Verticillium - Toubkal

221 

UNIVERSITE MOHAMMED V- Agdal 

FACULTE DES SCIENCES 

RABAT 

THESE DE DOCTORAT D’ETAT 

Présentée par 

Amina REGRAGUI 

Discipline : Biologie 

Spécialité : Phytopathologie 

Contribution à l’étude de l’influence de la salinité sur 

le couple tomate –Verticillium : Conséquences 

physiologiques et impact sur la bioprotection des 

tomates contre la verticilliose 

Soutenue le…22 décembre 2005…..devant le jury : 

LAHLOU H. 

Professeur à la Faculté des Sciences de Rabat 

BENKHEMMAR O. 


FASSI FIHRI O. 

Professeur à l’I.A.V. Hassan II, Rabat 

TIJANE M. 


ZAID H. 


Présidente 

Examinateur 

Examinateur 

Examinateur 

Examinateur

231 

JE DEDIE CE TRAVAIL… 

A mes petits enfants 

Zineb 

Youssef 

Jad 

et……

229 

REMERCIEMENTS 

Ce travail a été réalisé au sein de l’équipe de phytopathologie 

du laboratoire de Botanique de la Faculté des Sciences de Rabat. 

Qu’il me soit permis ici de remercier vivement le professeur H. 

LAHLOU pour la confiance qu’elle m’ a toujours témoignée ainsi que 

la formation de chercheur qu’elle m’a donnée avec bienveillance et 

humanité. Ses qualités scientifiques, ses conseils et ses 

encouragements incessants m’ont beaucoup soutenue pendant la 

l’élaboration de ce travail. Je lui exprime ma profonde 

reconnaissance et lui porte mon grand respect. 

Je remercie très vivement le professeur H. ZAID pour sa 

disponibilité, ses conseils fructueux et son aide scientifique et 

matérielle. Il a bien voulu accepter de participer à ce jury de thèse 

en qualité de rapporteur. Qu’il trouve ici l’’expression de ma 

profonde gratitude. 

Madame O. FASSI FIHRI, professeur de microbiologie à l’’IAV 

HASSAN II, m’a agréablement accueillie dans son laboratoire. J’ai 

pu bénéficier de ses compétences scientifiques et de son savoir faire. 

Pour l’accueil chaleureux qu’elle m’a réservé et pour avoir accepté 

de faire le rapport de ce mémoire, je lui exprime mes plus vifs 

remerciements. 

Mes sincères remerciements sont adressés aux professeurs M. 

TIJANE et O. BENKHEMMAR pour l’’honneur qu’ils me font de 

juger cette thèse.

230 

Je désire remercier particulièrement mes collègues les 

professeurs A. EL AISSAMI, E. BERRAHO et M. RAHOUTI pour 

leur collaboration efficace. 

Je désire remercier également Madame AGOUMY, ingénieur 

au ministère de l’énergie et des mines pour son aide précieuse lors de 

la réalisation de l’analyse minérale des échantillons. 

Que mes collègues du laboratoire de Botanique qui m’ont 

apportés une aide morale et matérielle trouvent ici l’’expression de 

ma meilleure sympathie. 

Je remercie vivement M. BENCHAKRI pour son aide 

technique efficace et son dévouement. 

Enfin, mes remerciements vont à tous les membres de ma 

famille pour leur soutien moral et leur encouragement affectueux.

232 

Liste des publications 

1. REGRAGUI A., LAHLOU H. et ZAID H., 1989. La prémunition de la 

tomate contre la verticilliose causée par Verticillium albo-atrum, forme à 

microsclérotes. Conséquences physiologiques du phénomène. 

Cryptogamie, Mycol. 10 (3) : 243-256 

2. REGRAGUI A. ZAID H. and LAHLOU H., 1990. Verticillium alboatrum 

effect on nitrate reductase activity in young tomato plants. 

Proceeding of 8 th congress of the Mediterranean Phytopathological Union, 

Agadir (Morocco) October 28 th ,233-235. 

3. BALESDENT M.H., REGRAGUI A., LAHLOU H. and BOMPEIX, 

1990. Early diagnostic of Verticillium albo-atrum microsclerotia form, and 

inoculum evaluation by enzyme linked immunosorbent assay in infected 

tomato plants. 

Proceeding of 8 th congress of the Mediterranean Phytopathological Union, 

Agadir (Morocco) October 28 th , 75-77. 

4. REGRAGUI A., RAHOUTI M. et LAHLOU H., 2003. Effet du stress 

salin sur Verticillium albo-atrum: pathogénécité et production d’enzymes 

cellulolytiques in vitro 

Cryptogamie, Mycol. 24 (2) : 167-174. 

5. REGRAGUI A. and LAHLOU H., 2005. Effect of Salinity on in vitro 

Trichoderma harzianum Antagonism against Verticillium dahliae. 

Pakistan Journal of Biological Sciences 8 (6):872-876

222 

SOMMAIRE 

INTRODUCTION GENERALE .................................................................................................... 1 

CHAPITRE I : ETUDE DE L’INFLUENCE DE LA SALINITE SUR LE 

COMPORTEMENT DE LA TOMATE (LYCOPERSICON ESCULENTUM) ET SUR LE 

DEVELOPPEMENT IN VITRO DE VERTICILLIUM ALBO-ATRUM ..................................... 7 

I. EFFET DE LA SALINITE SUR LE COMPORTEMENT DE DEUX GENOTYPES DE TOMATE .......... 7 

Introduction........................................................................................................................... 7 

A. Matériel et méthodes ........................................................................................................ 9 

1. Le matériel végétal........................................................................................................ 9 

2. Effet du sel sur la germination des graines ................................................................... 9 

2.1. Protocole de germination....................................................................................... 9 

2.2. Conditions de culture............................................................................................. 9 

2.3. Observations........................................................................................................ 10 

3. Effet du sel sur la croissance végétative des plantes................................................... 10 

3.1. Conditions de culture........................................................................................... 10 

3.2. Lecture des résultats ............................................................................................ 11 

4. Analyse statistique des données.................................................................................. 11 

B. Résultats ......................................................................................................................... 11 

1. Action du sel sur le pouvoir germinatif des graines.................................................... 11 

1.1. Effet sur la vitesse de germination ...................................................................... 11 

1.2. Effet sur le taux de germination .......................................................................... 13 

2. Action du sel sur la croissance végétative des plantes................................................ 15 

2.1. Effet sur la taille de l’axe aérien.......................................................................... 15 

2.2. Effet sur la biomasse des parties aériennes ......................................................... 16 

C. Discussion et conclusion ................................................................................................ 18 

II. INFLUENCE DE LA SALINITE DU MILIEU SUR LE DEVELOPPEMENT IN VITRO D’UN ISOLAT 

DE VERTICILLIUM ALBO-ATRUM D’ORIGINE TOMATE ............................................................... 19 

Introduction......................................................................................................................... 19 

A. Matériel et méthodes ...................................................................................................... 21 

1. La souche fongique..................................................................................................... 21 

2. Ensemencement .......................................................................................................... 22 

3. Traitement par le sel ................................................................................................... 22 

4. Estimation de l’effet du sel sur la croissance de Verticillium .................................... 23 

4.1. Croissance diamétrale.......................................................................................... 23 

4.2. Croissance pondérale........................................................................................... 23 

5. Effet sur l’intensité de la conidiogénèse ..................................................................... 23 

6. Effet sur le pouvoir germinatif des conidies ............................................................... 24 

7. Effet sur les organes de résistance .............................................................................. 24 

B. Résultats ......................................................................................................................... 24 

1. Effet de l’apport de NaCl sur la croissance de Verticillium........................................ 24 

1.1. Croissance diamétrale.......................................................................................... 24 

1.2. Croissance pondérale........................................................................................... 25 

2. Effet de la salinité sur la conidiogénèse et le pouvoir germinatif des conidies .......... 25 

2.1. Intensité de la sporulation.................................................................................... 25

223 

2.2. Pouvoir germinatif des conidies .......................................................................... 28 

3. Effet de la salinité sur la sclérogénèse ........................................................................ 28 

4. Influence de l’interaction salinité-température sur la croissance de Verticillium ....... 31 


CHAPITRE 2 : ETUDE DES EFFETS DE LA SALINITE SUR LA RELATION HOTE- 

PARASITE DANS LE CAS DE LA VERTICILLIOSE ............................................................ 38 

INTRODUCTION........................................................................................................................... 38 

