Verticillium - Toubkal

100
2.2. Matériel et méthodes
La détection de l’activité peroxydasique a été effectuée selon le protocole décrit par
Reuveni & Ferreira, (1985).
2.2.1. Préparation de l’extrait enzymatique
Des échantillons de racines de tomate Claudia pesant environ 0.5 g issus des
plantes de chaque traitement sont homogénéisés à froid dans un mortier en
présence de 5ml de tampon phosphate sodium 0.015M, pH 6. Après centrifugation
à 5000g pendant 20 minutes à 4°C, le surnageant constitue l’extrait enzymatique.
2.2.2. Mesure de l’activité de l’enzyme
L’activité peroxydasique est mesurée à température ambiante utilisant comme
substrat, le guaïacol. 50µl d’extrait sont additionnés à 3ml du mélange réactionnel
de composition suivante :
- 15mM du tampon phosphate , pH 6
- 1 mM de peroxyde d’hydrogène
- 0.1 mM de guaïacol
Le mélange enzyme–substrat est agité par inversion de la cuve et les variations de
l’absorbance à 450nm sont mesurées toutes les minutes pendant 6 minutes
d’incubation à l’obscurité, contre un extrait dépourvu d’enzyme.
Les activités peroxydasiques sont déterminées par les pentes des droites obtenues
et rapportées au poids de la matière fraîche (Absorbance à 450nm/min/g. MF)
2.3. Résultats
L’activité peroxydasique des racines des tomates différemment traitées par le sel et
par l’infection avec Verticillium a été évaluée après trois et quatre semaines de
culture.
2.3.1. Activité peroxydasique après trois semaines
Chez les plantes saines, l’activité peroxydasique augmente en fonction de la salinité
croissante du milieu (figure 27 A). Les augmentations par rapport aux témoins non
traités sont de l’ordre de 55% et 80.6 % respectivement à 60 et 90mM de NaCl.