartient à la famille de l’herpès et est un
des virus humains les plus communs. Ce virus existe dans le monde entier
et la plupart des persomnnes en sont infectés au moins une fois dans leur
vie. En général, 95% des adultes agés de 35 à 40 ans ont été infectés. La
mononucléose infectieuse est la maladie la plus commune provoquée par le
virus Epstein-Barr (EBV) et peut être une source de fièvre, d’adénopathie,
de splénomégalie et de pharyngite. Certains de ces cas peuvent être
provoqués par des cytomégalovirus, Toxoplasma gondii, adénovirus, etc.
L’EBV produit en outre des syndrômes prolifératifs chez les
immunodéprimés et l’infection à EBV est associée à la pathogénèse du
lymphôme de Burkitt et du carcinôme du rhinopharynx. Plusieurs anticorps
dirigés contre ces complexes d’antigène peuvent être mesurés pour détecter
le virus Epstein-Barr. Ces antigènes sont l’antigène de capside viral
(VCA), l’antigène précoce (EA) et l’antigène nucléaire de l’EBV (EBNA).
La présence des anticorps anti-VCA IgM et l’absence des anticorps EBNA
orientent vers une infection primaire à l’EBV.
Une augmentation ou des taux élevés en anticorps anti-VCA IgG et une
absence d’anticorps anti-EBNA indiquent une infection ancienne.
De plus, 80% des patients avec une infection active à EBV produissent des
anticorps EA. La présence simultanée des anticorps anti-VCA IgG et anti-
EBNA IgG indique une infection passée (infections datant de 4 à 6 mois ou
même antérieure). Etant donné que 95% des adultes ont été infectés par le
virus EBV au moins une fois, la plupart des adultes présente des anticorps
anti-EBV venant des infections passées. Des taux élevés d’anticorps
peuvent être présents pendant plusieurs années n’indiquent pas
nécessairement une infection récente.
D’après la littérature, les sérums de patients atteints de mononucléoses
infectieuses contiennent des anticorps, dits anticorps hétérophiles, qui
réagissent face aux hématies d’autres espèces animales. Les protéines
responsables de cette agglutination sont des glycoprotéines issues des
membranes des érythrocytes dénommées antigènes de Paul-Bunnell. Ces
anticorps sont développés par 80-85% des patients adultes et adolescents,
et ils atteignent des valeurs importantes au cours du premier mois de
l’infection; leur détection a une forte valeur diagnostique.
PRINCIPE DU TEST:
Lorsque l’on ajoute l’échantillon, puis la solution révélatrice (VIRCELL
DEVELOPER SOLUTION), dans chacun des puits de la double cassette,
l’or colloïdal se solubilise et il se produit la première réaction
immunologique entre les anticorps spécifiques du sérum/plasma citraté et
la protéine porteuse des particules d'or.
La partie M contient deux conjugués, l’un avec l’Antigène de Paul-Bunnell
(purifié, à partir d’hématies bovines) et l’autre avec l’antigène EBV p18.
Ces protéines reconnaissent, respectivement, les anticorps hétérophiles de
Paul-Bunnell (PB HA) et les anticorps contre la capside de l’EBV. La
partie G contient un seul conjugué, qui est préparé avec un anticorps
secondaire anti IgG humain.
Après la première réaction, les complexes migrent à travers la membrane
jusqu’aux lignes de réaction (Lignes test) correspondantes. Pour l’essai M,
la première ligne correspond aux anticorps IgM de VCA, et contient de
l’anti-IgM humaine. La seconde ligne test contient, de nouveau, l’antigène
de Paul-Bunnell. Dans la partie G, les deux lignes sont, respectivement, de
Tampon de
prélèvement
Analyte à détecter
Écoulement
CARACTÉRISTIQUES DE LA TROUSSE:
La trousse VIRAPID ® MONO M&G détecte, au cours d’un même essai,
les 4 marqueurs sérologiques les plus importants utilisés pour le diagnostic
de la mononucléose infectieuse causée par le virus EBV. Ce test peut être
réalisé en quelques minutes à l’aide d’une micropipette et d’un
chronomètre, et ses résultats lus à l’œil nu.
Nous recommandons de lire attentivement le chapitre «Recommandations
et précautions».
COMPOSITION DU COFFRET:
1 VIRCELL MONO M&G CASSETTE: 25 cassettes pour la détection
spécifique des marqueurs du virus d’Epstein-Barr (EBV).
2 VIRCELL MONO M&G DEVELOPER SOLUTION: 4 ml de solution
tamponnée. Contient de l’azide de sodium.
Conserver à 2-30ºC. Ne pas utiliser au-delà de la date de péremption.
Matériel nécessaire non fourni:
Micropipettes automatiques et les embouts correspondants
Chronomètre
CONSERVATION:
Conserver à température ambiante ou réfrigéré, de 2 à 30ºC. NE PAS
CONGELER.