I. EFFET DE L’INTERACTION SALINITE-VERTICILLIUM SUR LA MANIFESTATION DE LA 

MALADIE CHEZ LA TOMATE....................................................................................................... 39 

A. Matériel et méthodes ...................................................................................................... 39 

1. Plantes hôtes et conditions de culture ......................................................................... 39 

2. Inoculation des plantules............................................................................................. 39 

2.1. L’agent pathogène : Verticillium albo-atrum, forme à microsclérotes................ 39 

2.2. Préparation de l’inoculum ................................................................................... 40 

2.3. Protocole d’inoculation ....................................................................................... 40 

3. Traitement par le sel ................................................................................................... 40 

4. Notations des résultats ................................................................................................ 40 

4.1. Croissance des plantes......................................................................................... 40 

4.2. Emission des feuilles ........................................................................................... 41 

4.3. Colonisation des plantes par le pathogène........................................................... 41 

4.4. Analyse statistique des résultats .......................................................................... 42 

B. Résultats ......................................................................................................................... 42 

1. Manifestations externes de la combinaison Salinité-Verticillium sur les plantes de 

tomate hôtes .................................................................................................................... 42 

1.1. Effet sur la croissance des plantes ....................................................................... 42 

1.2. Effet sur l’émission de feuilles............................................................................ 45 

2. Manifestations internes ............................................................................................... 48 


II. EFFET DE LA SALINITE SUR LA VARIABILITE DU POUVOIR PATHOGENE DE VERTICILLIUM 

ALBO-ATRUM................................................................................................................................51 

Introduction......................................................................................................................... 51 

A. Impact de la salinité sur le niveau infectieux de l’inoculum du Verticillium sur les 

plantes de tomate................................................................................................................. 53 

1. Matériel et méthodes................................................................................................... 53 

1.1. Inoculation........................................................................................................... 53 

1.2. Traitement par le sel et conditions de culture...................................................... 54 

1.3. Estimation des résultats ....................................................................................... 54 

2. Résultats : effet de la salinité sur le pouvoir infectieux de l’inoculum de Verticillium 

vis-à-vis de la tomate ...................................................................................................... 54 

2.1. Effet sur la tomate Marmande Claudia................................................................ 54 

2.2. Effet sur la tomate Marmande VR....................................................................... 56 

3. Discussion et conclusion............................................................................................. 56 

B. Influence de la salinité sur l’expression du pouvoir pathogène de deux isolats de 

Verticillium sur la tomate .................................................................................................... 59 

1. Matériel et méthodes................................................................................................... 59

224 

1.1. Test de pathogénécité .......................................................................................... 59 


2. Résultats...................................................................................................................... 60 


C. Influence de la salinité sur la variabilité de la spécificité parasitaire d’un isolat de 

Verticillium d’origine tomate .............................................................................................. 63 


1.1. Choix des plantes hôtes inhabituelles.................................................................. 63 

1.2. Inoculation et traitement par le sel ...................................................................... 63 


2. Effet de la salinité sur la variation du pouvoir pathogène de l’isolat P80 au contact de 

nouvelles plantes hôtes. .................................................................................................. 64 

2.1. Effet sur l’expression du pouvoir pathogène au contact de la luzerne ................ 64 

2.2. Effet sur l’expression du pouvoir pathogène au contact de l’aubergine.............. 65 


CHAPITRE 3 : CONSEQUENCES PHYSIOLOGIQUES ET BIOCHIMIQUES DE 

L’INTERACTION SALINITE-VERTICILLIUM CHEZ LA TOMATE ................................. 73 

INTRODUCTION........................................................................................................................... 73 

A. EFFETS SUR LES TENEURS EN CATIONS MAJEURS................................................................ 74 

1. Introduction................................................................................................................. 74 


3. Résultats...................................................................................................................... 76 

3.1. Teneurs en ions sodium....................................................................................... 76 

3.2. Teneurs en ions potassium................................................................................... 78 

4. Discussion et conclusions ........................................................................................... 78 

B. EFFETS SUR LES TAUX DE SUCRES SOLUBLES TOTAUX........................................................ 81 

1. Introduction................................................................................................................. 81 


2.1. Extraction des sucres solubles totaux .................................................................. 83 

2.2. Réaction à l’anthrone........................................................................................... 83 

3. Résultats...................................................................................................................... 83 

3.1. Chez Marmande Claudia ..................................................................................... 83 

3.2. Chez Marmande VR............................................................................................ 84 


C. EFFETS SUR L’ACCUMULATION DE LA PROLINE.................................................................. 87 

1. Introduction................................................................................................................. 87 


2.1. Extraction ............................................................................................................ 88 

2.2. Dosage................................................................................................................. 88 

3. Résultats...................................................................................................................... 89 

3.1. Chez la variété Marmande Claudia ..................................................................... 89 

3.2.Chez la variété Marmande VR ............................................................................. 89 


D. EFFETS DE L’INTERACTION SALINITE-VERTICILLIUM SUR CERTAINES ACTIVITES 

ENZYMATIQUES DES PLANTES DE TOMATE............................................................................... 93 

1. Effets sur l’activité nitrate réductase........................................................................... 93 

1.1. Introduction ......................................................................................................... 93

225 

1.2. Matériel et méthodes ........................................................................................... 94 

1.3. Résultats .............................................................................................................. 95 

1.4. Discussion et conclusion ..................................................................................... 95 

2. Effets sur l’activité peroxydasique.............................................................................. 98 

2.1. Introduction ......................................................................................................... 98 

2.2. Matériel et méthodes ......................................................................................... 100 

2.3. Résultats ............................................................................................................ 100 

2.4. Discussion et conclusion ................................................................................... 103 

CHAPITRE 4 : IMPACT DE LA SALINITE DU MILIEU SUR LES MECANISMES 

D’ACTION DE VERTICILLIUM ALBO-ATRUM.................................................................... 107 

I. EFFET DE LA SALINITE SUR LA TOXINOGENESE DE L’AGENT PATHOGENE....................... 107 

Introduction....................................................................................................................... 107 

A. Matériel et méthodes .................................................................................................... 108 

1. Préparation des filtrats de culture de l’isolat P80 de Verticillium............................. 108 

2. Mise en évidence de la toxicité des filtrats de culture de Verticillium par des tests 

biologiques.................................................................................................................... 109 

2.1. Test graine ......................................................................................................... 109 

2.2. Test plante entière ............................................................................................. 110 

B. Résultats ....................................................................................................................... 110 

1. Effet du NaCl sur la phytotoxicité des filtrats de culture de l’isolat P80 de Verticillium 

sur la croissance racinaire de deux espèces végétales................................................... 110 

1.1. Manifestation sur la tomate ............................................................................... 110 

1.2. Manifestation sur le cresson .............................................................................. 111 

2. Effet du NaCl sur la phytotoxicité des filtrats de culture de l’isolat P80 de Verticillium 

sur la croissance végétative de deux plantes hôtes ....................................................... 111 

2.1. Manifestation sur la tomate Claudia.................................................................. 111 

2.2. Manifestation sur l’aubergine Reina negra........................................................ 113 

C. Discussion et conclusion .............................................................................................. 113 

II. INFLUENCE DE LA SALINITE SUR L’ACTIVITE DES ENZYMES PECTOCELLULOSIQUES 

PRODUITES IN VITRO PAR VERTICILLIUM ALBO-ATRUM .......................................................... 116 

Introduction....................................................................................................................... 116 


1. Les isolats de Verticillium utilisés ............................................................................ 117 

2. Analyse de l’activité carboxyméthylcellulase........................................................... 117 

2.1. Production de l’enzyme..................................................................................... 117 

2.2. Révélation.......................................................................................................... 118 

3. Analyse de l’activité pectine méthyle estérase ......................................................... 119 

3.1. Production de l’enzyme..................................................................................... 119 

3.2. Révélation.......................................................................................................... 119 

B. Résultats ....................................................................................................................... 120 

1. Croissance de deux isolats de Verticillium développés sur milieu CMC enrichi en 

NaCl.............................................................................................................................. 120 

2. Effet de la salinité sur l’activité carboxyméthylcellulase ......................................... 120 

3. Effet de la salinité sur l’activité pectine méthyle estérase ........................................ 120 

C. Conclusion et discussion .............................................................................................. 123

226 

III. INFLUENCE DE LA SALINITE SUR L’ACTIVITE PHENOLOXYDASIQUE DE VERTICILLIUM 

ALBO-ATRUM.............................................................................................................................. 124 

Introduction....................................................................................................................... 124 


