Verticillium - Toubkal

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4. Estimation de l’effet du sel sur la croissance de Verticillium
4.1. Croissance diamétrale
Les cultures sont examinées régulièrement, tous les jours. Les mesures des
moyennes des deux diamètres perpendiculaires de chaque colonie sont faites tous
les 5 jours. Le test a duré 20 jours.
4.2. Croissance pondérale
Bien que la croissance diamétrale soit la méthode la plus utilisée pour estimer
l’effet d’un facteur de l’environnement sur un champignon, elle reste toutefois
insuffisante car elle ne tient pas compte de la densité des filaments mycéliens ni du
taux de la croissance spécifique. Pour palier à cette lacune, le poids sec du
mycélium a été examiné comme un autre paramètre de la croissance pour estimer
l’effet de la salinité sur le développement de Verticillium.
Après trois semaines d’incubation, les cultures liquides de Verticillium sont filtrées
sur mousseline. Le mycélium recueilli est lavé deux fois à l’eau distillée, puis essoré
entre plusieurs couches de papier filtre avant d’être séché à 80°C pendant 24
heures. Le poids sec du mycélium (mg) est ensuite déterminé.
5. Effet sur l’intensité de la conidiogénèse
Sur les boîtes ayant déjà servi pour l’étude de la croissance des colonies, dix
rondelles de 5 mm de diamètre sont découpées à l’emporte pièce à 2mm environ
du front de la croissance de chaque thalle. Elles sont ensuite placées dans un tube à
vis contenant 10 ml d’eau stérile. Les tubes sont agités au vortex pendant 20
secondes, ce qui permet l’éclatement des sphérules portées par les conidiophores
et la libération des conidies. Le contenu de chaque tube est ensuite filtré sur
mousseline afin d’éliminer les fragments mycéliens et les morceaux de gélose. Le
comptage du nombre total des conidies libérées par les dix rondelles est effectué
avec un hématimètre ( cellule de Malassez) à raison de 5 comptages par suspension
et de 10 boîtes par traitement salin. Les résultats sont exprimés en nombres de
conidies par unité de surface (cm 2 ).