Ne pas utiliser les éléments de la trousse après la date de péremption. La
date de péremption indiquée est valable à condition que les éléments soient
conservés fermés, entre 2 et 30ºC.
STABILITÉ DES RÉACTIFS APRÈS OUVERTURE:
RÉACTIF
VIRCELL CASSETTE
Autres éléments
Tampon de
conjugué
Ligne test
Membrane en
nitrocellulose
Ligne de
contrôle
STABILITÉ
Utiliser dans l’heure suivant l’ouverture
Conserver à 2-30ºC et utiliser jusqu’à la
date de péremption
STABILITE ET MANIPULATION DES REACTIFS:
La trousse est stable jusqu’à la date de péremption à 2-30ºC.
Employer tous les réactifs dans des conditions aseptiques pour éviter toute
contamination microbienne.
VIRCELL, S.L. dégage toute responsabilité en cas d’utilisation
inappropriée des réactifs inclus dans la trousse.
RECOMMANDATIONS ET PRECAUTIONS:
Tampon absorbant
1. Usage in vitro uniquement. Usage professionnel uniquement.
l’antigène EBV p18 et de l’antigène EBNA.
USAGE IN VITRO UNIQUEMENT
Fabricant: VIRCELL, S.L. Pza. Domínguez Ortiz 1. Polígono Industrial Dos de Octubre.18320 Santa Fe *GRANADA* ESPAGNE* Tel.+34.958.441264* Fax+34.958.510712
http://www.vircell.com

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2. Utiliser uniquement les réactifs du coffret. Ne pas intervertir
VIRCELL CASSETTES et VIRCELL DEVELOPER SOLUTION
entre les lots et les coffrets.
3. Traiter les échantillons comme s’ils étaient infectieux, selon des
procédures de sécurité du laboratoire.
4. Utiliser des gants de protection jetables, des blouses de laboratoire et
une protection oculaire lors de la manipulation des échantillons. Se
laver soigneusement les mains après la manipulation des échantillons.
5. Ne pas utiliser la trousse au-delà de la date de péremption.
6. L’ensemble du matériel doit être jeté conformément à la législation
en vigueur.
7. Les éléments de ce coffret peuvent contenir des substances d’origine
animale et/ou humaine. Bien que non infectieux, ce matériel doit être
manipulé comme étant potentiellement infectieux. Tout le matériel
doit être manipulé et jeté comme potentiellement infectieux.
Respecter la législation locale en matière de déchets médicaux.
8. La solution révélatrice contient de l’azide de sodium. L’azide de
sodium peut réagir avec les tuyauteries métalliques et produire des
composants explosifs. Veiller à faire couler un grand volume d’eau
lors du rejet de la solution.
9. Si le test ou des éléments de celui-ci (cassettes ou solution
révélatrice) sont stockés au réfrigérateur, il faut les laisser atteindre la
température ambiante avant de les employer.
10. Les cassettes restent stables dans leurs sachets (non ouverts) jusqu’à
la date de péremption indiquée sur l’étiquetage. N’ouvrir le sachet
que lorsque l’utilisation des cassettes est imminente.
11. Il est possible de réaliser plusieurs tests en même temps.
12. Pour éviter toute contamination, veillez à éviter tout contact entre
l’embout du flacon de solution révélatrice et le puits de l’échantillon.
13. IMPORTANT: La taille des gouttes de solution révélatrice doit être
correcte. Pour ce faire, presser légèrement le flacon, et laisser l’air
pénétrer entre deux échantillons.
14. Éviter d’employer des échantillons ayant été soumis à de nombreux
cycles de congélation-décongélation, ainsi que les échantillons
hémolysés. Dans les deux cas, cela peut donner lieu à des résultats
erronés (perte significative du signal) ou à des problèmes de lecture
imputables à un manque de visibilité.
CONTRÔLE DE QUALITÉ INTERNE:
Chaque lot est soumis à un contrôle de qualité interne avant d’être
commercialisé, afin d’assurer le respect des spécifications les plus strictes.
Les résultats du contrôle final de chaque lot sont disponibles.
INTERPRETATION DES RÉSULTATS ET PROCEDURE DE
VALIDATION NOTICE D’UTILISATION:
Pour la lecture des résultats et la détermination du caractère positif d’un
échantillon, on emploiera une carte-guide d’intensités, incluse dans la
trousse. On y distingue quatre niveaux colorimétriques de réponse, depuis
0.5 jusqu’à 3. Si l’intensité de la ligne test est inférieure à 0.5, l’échantillon
doit être considéré négatif; il doit être jugé positif lorsque la couleur de la
bande est égal ou plus intense que cette valeur.