1. Les souches fongiques .............................................................................................. 125 

2. Détection des phénoloxydases. ................................................................................. 126 

1.2. Les réactifs ........................................................................................................ 126 

2.2. Révélations ........................................................................................................ 126 

B. Résultats ....................................................................................................................... 126 

1. Influence de la salinité sur la cinétique de la production des Pox ............................ 126 

1.1. La souche sauvage P 80..................................................................................... 127 

1.2. La souche hyaline P1......................................................................................... 127 

2. Influence de la salinité sur l’activité phénoloxydasique globale de Verticillium...... 127 


IV. EFFET DE LA SALINITE DU MILIEU SUR LE PROFIL PROTEIQUE DE L’ISOLAT P80 DE 

VERTICILLIUM ALBO-ATRUM..................................................................................................... 131 

Introduction....................................................................................................................... 131 


1. Concentration des protéines...................................................................................... 132 

2. Dosage des protéines ................................................................................................ 132 

3. Analyse des protéines par électrophorèse ................................................................. 133 

3.1. Préparation des gels........................................................................................... 133 

3.2. Préparation des échantillons.............................................................................. 133 

3.3. Migration........................................................................................................... 133 

3.4. Révélation.......................................................................................................... 133 

3.5. Lecture des résultats .......................................................................................... 134 

B. Résultats ....................................................................................................................... 134 

1. Effet de la salinité sur le taux des protéines secrétées dans les filtrats de culture par 

Verticillium. .................................................................................................................. 134 

2. Effet de la salinité sur l’évolution du pH des filtrats de culture................................ 135 

3. Effet de la salinité sur les profils protéiques de l’isolat P80..................................... 136 

3.1. Analyse des protéines sur gel de polyacrylamide.............................................. 136 

3.2. Comparaison de l’expression des protéines....................................................... 137 


CHAPITRE 5 : INFLUENCE DE LA SALINITE SUR L’ANTAGONISME MICROBIEN 

VIS-A-VIS DE VERTICILLIUM ALBO-ATRUM ET SUR LA BIOPROTECTION DES 

TOMATES CONTRE LA VERTICILLIOSE .......................................................................... 141 

INTRODUCTION......................................................................................................................... 141 

I. EFFET DE LA SALINITE SUR L’ANTAGONISME IN VITRO DE QUELQUES MICROORGANISMES 

BENEFIQUES DU SOL VIS-A-VIS DE VERTICILLIUM ALBO-ATRUM............................................ 144 

Introduction....................................................................................................................... 144 


1. Choix des microorganismes antagonistes ................................................................. 145 

1.1. Penicillium sp .................................................................................................... 145 

1.2. Fusarium oxysporum......................................................................................... 145

227 

1.3. Talaromyces flavus............................................................................................ 146 

1.4. Trichoderma harzianum..................................................................................... 146 

1.5. Bacillus sp ......................................................................................................... 146 

2. Protocole des cultures en confrontations .................................................................. 146 

3. Estimation de l’effet antagoniste .............................................................................. 146 

B. Résultats ....................................................................................................................... 147 

1. Effets de la salinité sur la compétitivité in vitro de quelques microorganismes 

fongiques avec Verticillium .......................................................................................... 147 

1.1. Confrontations Penicillium sp-Verticillium ...................................................... 147 

1.2. Confrontation Fusarium oxysporum-Verticillium............................................. 149 

1.3. Confrontation Talaromyces flavus-Verticillium ............................................... 149 

1.4. Confrontation Trichoderma-Verticillium .......................................................... 149 

2. Effet de la salinité sur l’antagonisme de Bacillus sp avec Verticillium .................... 153 


II. INFLUENCE DE LA SALINITE SUR L’ANTAGONISME IN VITRO DE TRICHODERMA 

HARZIANUM VIS-A-VIS DE L’ISOLAT P80 DE VERTICILLIUM................................................... 157 

Introduction....................................................................................................................... 157 


1. Le matériel fongique................................................................................................. 158 

1.1. Le pathogène ..................................................................................................... 158 

1.2. L’antagoniste..................................................................................................... 158 

2. Mesure du phénomène d’antagonisme...................................................................... 159 

2.1. Capacité de colonisation.................................................................................... 159 

2.2. Antagonisme par antibiose ................................................................................ 159 

B. Résultats ....................................................................................................................... 161 

1. Influence de la salinité du milieu sur le développement de T. harzianum................ 161 

1.1. Morphologie des cultures .................................................................................. 161 

1.2. Poids sec du mycélium ...................................................................................... 161 

1.3. Taux de sporulation ........................................................................................... 161 

2. Influence de la salinité sur l’expression de l’activité antagoniste de T. harzianum visà-vis 

de Verticillium...................................................................................................... 161 

2.1. Antagonisme par compétition............................................................................ 161 

2.2. Antagonisme par antibiose ................................................................................ 164 


III. INFLUENCE DE LA SALINITE SUR L’EXPRESSION DE L’ANTAGONISME IN VIVO DE 

TRICHODERMA HARZIANUM VIS-A-VIS DE VERTICILLIUM ALBO-ATRUM DE LA TOMATE ...... 172 

Introduction....................................................................................................................... 172 


1. Protocole de bioprotection des plantes ..................................................................... 173 

1.1. Préinoculation avec Trichoderma...................................................................... 173 

1.2. Inoculation avec la souche pathogène ............................................................... 174 

2. Evaluation des manifestations de la maladie ............................................................ 174 

2.1. Croissance des plantes....................................................................................... 174 

2.2. Altérations foliaires ........................................................................................... 174 

2.3. Ré-isolement du champignon............................................................................ 175 

B. Résultats ....................................................................................................................... 175 

1. Recherches des conditions optimales pour l’expression de l’antagonisme in vivo de 

Trichoderma harzianum vis-à-vis de Verticillium albo-atrum. .................................... 175

228 

1.1. Effet de l’inoculation simultanée par le mélange de spores des deux champignons 

1.2. Effet du délai de pré-inoculation par Trichoderma sur l’expression de la 

bioprotection............................................................................................................. 178 

1.2. Discussion et conclusion ............................................................................. 181 

2. Impact de la salinité sur le succès de la bioprotection des tomates contre la 

verticilliose par Trichoderma harzianum...................................................................... 184 

2.1. Réponses des plantes prétraitées avec Trichoderma à la surinfection par 

Verticillium en fonction de la salinité du milieu ...................................................... 184 

2.2. Discussion et conclusion ................................................................................... 186 

CONCLUSION GENERALE ..................................................................................................... 189 

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES................................................................................... 200 

ANNEXES..................................................................................................................................... 216

1 

Introduction générale 

La culture de la tomate Lycopersicon esculentum Mill, a connu une grande 

extension au Maroc. La superficie globale occupée par les cultures de primeurs et 

de saison s’élève à 20655 ha en 2001/02 et assure une progression de 18.7% par 

rapport à 2000/01. Cette progression concerne aussi bien la tomate sous serre que 

celle de plein champ. La production globale est passée de 307000 tonnes en 1989 à 

560000 tonnes en 1999 (S.A.M., 2002). 

Cependant cette culture est confrontée à de nombreuses contraintes qui affectent 

aussi bien le rendement que la qualité des fruits. Ces contraintes sont liées à des 

changements dans l’environnement de la plante, notamment la température et la 

salinité, et au développement des maladies. 

La culture de la tomate a dominé depuis les quatre dernières décennies les régions 

du littoral atlantique, régions où règnent une humidité relative élevée et des 

températures hivernales douces. Or, la proximité de l'océan atlantique fait que 

cette culture subit la salinité des eaux d'arrosage puisées de la nappe phréatique 

salée et les embruns qui entraînent une importante accumulation de sel dans le sol 

(Besri, 1981). Par ailleurs, ces conditions semblent propices au développement des 

maladies vasculaires dues principalement aux champignons du genre Verticillium. 

La verticilliose de la tomate due à Verticillium albo-atrum, forme à microsclérotes 

représente actuellement l’une des principales maladies de cette culture au Maroc. 

Elle se manifeste par un rabougrissement des parties aériennes, des altérations 

foliaires et des flétrissements conduisant parfois à la mort de la plante. L’agent 

pathogène est un adélomycète vasculaire qui se conserve dans le sol sous forme de 

microsclérotes. Ces propagules dormantes se développent sur les débris végétaux 

au cours de la vie saprophytique du champignon et représentent l’inoculum de la 

maladie. En présence de la plante hôte, les microsclérotes germent en réponse aux 

exsudats racinaires et pénètrent dans les racines même en absence de toute 

blessure. Le parasite se développe et colonise la totalité de la plante puis reste 

localisé à l’intérieur des vaisseaux conducteurs provoquant leur obstruction et par 

voie de conséquence le flétrissement de la plante infectée.

