Verticillium - Toubkal

88
de Goicoechea et al., (2000) sur le couple piment-Verticillium démontrent que les
taux de proline augmentent dans les feuilles des plantes après infection avec
Verticillium dahliae. Ces auteurs supposent que ces substances organiques
peuvent être des détecteurs des dommages causés par l’infection fongique.
A la lumière de ces données, nous avons été incités à suivre l’évolution des taux de
proline chez les tomates à la suite de leur exposition aux stress de la salinité et de
l’infection verticillienne.
2. Matériel et méthodes
La détermination de la proline est réalisée selon la méthode colorimétrique de
Troll et Lindsley (1955) reprise par Magné et Larher, (1992).
2.1. Extraction
Les échantillons de feuilles (150mg environ) prélevées près de l’apex subissent une
extraction alcoolique dans 3 ml de méthanol placé dans un tube à hémolyse.
L’ensemble est placé dans un bain-marie à 90°C pendant une heure. Les tubes où
se fait l’extraction doivent être bien fermés pour éviter l’évaporation du méthanol.
2.2. Dosage
Après refroidissement, à 1 ml de l’extrait sont ajoutés 2 ml d’une solution de
ninhydrine à 1% dans l’acide acétique glacial :eau (60 :40 V/V) et l’ensemble est
mis au bain-marie à 100°C pendant une heure. Après refroidissement, 5 ml de
toluène sont ajoutés et le mélange est agité vigoureusement. Le chromatophore
formé est stable pendant 24 heures. Pour la lecture de l’absorbance, on prélève la
phase supérieure après 30 minutes de repos. La densité optique est lue à 520nm.
Les résultats sont référés à une courbe étalon effectuée à partir de quantités
croissantes d’une solution de proline à 1µg/ml. Les résultats sont exprimés en µg/g
.MF. Trois répétitions sont prévues par traitement salin pour les plantes saines et
les plantes infectées.