Verticillium - Toubkal
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B. Préparation des gels<br />
1. Gel de séparation à 10% d’acrylamide<br />
Mélanger dans une fiole à vide de 500ml :<br />
Protogel<br />
16.7ml<br />
Tris-Cl 1.5M<br />
12.5ml<br />
SDS<br />
0.5ml<br />
H2O<br />
19.5ml<br />
Ajouter goutte à goutte<br />
Persulfate d’ammonium 500µl<br />
TEMMED 20µl<br />
Dégazer sous vide jusqu’à disparition complète des bulles. Couler immédiatement<br />
le gel avec une pipette de 5ml. Mettre un mince filet d’eau à la surface du gel pour<br />
éviter toute évaporation<br />
2. Gel de concentration (Staking) à 5%<br />
Mélanger dans une fiole à vide de 250ml<br />
Protogel<br />
1.7ml<br />
Tris-HCl 1M 1.25ml<br />
SDS<br />
0.1ml<br />
H2O<br />
6.8ml<br />
Mélanger et dégazer sous vide comme précédemment. Pendant ce temps, éliminer<br />
l’eau à la surface du gel de séparation. Rincer trois fois avec le tampon Tris-HCl 1M<br />
dilué au ¼. Eliminer le maximum de tampon avec du papier Joseph.<br />
Après dégazage, ajouter<br />
Persulfate d’ammonium 100µl<br />
TEMED 10µl<br />
Couler sur le gel précédent avec une pipette de 1ml. S’assurer de la polymérisation<br />
du gel dans le liquide qui reste dans la fiole.<br />
Placer le peigne entre les deux plaques de verre pour former les puits. Après<br />
polymération du gel, le peigne est enlevé et les puits sont rincés.<br />
C. Préparation des extraits avant dépôt<br />
1. Solution de traitement des échantillons<br />
*Tampon TrisHCl 0.5M 1.25ml
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