La ligne témoin doit toujours être positive et lisible lorsque le test a été
réalisé correctement. Si cette ligne n’apparaît pas, le test doit être considéré
invalide.
Lorsque l’échantillon contient des anticorps spécifiques de chaque
conjugué, les lignes tests correspondantes révèleront une réaction positive.
Un sérum/plasma citraté sera jugé positif en cas d’apparition d’une ou
plusieurs des lignes tests, en plus de la ligne témoin.
L’interprétation des résultats devra se faire en tenant compte du tableau
suivant:
Ligne témoin
1ª Ligne test: VCA IgM
Ligne témoin
2ª Ligne test: PB HA 2ª Ligne test: EBNA IgG
1ª Ligne test: VCA IgG
PRELEVEMENT ET TRAITEMENT DE L’ECHANTILLON:
Le sang veineux doit être prélevé asceptiquement par du personnel
qualifié. L’emploi de techniques stériles ou aseptiques est recommandé
pour éviter la contamination de l’échantillon. Les échantillons de sérum
doivent être stockés à 2-8ºC ou congelés à -20ºC si le test ne peut pas être
effectué dans les sept jours. Eviter les congélations et décongélations
répétées. Ne pas utiliser de sérum hyperlipidique, hémolysé ou contaminé.
Les échantillons troubles contenant des débris, doivent être centrifugés.
PREPARATION DES REACTIFS:
Tous les réactifs fournis sont prêts à l’usage.
PROCEDURE:
1.-Sortir tous les réactifs 1 heure avant de réaliser le test, pour leur
permettre d’atteindre la température ambiante, mais éviter de sortir la
cassette de son conditionnement.
2.-Ouvrir le sachet et placer la cassette 1 sur une surface plane.
3.-À l’aide d’une micropipette automatique, distribuer dans chaque puits
40 µl d’échantillon, en commençant toujours par le test M. Attendre que la
goutte soit bien absorbée.
4.-Ajouter deux gouttes de solution révélatrice 2 dans chacun des puits. Ne
pas attendre plus de cinq minutes après avoir ajouté l’échantillon.
5.-Lire les résultats au bout de 10 à 20 minutes.
Ne pas tenir compte d’une mesure effectuée après plus de 30
minutes.
PB
HA
Anticorps anti EBV
VCA- VCA-
IgM IgG
EBNA
-IgG
- - - -
+/-* + +/- -
- - + +/-***
+/- + + +
+ - - -
Détection d´anticorps
EBV IgM
Cas
Pas
d’infection
Infection
récente**
Infection
antérieure
Infection
primaire
tardive
Non
concluant
Détection d´anticorps
EBV IgG
Interprétation
Il n’y a pas eu de contact avec EBV
*Les enfants âgés de moins de 4 ans
et 20% des adultes ne développent
pas d’anticorps hétérophiles.
**Si l’on n’obtient que le VCA-M
positif, il est recommandé
d’effectuer un nouveau test sur un
second échantillon après 1-2
semaines.
***
Lorsque EBNA-G apparaît positif,
cela correspond à une infection
antérieure latente sans preuve
d’infection récente.
Lorsque le résultat de l’EBNA-G
apparaît négatif, il peut s’agir d’un
faux négatif de EBNA-G, et il est
donc conseillé de vérifier ce résultat
à travers d’autres techniques.
Infection antérieure avec des niveaux
d’IgM encore détectables
Analyser un second échantillon et
/ou utiliser d’autres techniques.
Tableau.: Interprétation des marqueurs sérologiques de la mononucléose causée par l’EBV.
HA: Anticorps hétérophiles.
USAGE IN VITRO UNIQUEMENT
Fabricant: VIRCELL, S.L. Pza. Domínguez Ortiz 1. Polígono Industrial Dos de Octubre.18320 Santa Fe *GRANADA* ESPAGNE* Tel.+34.958.441264* Fax+34.958.510712
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En cas de résultat EBNA-G positif et VCA-G négative il est conseillé de
refaire le test et/ou d’employer d’autres techniques.
LIMITES DU TEST:
1.-Cette trousse est destinée à une utilisation sur sérum/plasma citraté
humains.
2.-Lire la notice soigneusement et appliquer strictement la procédure pour
obtenir des résultats fiables.
3.-Ce test n’est pas indicatif du site d’infection et n’est pas destiné à
remplacer le test d’isolement.
4.-Comme tout autre test diagnostic, les résultats doivent être évalués sur la
base de toutes les données cliniques et de laboratoire. Les résultats doivent
être interprétés avec les données cliniques et d’autres tests diagnostiques.
5.-Les résultats du test sont qualitatifs. Il n’existe pas de corrélation entre
l’ordre de grandeur du résultat positif et le titre en anticorps dans
l´échantillon.