2 

La colonisation des tissus par le parasite est rendue aisée par la production 

d’enzymes de dégradation des parois cellulaires de l’hôte (Cooper et al., 1978 ; 

Durand & Cooper, 1988). Une corrélation positive existe entre l’activité des 

cellulases et des pectinases produites par des isolats de Verticillium et leur 

agressivité vis-à-vis de leurs plantes hôtes (Gupta & Heale, 1971, Durand & Cooper, 

1988). En outre, ce champignon est apte à produire des métabolites toxiques à 

l’intérieur des tissus infectés et qui seraient impliqués dans l’expression des 

symptômes de la maladie (Nachmias et al, 1982 ; 1984 et Meyer et al., 1994). 

Il est connu que le comportement des plantes envers les agents pathogènes est 

conditionné par certains facteurs de l’environnement. Ayres, (1984) a rapporté que 

les stress abiotiques comme la sécheresse, la pollution, la chaleur ou la salinité 

peuvent augmenter les symptômes des maladies par un effet direct sur la plante ou 

sur le pathogène. 

Quelques travaux ont montré l’influence de la salinité du milieu sur l’augmentation 

de la sensibilité de la tomate à la fusariose (Standaert, 1975) et à la verticilliose 

(Besri & Afaïlal, 1993). Selon ces auteurs, cette plus grande sensibilité est en 

relation avec une colonisation plus intense des tiges par le parasite. 

Le sel semble avoir une action néfaste aussi bien sur la plante hôte que sur l’agent 

pathogène. Quelques rares hypothèses ont été avancées pour expliquer les 

mécanismes par lesquels agit le chlorure de sodium pour accentuer la sévérité de 

ces maladies. Messiaen & Lafon (1971) ont émis l’hypothèse que l’ion sodium 

augmente la sensibilité de la tomate à la fusariose vasculaire par suite d’une 

insuffisance en calcium provenant d’une interférence ionique entre ces deux 

cations. Sur d’autres pathosystèmes, Mac Donald, (1984) et Sulistyowati & Keane, 

(1992), estiment que la salinité prédispose les plantes aux attaques de 

Phytophthora en inhibant la synthèse de phytoalexines, substances intervenant 

dans la protection des plantes contre l’invasion par les agents pathogènes. 

Benyahyia, (1998), travaillant sur le couple Citrus-Phytophthora a montré l’effet 

spécifique des ions chlore sur l’interaction hôte-parasite. Cet ion agit sur la

3 

physiologie de la plante et prédispose les porte-greffes à des attaques sévères par 

l’agent pathogène. 

La sévérité de la maladie en présence de sel serait liée également à une action 

directe du sel sur l’agent pathogène. En effet, l’augmentation du chlorure de 

sodium dans le sol stimule le développement et la conservation des champignons 

vasculaires (Besri, 1981 ; Afailal, 1987 ). De la même manière, la croissance et la 

production de sporanges chez Phytophthora citrophthora sont stimulées par la 

présence de sel dans le sol et dans les eaux d’irrigation (Benyahyia, 1998). 

D’autres facteurs biotiques sont incriminés dans l’augmentation de l’incidence des 

trachéomycoses chez la tomate. On peut citer entre autres l’intervention des 

nématodes sur la plante hôte et sur l’agent pathogène et l’augmentation de 

l’inoculum dans le sol (Besri, 1991). Ces facteurs peuvent interagir avec le facteur 

salinité et accentuer, par conséquent, la sévérité de la maladie. 

Si de multiples travaux ont porté sur le rôle du sel dans la prédisposition des 

plantes aux maladies, peu d’études ont été entreprises pour élucider les 

mécanismes physiologiques et biochimiques qui régissent le changement de la 

sensibilité des plantes stressées aux agressions fongiques. 

Dans la nature, les relations hôte-parasite-environnement sont très complexes. La 

réponse des plantes à la fois aux stress abiotique et biotique est la résultante de 

plusieurs processus physiologiques et métaboliques mis en route pour adapter la 

plante d’une part aux contraintes hydriques et nutritionnelles et d’autre part, pour 

élaborer les mécanismes de défense contre les outils pathogéniques de l’agent 

causal de la maladie. 

L’interprétation de l’influence du milieu nutritif sur la sensibilité des plantes à la 

maladie requiert une connaissance approfondie des caractéristiques 

physiologiques des plantes stressées par la salinité et des modifications 

métaboliques liées à l’interaction salinité-pathogène. 

Dans cette directive, nous avons successivement : 

- Evalué séparément l’effet de la salinité sur le comportement de la plante et 

sur les activités biologiques in vitro de l’agent pathogène. Ces recherches 

ont été conduites respectivement sur deux variétés de tomate choisies pour

4 

leur sensibilité à la verticilliose et sur un isolat de Verticillium albo-atrum 

se montrant agressif sur les deux variétés de tomate testées, 

- Montré l’influence de la salinité sur la manifestation de la maladie et sur la 

variabilité du pouvoir pathogène d’un isolat de Verticillium d’origine 

tomate. 

- Etudié les conséquences physiologiques et biochimiques liées à la salinité en 

relation avec l’infection par Verticillium chez les tomates doublement 

stressées et enfin, 

- Mis en évidence l’impact de la salinité sur les mécanismes d’action de 

l’agent pathogène notamment sa capacité à produire les toxines et les 

enzymes cellulolytiques. 

Cette étude s’est appuyée sur la modélisation des interactions hôte-pathogèneenvironnement 

représentées par Van Der Plank sous forme d’un triangle ; le 

triangle de la maladie. Ce modèle peut être développé et inclure l’Homme, ce qui 

implique une nouvelle schématisation des interactions de la maladie sous forme 

d’un tétraèdre (Agrios, 1988), l’Homme occupant le sommet de la pyramide. En 

effet, l’Homme peut influencer les trois autres facteurs en intervenant dans le 

choix des espèces végétales, le choix des sols et sur les méthodes de lutte. 

A ce propos, en raison de la gravité des problèmes posés par la salinité sur le 

développement de la verticilliose et de la nécessité de mettre au point une stratégie 

de lutte efficace contre Verticillium dans de telles conditions de l’environnement, 

nous avons visé, dans la dernière partie de ce travail, d’examiner l’influence de la 

salinité sur le succès de la bioprotection des tomates contre la verticilliose. Mais 

pourquoi une lutte biologique ? 

En fait, plusieurs méthodes ont été préconisées pour réduire l’incidence de la 

maladie. 

La rotation culturale a montré des résultats intéressants, mais son efficacité est très 

contestée vu le mode de conservation du champignon dans le sol sous forme de 

microsclérotes. Ces propagules ont une longue survie et peuvent contaminer des 

plantes adventices non hôtes, ce qui contribue à l’augmentation du taux d’inoculum 

dans le sol.

5 

La lutte chimique est largement utilisée. Plusieurs fongicides comme le benlate, le 

propiconazole et le paclobutrazol ont réussi à diminuer l’incidence de la maladie. 

Cependant, ces produits très coûteux présentent des inconvénients pour l’Homme et 

l’environnement auxquels s’ajoute le risque d’apparition de nouveaux pathotypes 

résistants. 

La lutte génétique est l’une des méthodes les plus efficaces pour lutter contre la 

verticilliose. L’utilisation des variétés résistantes à la race 1 de Verticillium a fait ses 

preuves pendant plusieurs années. Néanmoins, son efficacité a diminué avec 

l’apparition d’une nouvelle race, la race 2 (Besri et al. ; 1984 ; Tjamos, 1984), à 

laquelle aucune variété ne présente une résistance satisfaisante. 

La prise en conscience des limites des méthodes chimique et génétique de lutte, 

considérées un moment comme susceptibles à elles seules de résoudre les problèmes 

des maladies des plantes, a incité les chercheurs à s’orienter vers la lutte biologique. 

Ce moyen de lutte met en œuvre des organismes vivants ou des substances 

biologiques pour réduire les dégâts causés par les agents phytopathogènes. 

Le contrôle biologique avec les microorganismes bénéfiques permet d’augmenter le 

rendement en supprimant directement l’inoculum pathogène et/ou en induisant la 

résistance des plantes. La résistance induite représente actuellement une nouvelle 

stratégie de défense des plantes contre les agressions pathogènes. 

