Verticillium - Toubkal

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arrosées avec une solution enrichie en NaCl. En fin d’expérience, le champignon a
été ré-isolé d’une plante montrant des symptômes caractéristiques de
rabougrissement. Cet isolat fut nommé P80 et a été utilisé dans tous nos essais.
Le champignon est cultivé en boîte de Pétri sur milieu PDA ou milieu Malt gélosé,
à l’obscurité et à 24± 1° C.
Le clone P80 est caractérisé par un mycélium blanchâtre d’aspect cotonneux et une
sclérogénèse abondante apparaissant après 6 à 7 jours de culture. Il est très
agressif sur la variété Marmande Claudia sensible mais aussi sur la variété
Marmande VR possédant le gène Ve de la résistance. Il a été identifié donc comme
appartenant à la race 2 de Verticillium.
2. Ensemencement
Les cultures liquides sont réalisées dans des fioles de 250 ml à raison de 100 ml
par fiole. Elles sont ensemencées avec 1 ml d’une suspension de spores à 10 6
spores /ml fraîchement préparée à partir d’une culture de Verticillium âgée de 12
jours.
Les cultures solides, conduites sur boites de Pétri, sont ensemencées avec des
rondelles de 4 mm de diamètre préalablement découpées à l’emporte pièce dans la
zone de croissance active d’une culture âgée de deux semaines et présentant
l’aspect caractéristique du type sauvage. Les thalles montrant des secteurs hyalins
sont systématiquement écartés. Les boutures sont déposées au centre de la boîte et
à l’envers pour que le champignon soit en contact direct avec le milieu de culture.
Les boîtes sont fermées avec un ruban de parafilm pour éviter tout changement
dans la pression osmotique du milieu par une éventuelle perte d’eau. Toutes les
cultures sont mises à incuber à l’obscurité et à 24 ± 1°C.
3. Traitement par le sel
Les cultures fongiques sont conduites sur milieu à base d’extrait de malt liquide ou
gélosé (2%) enrichi de chlorure de sodium à différentes concentrations 0 ; 5 ; 10 ;
15 ; 20 ; 30 ; 40 ; 50 ; 60 ; 80 et 100g/l selon le type d’expérience. Dix répétitions
sont prévues pour chaque traitement salin.