6.-Ce test a été vérifié pour être utilisé avec des sérum/plasma citraté
humains. Il n’a pas été vérifié avec d’autres types d’échantillon.
7.-La fiabilité des résultats dépendra de la réalisation correcte du
prélèvement d’échantillons, du transport, du stockage et des procédures de
traitement.
8.-Un résultat négatif n’exclut pas la possibilité d’infection.
9.-Un test positif n’exclut pas la possibilité de présence d’autres agents
pathogènes.
10.-Les patients souffrant d’infections par cytomégalovirus peuvent
produire des faux positifs au virus d’Epstein-Barr.
11.-Les sérums de patients immunodéprimés peuvent produire de faux
résultats négatifs.
12.-D’autres maladies (cytomégalovirus, toxoplasmose, adénovirus,
rubéole) produisent des syndrômes similaires à la mononucléose
infectieuse et doivent être écartées au cas où l’on soupçonne ce syndrôme.
13.-Les caractéristiques de fonctionnement n’ont pas été étudiées chez les
patients atteints de carcinôme nasopharyngé, de lymphôme de Burkitt et de
maladies associées à l’EBV autres que la mononucléose infectieuse.
14.-Etant donné que 95% des adultes ont été infectés par le virus EBV au
moins une fois, la plupart des adultes présente des anticorps anti-EBV
venant des infections passées. Des taux élevés d’anticorps peuvent être
présents pendant plusieurs années n’indiquent pas nécessairement une
infection récente.
15.-L’absence d’anticorps hétérophiles est fréquente chez les enfants.
16.-Chez certains individus, la présence d’anticorps hétérophiles peut se
prolonger pendant plusieurs mois.
17.-Chez certains patients ayant subi une infection antérieure, on obtient
une réponse IgG face à VCA, mais aucune réponse face à EBNA. Afin de
s’assurer qu’il ne s’agit pas de cas aigus, il est recommandé d’employer
des techniques alternatives.
PERFORMANCES
Des résultats similaires ont été observés dans tous les essais.
PRECISION INTER-ASSAY:
3 échantillons (l’un positif proche de la limite de détection pour chaque
test et l’autre négatif) ont été testés individuellement pendant 3 jours de
suite par 2 opérateurs différents.
Des résultats similaires ont été observés dans tous les essais.
REACTIONS CROISEES ET INTERFERENCES:
Certains sérums contenant une forte concentration de facteur rhumatoïde
peuvent donner lieu à des résultats faux positifs pour le test IgM de VCA.
46 échantillons positifs pour le facteur rhumatoïde (FR égal ou supérieur à
2+ sur latex disponible dans le commerce) ont été testés, dont 19 ont
produit un faux positif avec Virapid ® VCA M.
Tous les VCA M faux positifs pour le FR ont été négatifs pour les AH et
positifs dans la partie G du test, minimisant le risque de diagnostic
incorrect.
SYMBOLES UTILISES SUR LES ETIQUETTES:
x
∑
x
y
Usage in vitro
Utiliser avant le: (date de péremption)
Conserver à x-yºC
Contient la quantité suffisante pour tests
Numéro de lot
Code produit
Consulter la notice d’utilisation
Résultat négatif
Résultat positif: Faible intensité
Résultat positif: Forte intensité
Carte-guide d’intensités pour VIRAPID ®
RESUME DE LA PROCEDURE
SENSIBILITÉ ET SPECIFICITÉ:
390 échantillons ont été analysés à l’aide d’un réactif commercial en
ELISA pour la ligne VCA-G.
390 échantillons ont été analysés à l’aide d’un réactif commercial en
ELISA pour la ligne EBNA-G.
197 échantillons ont été analysés à l’aide d’un réactif commercial en
ELISA pour la ligne VCA-M.
197 échantillons ont été analysés à l’aide d’un test d’agglutination
commercial pour la ligne PB.
Les résultats sont les suivants:
Ligne test Sensibilité (%) Spécificité (%)
VCA-M 91 97
PB 94 99
VCA-G 92 95
EBNA-G 91 92
PRECISION INTRA-ASSAY:
3 échantillons (l’un positif proche de la limite de détection pour chaque
test et l’autre négatif) ont été testés 5 fois dans un seul essai réalisé par le
même opérateur dans des conditions de travail identiques.
Ajouter 40 µl
de
prélèvement
dans chaque
puits
BIBLIOGRAPHIE :
Ajouter 2
gouttes de
solution
révélatrice
Résultats de
la lecture
1. Bruu, A. L., R. Hjetland, E. Holter, L. Mortensen, O. Natas, W.
Petterson, A. G. Skar, T. Skarpaas, T. Tjade, and B. Asjo. 2000. Evaluation
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Responses. Pediatric, vol. 75, nº 6, June 1985, 1011-1019.
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REVISION: Mai-10
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