Plusieurs tentatives de lutte biologique contre la verticilliose ont abouti soit par 

l’induction de la résistance soit par l’utilisation des microorganismes antagonistes. 

C’est le cas de la bioprotection de l’aubergine par l’utilisation de champignons 

antagonistes comme Talaromyces flavus (Fravel, 1996 ; Kim et al., 1988 ) et 

Trichoderma harzianum (D’Ercole et al., 2000), celle de l’érable par Bacillus subtilis 

(Hall & Schreiber, 1984) et de la luzerne par Sinorhizobium meliloti (El Aissami, 

1999). La bioprotection des tomates contre Verticillium a été obtenue par 

prémunition à la suite de la pré-inoculation des jeunes plants par une souche 

avirulente du même champignon avant l’infection agressive (Regragui et al., 1989). 

Cependant, il a été établi que l’efficacité des microorganismes bénéfiques à supprimer 

les maladies est influencée par les facteurs de l’environnement (Lewis & Papavizas, 

1987 ; Harman et al., 1981). Il est donc important de connaître dans la mesure du

6 

possible l’écologie des agents du contrôle biologique et leurs interactions avec le 

pathogène, la plante hôte et la communauté microbienne de la rhizosphère (Larkin & 

Fravel, 2002). 

A la lumière de ces données, et dans l’objectif de vérifier dans quelle mesure la 

salinité peut affecter la réussite du phénomène de bioprotection, on s’est proposé de 

protéger les tomates soumises au stress salin contre la verticilliose par l’utilisation de 

Trichoderma harzianum, un puissant agent antagoniste. Cette tentative a été 

précédée par des essais conduits in vitro afin d’examiner l’effet de la salinité sur le 

développement et la reproduction de l’agent de lutte biologique et sur l’efficacité de 

ses différents modes d’action antagoniste à l’encontre du champignon pathogène.

7 

Chapitre I : Etude de l’influence de la salinité sur le 

comportement de la tomate (Lycopersicon esculentum) et 

sur le développement in vitro de Verticillium albo-atrum 

I. Effet de la salinité sur le comportement de deux génotypes 

de tomate 

Introduction 

La culture de la tomate au Maroc connaît une grande extension en zone irriguée et 

en zone côtière. Les eaux utilisées pour l’irrigation des parcelles de tomate le long 

du littoral atlantique appartiennent aux classes C3 (0.48 g/l – 1.44 g/l) et C4 ( 1.4 

g/l – 3.2 g/l) définies par Richards (1969). Ce sont donc des eaux salées à très 

salées (Amor, 1991). Il en résulte une accumulation de sel dans le sol en plus des 

embruns qui apportent de grandes quantités de NaCl (Besri, 1977). Lorsque la 

salinité est de 2.5 g/l, le rendement baisse de 10%. Cependant, la baisse du 

rendement peut atteindre 25% à une salinité de 4g/l. 

La salinité des sols et des eaux d’irrigation ne constituent pas un facteur limitant la 

culture de la tomate mais peut constituer un facteur qui limite la qualité de la 

production. En effet, l’impact de la salinité est plus grave sur le rendement export 

suite à la réduction du calibre des fruits ( PNTTA, 1999) 

La salinité a été rapportée comme un facteur de l’environnement qui augmente la 

sensibilité des tomates aux maladies d’origine fongique principalement la fusariose 

(Standaert, 1978), la verticilliose (Afailal 1987, Besri, 1990) et la pourriture 

racinaire due à Phytophthora parasitica (Swiecki & Mac Donald, 1991). 

Cette différence de sensibilité induite par le sel serait la résultante de l’interaction 

du milieu nutritif avec la physiologie de la plante d’une part, et celle du parasite 

d’autre part. Toute interprétation de l’augmentation de l’incidence de la maladie 

dans ce cas requiert une bonne connaissance du comportement de la plante vis-àvis 

de la salinité du milieu. 

Dans cette optique, nous avons évalué le niveau de tolérance vis-à-vis du stress 

salin de deux variétés de tomate choisies pour leur grande sensibilité à la 

verticilliose, principal handicap de cette culture au Maroc.

8 

La tolérance d’une plante à la salinité est définie par son aptitude à se développer 

normalement en conditions salines. Le degré de tolérance dépend du stade 

physiologique de la plante. En général, les plantes sont plus sensibles au stade 

germination et émergence. Le degré de sensibilité diminue ensuite avec l’âge. 

La résistance des plantes à la salinité dépendrait de leur capacité à maintenir des 

conditions favorables à leur fonctionnement en évitant ou en tolérant les fortes 

concentrations ioniques à l’intérieur de leurs cellules. Les différences entre les 

espèces résident dans l’efficacité des moyens mis en œuvre pour la protection de 

leur équilibre (Hamza, 1980). 

La tolérance de la tomate à la salinité a fait l’objet de plusieurs études ( Shalhevet 

& Yaron, 1973 ; Perez-alfocea et al., 1996 ; Katerji et al., 1998). D’après ces auteurs, 

la tomate est moyennement tolérante à la salinité. Cependant, cette tolérance varie 

d’une espèce à l’autre et même entre les variétés d’une même espèce (Cruz & 

Cuartero, 1990). Des différences de sensibilité au sel ont été constatées entre 

différentes variétés de tomate appartenant à l’espèce cultivée Lycopersicon 

esculentum et entre les espèces sauvages de tomate aussi bien in vitro qu’in vivo 

(Amor, 1991). 

Plusieurs critères sont utilisés pour tester la tolérance à la salinité des tomates en 

phase de croissance végétative. Cruz & Cuartero (1990) ont testé la tolérance de 39 

génotypes appartenant à 5 espèces de Lycopersicon en évaluant 16 caractères 

différents. Ces auteurs recommandent d’utiliser quatre caractères fiables ; la 

hauteur des tiges, le poids frais des tiges et les concentrations foliaires en Na + et en 

Cl - . Ces caractères changent avec la concentration saline indépendamment des 

génotypes. 

C’est ainsi que nous avons testé la tolérance au sel des deux variétés de tomate lors 

de la germination et du développement végétatif. Celui ci a été évalué par la 

hauteur des plantes et le poids frais des parties aériennes. Les teneurs en éléments 

minéraux qui caractérisent hautement la tolérance à la salinité seront étudiées 

dans le prochain chapitre parmi les effets physiologiques et biochimiques du sel 

sur le couple tomate-Verticillium.

9 

A. Matériel et méthodes 

1. Le matériel végétal 

La tomate (Lycopersicon esculentum, Mill.) est une plante maraîchère largement 

cultivée au Maroc. Deux variétés ont été retenues pour notre étude ; la Marmande 

Claudia sensible à la verticilliose et la Marmande VR possédant le gène Ve de la 

résistance à la race 1 de Verticillium, mais sensible à la race 2 du même 

champignon. Les semences nous ont été gracieusement fournies par " Semences 

Clauses " de Brétiny (France). 

2. Effet du sel sur la germination des graines 

2.1. Protocole de germination 

Les graines des deux variétés de tomate sont stérilisées par trempages successifs 

dans les bains suivants : 

- Hypochlorite de sodium à 15% pendant 2 minutes 

- Deux rinçages à l'eau distillée stérile 

- Alcool 90° pendant une minute 

Les graines sont séchées sur papier filtre stérile avant d'être déposées dans des 

boîtes de Pétri contenant deux couches de papier filtre stérile imbibé d'une 

solution saline à différentes concentrations :0 ; 20 ; 40 ; 60 ; 80 et 100 mM de 

NaCl soit 0 ; 1.16 ; 2.36 ; 3.50 ; 4.67 et 5.84 g/l. Les lots témoins sont placés sur 

papier filtre imbibé d'eau distillée stérile. 

2.2. Conditions de culture 

Les boîte de Pétri, contenant chacune 25 graines, sont placées à l'obscurité dans 

une étuve à 24±1°C pendant une semaine. De l'eau distillée stérile est ajoutée en 

cas de dessèchement du papier filtre. Dix répétitions sont prévues pour chaque 

traitement et par variété.

