Verticillium - Toubkal

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216 ANNEXES ANNEXE 1 : Milieux de culture et solution d’arrosage - Milieu PDA : *PDA (Difco) 40g *Gélose 5g *Eau distillée 1L Autoclaver à 110°c pendant 30 minutes - Milieu Malt *Extrait de malt 20g *Gélose 20g *Eau distillée 1L Autoclaver à 110°c pendant 30 minutes - Milieu Czapeck liquide *NaNO3 2g *KH2 PO4 1g *MgSO4 7H2O 0.5g *KCL 0.5g *FeSO4 7H2O 0.01g *Saccharose 30g *Eau distillée 1L Autoclaver à 120°C pendant 30 minutes -Solution nutritive d’arrosage *Ca(NO3)2 4H2O 0.935g *Mg SO4 7H2O 0.544g *KH2PO4 0.181g *K2H PO4 0.058g *KNO3 0.353g *NH4 NO 0.023g *(NH4)2 SO4 0.086g *Oligo-élément (a) 0.05ml *Complexe ferrique(b) 0.5ml *Eau distillée 1000ml (a) ZnSO4 7H2o : 100mg - MmnCl2 4H2O:100mg - H3BO3 :100mg FeCl3 6H2O :50mg – CuSO4 5H2O64mg – KI:10mg NH4 MoO4 :10mg – Eau distillée qsp :1000ml (b) Dissoudre 21g de complexon II (EDTA) dans 286ml de KOH N et ajouter 24.9mg FeSO4 7H2O. Ajuster à environ 950ml avec de l’eau distillée puis agiter le tout à l’air pendant une nuit.Ajuster le pH à 5.5 avec de la potasse. Compléter à 1000ml.
217 ANNEXE 2 : Electrophorèse SDS-PAGE A. Solutions stocks Utiliser de l’eau bidistillée fraiche. Toutes les solutions doivent être filtrées sur papier Wattman n°1 après dissolution. Les pH des solutions doivent être vérifiés avant chaque utilisation 1. Solution d’acrylamide-bis : protogel *Acrylamide 30g *Bis-acrylamide 0.8g *H2O 1000ml Conserver à l’obscurité à 4°C (1 à 2 mois) 2. Tampon pour gel de séparation (resolving gel buffer) *Tris-Cl (1.5M) 36.3g *H2O qsp 200ml Ajuster le pH à 8.8 avec HCl. A conserver deux mois à 4°C 3. Tampon pour gel de concentration (Staking gel buffer) *Tris-Cl 1M 6g *H2O qsp 50ml Ajuster le pH à 6.8 avec HCl 4. Solution de SDS à 10% (Sodium dodecyl sulfate) *SDS 10g *H2O 100ml Conserver à la température ambiante plusieurs semaines. 5. tampon de migration x 5 *Tris-base 15.1g *Glycine 94g *SDS 50ml de la solution SDS à 10%. A ajouter au dernier moment. 6. Solution de persulfate d’ammonium à 10% A préparer au dernier moment *Persulfate 100mg *H2O 1ml
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