Verticillium - Toubkal

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Les cultures sont conduites en boites de Pétri sur milieu gélosé à base d’extrait de
malt et sont incubées à l’obscurité et à 24±1°C.
2. Détection des phénoloxydases.
1.2. Les réactifs
La détection des Pox a été réalisée selon la méthode de Käärik, (1965), et de Ander
& Eriksson (1976) en utilisant des solutions alcooliques (0.1M dans l’éthanol à 95°)
de l’acide gallique AG, du gaïacol GUA et de l’alpha-naphtol (NPH) comme
substrat des Pox.
La production des laccases a été recherchée selon la technique de Harkin & Obst
(1973) et de Harkin et al., (1974) : la syringaldazine SYR , en solution à 0.1% dans
l’éthanol à 95° est utilisée pour révéler la présence de laccases. En absence de ces
dernières, l’addition d’une solution aqueuse de H 2 O 2 à 0.03% permet la détection
des peroxydases.
2.2. Révélations
Des expériences préliminaires ont montré que la détection des Pox était meilleure
sur un étalement de spores que sur une colonie obtenue à partir d’une bouture.
Sur des étalements de spores des deux souches de Verticillium, âgés de 4 jours ou
de 12 jours selon le test, on dépose 4 gouttes d’un des réactifs à l’aide d’une pipette
Pasteur. La présence de Pox est révélée par l’apparition d’une coloration à l’endroit
du dépôt. La lecture est faite 24 heures après le dépôt sauf pour la syringaldazine
où la lecture est effectuée après 20 minutes. Des tests témoins sont réalisés afin de
vérifier qu’il n’y ait pas de fausses réactions positives. Ils consistent à déposer
quelques gouttes d’éthanol à 95° ou de la solution aqueuse de H 2 O 2 sur la culture.
B. Résultats
1. Influence de la salinité sur la cinétique de la production des Pox
La détection des Pox a été répétée tous les jours et durant deux semaines. Les
réactions aux différents substrats sont reportées sur le tableau 7.