10 

2.3. Observations 

Les boîtes de Pétri sont examinées tous les deux jours pour suivre la germination 

des graines. Le nombre de graines ayant germé est noté et le pourcentage de 

germination est ainsi calculé. Une graine germée est celle qui parvient à émettre 

une radicule et les deux cotylédons. L'effet du NaCl est estimé par le pourcentage 

d'inhibition de la germination apprécié comme suit : 

%IG = PGte - PGtr / PGte x 100 

PGte: pourcentage de germination du lot témoin 

PGtr : pourcentage de germination du lot traité par le sel 

3. Effet du sel sur la croissance végétative des plantes 

3.1. Conditions de culture 

3.1.1. Le substrat 

Les cultures de tomate sont conduites sur du sable calibré de 1 à 2 mm de grosseur. 

Il est lavé à l'eau , puis mis à tremper dans l'acide chlorhydrique technique 

pendant 24 heures. Il est ensuite rincé une dizaine de fois avec de l'eau distillée 

jusqu'à stabilisation du pH autour de 3.5, puis lavé trois fois avec la solution 

nutritive jusqu'à ce que le pH qui percole s'établisse aux alentours de 6. Ce sable 

est ensuite stérilisé deux fois à l'autoclave pendant une heure à 24 heures 

d'intervalle. Avant son utilisation, le substrat est ré-imbibé avec la solution 

nutritive d’arrosage (annexes). 

3.1.2. Préparation des pépinières 

Les graines sont stérilisées par trempage dans l'alcool à 90° pendant deux minutes. 

Elles sont ensuite séchées sur papier filtre puis semées en pépinière. Elles sont 

arrosées tous les deux jours avec la solution nutritive complète sans sel. 

3.1.3. Traitement par le sel 

Arrivées au stade « premières vraies feuilles », les plantules sont déterrées 

délicatement et replantées dans des pots de sable de 450 cm 3 . Les plantules sont 

arrosées tous les deux jours avec la solution nutritive enrichie avec différentes 

concentrations de NaCl :0 ; 20 ; 40 ; 60 ; 80 et 100 mM soit 0 ; 1.16 ; 2.33 ; 3.50 ;

11 

4.73 et 5.84 g/l. Les pots sont percés à la base pour permettre à la solution 

d'arrosage de percoler en cas d'excès. 

3.1.3. La chambre de culture 

Les cultures en pépinière et en pots sont effectuées dans une chambre de culture 

climatisée à 24 ± 1°C sous une photopériode de 16 heures et une humidité relative 

de 65%. 

3.2. Lecture des résultats 

Après six semaines d’observation, la croissance des plantes est estimée par deux 

variables : la hauteur de l’épicotyle et le poids frais des parties aériennes. Quatre 

heures après le dernier arrosage, les plantes sont délicatement déterrées et 

excisées au niveau de la cicatrice des cotylédons. Elles sont ensuite pesées. Les 

tests sont réalisés sur des lots de 15 plantes pour chaque variété de tomate et par 

concentration saline. 

4. Analyse statistique des données 

Chaque test est répété au moins deux fois. Les analyses statistiques sont effectuées 

à l’aide du logiciel SPSS. Les moyennes sont comparées par analyse des variances 

au seuil de 5% suivie par le test de Newman-Keuls. 

B. Résultats 

1. Action du sel sur le pouvoir germinatif des graines 

1.1. Effet sur la vitesse de germination 

Les pourcentages de germination des variétés Marmande Claudia et Marmande VR 

ont été relevés tous les deux jours. Leur évolution en fonction du temps est 

illustrée sur la figure 1. 

En absence de sel (figure 1A), les deux courbes obtenues, en forme de S, sont 

parallèles et présentent une zone linéaire située entre 2 et 4 jours au cours de

12 

Figure 1. Effet de la salinité sur la vitesse de germination des graines de 

deux variétés de tomate. 

Pourcentage de germination 

100 

90 

80 

70 

60 

50 

40 

30 

20 

10 

0 

Figure 1 A. 0mM de NaCl 

Marmande Claudia 

Marmande VR 

0 2 4 6 8 

Temps après semis (en jours) 


100 

90 

80 

70 

60 

50 

40 

30 

20 

10 

0 

Figure 1 B. 40mM de NaCl 


Marmande VR 

0 2 4 6 8 


Figure 1 C. 80mM de NaCl 

Figure 1 D. 100mM de NaCl 


100 

90 

80 

70 

60 

50 

40 

30 

20 

10 

0 


Marmande VR 

0 2 4 6 8 



100 

90 

80 

70 

60 

50 

40 

30 

20 

10 

0 


Marmande VR 

0 2 4 6 8 

Temps après semis (en jours)

13 

laquelle la vitesse de germination est maximale. Entre 4 et 8 jours, la pente des 

courbes diminue et les valeurs des % de germination tendent à se stabiliser. 

En présence de sel, la vitesse de germination diminue avec l’augmentation de la 

salinité comme le montrent les pentes des courbes des figures 1B ; 1C et 1D. De 

même, un retard de la germination est noté. L’apparition de la radicule a lieu 48 

heures après le semis chez les témoins ou chez les graines soumises aux 

concentrations modérées de sel. Cependant, elle ne se manifeste qu’entre 2 et 4 

jours aux concentrations supérieures ou égales à 80mM de NaCl. 

1.2. Effet sur le taux de germination 

L’analyse des résultats consignés sur la figure 2 montre que la salinité affecte le 

taux de germination des deux variétés Marmande Claudia et Marmande VR. Les 

pourcentages de germination diminuent en fonction des concentrations 

croissantes de NaCl. Pour chacune des deux variétés, on note des différences 

significatives entre les différents traitements salins. 

Néanmoins, pour un même traitement, les % de germination des deux variétés 

diffèrent statistiquement. En effet, après 8 jours de semis, les % de germination en 

absence de sel sont de 89.80% et 82.27% respectivement pour Claudia et VR. Cette 

différence est maintenue en présence de sel mais s’amplifie aux fortes 

concentrations. A 100mM de NaCl, le pourcentage de germination est de 46.53 % 

pour Marmande Claudia alors qu’il ne dépasse guère 23.5% pour Marmande VR. 

Cette dernière semble plus affectée par les fortes concentrations de sel par rapport 

à Marmande Claudia pour l’expression du pouvoir germinatif. 

L’effet inhibiteur du sel se manifeste sur le pouvoir germinatif des variétés Claudia 

et VR dès la concentration de 20mM de NaCl (figure 3). Aux concentrations faibles 

et modérées, l’effet du sel s’exprime avec la même importance ; les pourcentages 

d’inhibition de la germination par rapport aux témoins sans sel ne montrent pas de 

différences significatives entre les deux variétés après 8 jours de semis. Aux fortes 

concentrations (100 mM de NaCl), les pourcentages d’inhibition de la germination 

s’écartent de manière hautement significative et sont de 48.21 % pour Marmande 

Claudia et 71.96 % pour Marmande VR.

14 

Figure 2. Effet de la salinité sur le taux de germination de 

deux variétés de tomate après 8 jours de semis 


100 

90 

80 

70 

60 

50 

40 

30 

20 

10 

0 


Marmande VR 

0 20 40 60 80 100 

Concentration en NaCl (mM) 

Figure 3. Pourcentage d'ihnibition de la germination des graines 

de deux variétés de tomate en fonction de la salinité 

80 

Pourcentage d'inhibition de la 

germination 

70 

60 

50 

40 

30 

20 

10 

0 


Marmande VR 

20 40 60 80 100 

Concentration en NaCl (mM)

15 

2. Action du sel sur la croissance végétative des plantes 

Cette étude a été menée pour évaluer l’influence de la salinité sur la croissance 

végétative de la plante entière. Les résultats des mesures de la taille et du poids 

frais ont été analysés. 

2.1. Effet sur la taille de l’axe aérien 

Après six semaines d’observation, les deux variétés de tomate soumises au 

traitement par le sel montrent une réduction régulière et significative de la taille de 

l’épicotyle sous l’effet des concentrations croissantes de NaCl de la solution 

d’arrosage (figure 4). Pour chacune des deux variétés, on note des différences 

significatives entre les différents traitements par le sel à l’exception des 

traitements de 60mM et 80mM dont les effets sont similaires. 

Les réductions de la croissance par rapport aux témoins sans sel sont reportées sur 

le tableau 1. 

Tableau 1. Inhibition de la taille des tomates après traitement par NaCl. 

Pourcentage d’inhibition de la taille des plantes de tomate 

Concentration en NaCl (mM/l) 

Variétés 20 40 60 80 100 

Claudia 15.90 ± 4.86 

27.22 ± 7.71 

45.41 ± 4.65 

47.40 ± 5.71 

70.80 ± 2.35 

a 

b 

c 

c 

d 

VR 16.16 ± 4.48 

33.46 ± 6.60 

46.84 ± 4.89 

53.28 ± 4.72 

69.32 ± 2.45 

a 

b 

c 

c 

d 

Deux résultats lus sur une même ligne diffèrent statistiquement au seuil de 5% s’ils ne sont affectés 

d’aucune lettre en commun. 

