Verticillium - Toubkal

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sous vide sur filtre millipore à 0.22µ. Les cinq filtrats bruts ainsi obtenus sont prêts
pour les tests de toxicité.
2. Mise en évidence de la toxicité des filtrats de culture de
Verticillium par des tests biologiques
Deux tests ont été utilisés pour évaluer la toxicité des filtrats de culture de
Verticillium. La méthode a été inspirée de celle mise au point par Payen et al.,
(1983) utilisée pour détecter les moisissures toxinogènes. Ces tests consistent à
estimer la toxicité des filtrats de culture du champignon par l’inhibition de la
croissance racinaire des graines en germination (test graine) et du développement
des plantes entières (test plante).
2.1. Test graine
2.1.1. Choix des espèces végétales
La toxinogénèse de l’isolat P80 cultivé sous différents régimes salins a été testée
sur des graines appartenant à deux espèces végétales :
- la tomate, (Lycopersicum esculentum Mill) var Marmande Claudia, plante hôte
sensible au Verticillium
- le cresson (Lepidum sativum) var alénois, dont la germination est très rapide et
constitue un test sensible pour la mise en évidence des mycotoxines ( Samane et
al., 1991). Les graines germent au bout de 24 heures en présence d’eau distillée.
2.1.2. Action des filtrats de culture sur la croissance
racinaire des graines en germination
Les graines à tester sont stérilisées et mises à germer selon le même protocole
décrit au chapitre I. Après la sortie de la radicule, des graines d’apparence
homogène sont sélectionnées et déposées sur deux couches de papier filtre imbibé
par les différents filtrats de culture à raison de 10 graines par boite de Pétri. Trois
boites sont prévues par traitement salin. Les graines témoins sont imbibées de
solution saline de même concentration que les filtrats de culture. Les boites sont
mises à incuber à l’obscurité et à 24 ± 1°C. La longueur des racines est mesurée 72