Les résultats montrent une certaine analogie dans les réponses des deux variétés. 

Pour une même salinité, les % de réduction de la croissance sont statistiquement 

similaires. L’inhibition de la croissance, faible aux premières concentrations de 

l’expérience, atteint à 60mM 45.41% pour Claudia et 46.84% pour VR. Elle

16 

s’accentue avec l’augmentation de la salinité pour atteindre respectivement à 

100mM de NaCl 70.8% et 69.32% pour Claudia et VR. L’analyse de la variance à 

deux critères ne montre pas de différence significative entre les deux variétés. 

2.2. Effet sur la biomasse des parties aériennes 

Les plantes ayant servi à l’étude de l’élongation des tiges sont excisées au niveau 

des cicatrices des feuilles cotylédonnaires puis pesées. Les résultats sont consignés 

sur la figure 5. 

L’effet de la salinité s’est manifesté sur les deux variétés par une réduction 

significative du poids frais des tiges et feuilles corrélée avec l’augmentation de la 

salinité des eaux d’arrosage. Des différences significatives existent entre les 

traitements salins. L’effet de la salinité se manifeste selon le même schéma que 

pour l’effet sur la taille (tableau 2.). Les pourcentages d’inhibition de la biomasse 

des parties aériennes à 60 mM sont de 50.21 % et 51.59 % respectivement pour 

Claudia et VR, et de 67.27 % et 72.68 % à 100 mM. La différence notée entre les 

deux variétés n’est pas significative pour ce paramètre de la croissance. 

Tableau 2. Inhibition du poids frais des parties aériennes des tomates 

après traitement par NaCl 

Pourcentage d’inhibition du poids frais des parties aériennes 

Concentration en NaCl (mM/l) 

Variétés 20 40 60 80 100 

Claudia 18.17 ± 9.67 

35.06 ± 9.56 

50.21 ± 6.61 

53.12 ± 6.88 

67.27 ± 5.25 

a 

b 

c 

c 

d 

VR 24.51±10.60 

24.51±10.60 

51.59 ± 7.74 

53.66 ± 5.70 

72.68 ± 4.64 

a 

b 

c 

c 

d 

Deux résultats lus sur une même ligne diffèrent statistiquement au seuil de 5% s’ils ne sont affectés 

d’aucune lettre en commun.

17 

Figure 4. Effet du sel sur la hauteur de l'épicotyle des 

plantes de tomate après six semaines 

40 

Longueur de l'épicotyle (en cm) 

35 

30 

25 

20 

15 

10 

5 

0 

Marmande VR 


0 20 40 60 80 100 

Concentration des solutions d'arrosage en NaCl (mM) 

Figure 5. Effet du sel sur le poids frais des parties aériennes 

des plantes de tomate après six semaines 

Poids frais de l'axe aérien en g 

7 

6 

5 

4 

3 

2 

1 

0 


Marmande VR 

0 20 40 60 80 100 

concentration des solutions d'arrosage en NaCl (mM)

18 

C. Discussion et conclusion 

L’influence de la salinité sur le pouvoir germinatif des deux génotypes de tomate 

s’est manifestée par une réduction du taux et de la vitesse de germination par 

rapport aux témoins, réduction d’autant plus importante que la concentration en 

sel est élevée. L’analyse des variances a montré des différences significatives entre 

les deux variétés dans leur pourcentage de germination aux fortes concentrations 

de sel. La variété Marmande Claudia semble mieux tolérer les concentrations 

élevées de NaCl lors de la germination que Marmande VR. Nos résultats 

confirment les recherches de Berstein, (1975) et Bozouk, (1981) qui ont montré que 

chez la tomate cultivée (Lycopersicon esculentum), la germination est inhibée par 

les conditions salines. 

La tolérance au sel au cours de la germination est une réponse directe de 

l’embryon à ses conditions nutritionnelles. Elle est directement liée à une 

sélectivité efficace du plasmalemme à l’égard de l’ion sodium. Cette sélection au 

stade embryonnaire est associée à une accumulation de calcium par la graine lors 

de la phase de maturation (Guerrier, 1983). 

L’étude de l’effet du NaCl sur la germination de semences est insuffisante pour 

estimer la tolérance de la tomate au stress salin. En effet, la résistance au stress 

salin peut apparaître au stade germination et changer ou non pendant les phases 

suivantes de la croissance. 

Le sel a eu un effet négatif sur la taille et le poids frais des tiges et feuilles des deux 

variétés cultivées dans nos conditions expérimentales. Les concentrations 

modérées de NaCl (60 mM) réduisent les performances de la croissance d’environ 

50 % par rapport au témoin sans sel. Ce résultat correspond aux observations de 

Babas (1985), sur les variétés Vémone et Carmello, et de Amor (1991) qui a 

rapporté une baisse de la croissance de trois variétés de tomate, collectées dans les 

régions pré-sahariennes marocaines, en fonction de la salinité du milieu. Cet 

auteur a montré en outre, des différences nettes dans la réponse des différentes 

variétés suivant leur niveau de tolérance. D’après nos données, il n’y a pas de 

différence significative entre les deux génotypes pour les deux paramètres de la 

croissance évalués. La réponse au stress salin de la variété Marmande VR s’est

19 

alignée avec celle de Marmande Claudia durant la phase végétative de la croissance 

contrairement au comportement différentiel observé lors de la germination. 

Slama (1991) a évalué la tolérance au sel à partir du ralentissement de la vitesse de 

croissance des plantes à la concentration de 50mM de NaCl. Sous des 

concentrations voisines, la croissance des deux variétés de tomate a été réduite 

d’environ 50%. Ces résultats reflètent donc le niveau moyen de la tolérance au sel 

de ces deux génotypes. Ces derniers offrent ainsi un matériel de choix pour l’étude 

des effets combinés de la salinité et de l’infection avec Verticillium, principal agent 

des trachéomycoses au Maroc. 

II. Influence de la salinité du milieu sur le développement in 

vitro d’un isolat de Verticillium albo-atrum d’origine tomate 

Introduction 

Le développement des champignons phytopathogènes du sol dépend du 

comportement de la population des plantes hôtes et des caractéristiques de 

l’environnement. Les fluctuations de l’une ou l’autre de ces caractéristiques 

peuvent agir sur le développement et les activités biologiques de ces agents 

pathogènes et sur la relation hôte-parasite. 

Verticillium est un champignon tellurique qui se conserve dans le sol sous forme 

de microsclérotes. Ces formes de résistance peuvent rester à l’état dormant 

pendant plusieurs années en l’ absence de toute culture sensible. En présence de la 

plante hôte, les microsclérotes peuvent germer et attaquer les plantes par les 

racines. Le champignon prolifère à l’intérieur des vaisseaux du xylème et provoque 

par la suite des altérations foliaires et le flétrissement de la plante. Ce champignon 

vasculaire est ainsi soumis aux variations physico-chimiques du sol avant 

l’infection et à la variation de la composition chimique de la sève qui en découle 

une fois installé dans les vaisseaux du xylème. 

Plusieurs travaux ont rapporté que l’augmentation de la salinité du milieu favorise 

la croissance et la conservation de Verticillium dahliae et de Fusarium oxysporum 

fsp lycopersici , principaux agents des trachéomycoses au Maroc (Besri, 1977 ; 

Ioannou et al., 1977 ; Besri, 1981 ). Ces deux agents vasculaires tolèrent des

20 

potentiels osmotiques extrêmement bas, alors que la salinité excessive peut être 

toxique pour d’autres champignons du sol. De même, la réduction du potentiel 

osmotique à des valeurs comprises entre –2 et –20 bars stimule la croissance 

mycélienne et la sporulation de Verticillium dahliae, mais la production des 

organes de résistance est moins sensible à la baisse du potentiel osmotique 

(Ioannou et al., 1977 ). Une stimulation de la formation des organes de 

conservation chez Fusarium oxysporum fsp lycopersici par la baisse du potentiel 

osmotique correspond aux observations de Besri (1977 et 1981 ) à condition que la 

disponibilité en eau du sol soit satisfaisante. 

Ducan & Himelik (1986) ont montré que lorsqu’on cultive artificiellement 

Verticillium dahliae sous un potentiel de pression négative de –0.039 MPa, la 

production de conidies augmente de 800% par rapport au témoin non traité. 

L’influence de la salinité sur la germination des conidies de quelques isolats de 

Verticillium lecanii a été étudiée par Chandler et al. (1994). Selon ces auteurs, le 

pouvoir germinatif diminue avec la baisse du potentiel osmotique. Un seul isolat 

de V. lecanii a été sélectionné pour sa rapide germination après 12 heures à –2.8 

MPa. 

L’effet de la salinité a été étudié sur d’autres champignons pathogènes. C’est le cas 

des Phytophthora. Spp. Benyahya, (1998) a montré que l’augmentation de la 

salinité du milieu favorise la croissance mycélienne in vitro de Phytophthora 

citrophthora et P. parasitica , agents de la pourriture racinaire des agrumes, avec 

un optimum situé entre –1.44 et –3.11 bars. Au delà de cet intervalle, les activités 

biologiques régressent et la production de sporanges est complètement inhibée. 

D’autres espèces du même genre tolèrent des valeurs du potentiel osmotique 

beaucoup plus basses, comme Phytophthora cinnamomi qui montre une 

croissance optimale à –15 bars, alors que pour P. megasperma, la croissance 

diminue avec la baisse du potentiel osmotique (Sommers et al., 1970). 

Les travaux de Swiecki & Mac Donald (1991) rapportent que la formation des 

sporanges de Phytophthora parasitica est plus importante en présence de 

concentrations modérées de NaCl et de CaCl 2 par rapport aux témoins sans sel.

21 

Cependant le nombre de zoospores produites et leur mobilité sont nettement plus 

faibles que ceux des témoins. 

Parallèlement à ces travaux concernant l’action directe du sel sur le développement 

de ces champignons phytopathogènes, des études ont montré l’impact de la salinité 

sur la sensibilité des plantes aux maladies d’origine fongique. Dans ce sens, 

plusieurs auteurs rapportent une augmentation de la sensibilité des tomates à 

Fusarium oxysporum f. sp. Lycopersici (Davet, 1966, Standaert, 1978) et à 

Verticillium dahliae (Besri, 1991 ; Besri & Afailal, 1993). 

L’interprétation de l’effet de la salinité sur la plus grande sensibilité de la tomate à 

ces maladies est à rechercher, comme nous l’avons déjà précisé, au niveau de 

l’interaction de la plante et du pathogène avec l’environnement. La baisse de la 

croissance des plantes de tomate suite au stress salin décrite au paragraphe 

précédent représente un des aspects physiologiques de cette interaction. Il paraît 

donc nécessaire d’examiner dès lors l’impact de la salinité sur le développement de 

l’agent pathogène. A cette fin, nous nous proposons d’étudier in vitro l’effet de la 

salinité sur le développement de l’isolat P80 de Verticillium connu pour son fort 

pouvoir pathogène vis-à-vis des variétés Marmande Claudia et VR. Cette étude in 

vitro contribuera à mieux comprendre le comportement du champignon dans les 

sols riches en sel et à l’intérieur des vaisseaux conducteurs des plantes hôtes 

soumises au stress salin partant du fait que la composition chimique de la sève est 

le reflet de l’interaction physiologique de la plante avec son milieu nutritif . 


1. La souche fongique 

Lahlou (1983) a isolé Verticillium d’une tige de tomate, sévèrement atteinte de 

verticilliose, de la région de Dar Bouazza. L’isolat initial a été cloné et identifié 

comme appartenant à l’espèce Verticillium albo-atrum R & B, forme à 

microsclérotes. Le clone P3 , de phénotype sauvage, s’est montré très agressif sur 

la variété Marmande sensible. 

Au cours de nos expériences préliminaires, des plantes de tomate, variété 

Marmande VR, ont été artificiellement infectées avec l’isolat P3 et régulièrement

22 

arrosées avec une solution enrichie en NaCl. En fin d’expérience, le champignon a 

été ré-isolé d’une plante montrant des symptômes caractéristiques de 

rabougrissement. Cet isolat fut nommé P80 et a été utilisé dans tous nos essais. 

Le champignon est cultivé en boîte de Pétri sur milieu PDA ou milieu Malt gélosé, 

à l’obscurité et à 24± 1° C. 

Le clone P80 est caractérisé par un mycélium blanchâtre d’aspect cotonneux et une 

sclérogénèse abondante apparaissant après 6 à 7 jours de culture. Il est très 

agressif sur la variété Marmande Claudia sensible mais aussi sur la variété 

Marmande VR possédant le gène Ve de la résistance. Il a été identifié donc comme 

appartenant à la race 2 de Verticillium. 

2. Ensemencement 

Les cultures liquides sont réalisées dans des fioles de 250 ml à raison de 100 ml 

par fiole. Elles sont ensemencées avec 1 ml d’une suspension de spores à 10 6 

spores /ml fraîchement préparée à partir d’une culture de Verticillium âgée de 12 

jours. 

Les cultures solides, conduites sur boites de Pétri, sont ensemencées avec des 

rondelles de 4 mm de diamètre préalablement découpées à l’emporte pièce dans la 

zone de croissance active d’une culture âgée de deux semaines et présentant 

l’aspect caractéristique du type sauvage. Les thalles montrant des secteurs hyalins 

sont systématiquement écartés. Les boutures sont déposées au centre de la boîte et 

à l’envers pour que le champignon soit en contact direct avec le milieu de culture. 

Les boîtes sont fermées avec un ruban de parafilm pour éviter tout changement 

dans la pression osmotique du milieu par une éventuelle perte d’eau. Toutes les 

cultures sont mises à incuber à l’obscurité et à 24 ± 1°C. 

3. Traitement par le sel 

Les cultures fongiques sont conduites sur milieu à base d’extrait de malt liquide ou 

gélosé (2%) enrichi de chlorure de sodium à différentes concentrations 0 ; 5 ; 10 ; 

15 ; 20 ; 30 ; 40 ; 50 ; 60 ; 80 et 100g/l selon le type d’expérience. Dix répétitions 

sont prévues pour chaque traitement salin.

23 

4. Estimation de l’effet du sel sur la croissance de Verticillium 

4.1. Croissance diamétrale 

Les cultures sont examinées régulièrement, tous les jours. Les mesures des 

moyennes des deux diamètres perpendiculaires de chaque colonie sont faites tous 

les 5 jours. Le test a duré 20 jours. 

4.2. Croissance pondérale 

Bien que la croissance diamétrale soit la méthode la plus utilisée pour estimer 

l’effet d’un facteur de l’environnement sur un champignon, elle reste toutefois 

insuffisante car elle ne tient pas compte de la densité des filaments mycéliens ni du 

taux de la croissance spécifique. Pour palier à cette lacune, le poids sec du 

mycélium a été examiné comme un autre paramètre de la croissance pour estimer 

l’effet de la salinité sur le développement de Verticillium. 

Après trois semaines d’incubation, les cultures liquides de Verticillium sont filtrées 

sur mousseline. Le mycélium recueilli est lavé deux fois à l’eau distillée, puis essoré 

entre plusieurs couches de papier filtre avant d’être séché à 80°C pendant 24 

heures. Le poids sec du mycélium (mg) est ensuite déterminé. 

5. Effet sur l’intensité de la conidiogénèse 

Sur les boîtes ayant déjà servi pour l’étude de la croissance des colonies, dix 

rondelles de 5 mm de diamètre sont découpées à l’emporte pièce à 2mm environ 

du front de la croissance de chaque thalle. Elles sont ensuite placées dans un tube à 

vis contenant 10 ml d’eau stérile. Les tubes sont agités au vortex pendant 20 

secondes, ce qui permet l’éclatement des sphérules portées par les conidiophores 

et la libération des conidies. Le contenu de chaque tube est ensuite filtré sur 

mousseline afin d’éliminer les fragments mycéliens et les morceaux de gélose. Le 

comptage du nombre total des conidies libérées par les dix rondelles est effectué 

avec un hématimètre ( cellule de Malassez) à raison de 5 comptages par suspension 

et de 10 boîtes par traitement salin. Les résultats sont exprimés en nombres de 

conidies par unité de surface (cm 2 ).

24 

6. Effet sur le pouvoir germinatif des conidies 

Pour chaque traitement salin, une goutte contenant 100 conidies de Verticillium, 

issue d’une suspension de spores de l’isolat P80 fraîchement préparée, est étalée 

sur la surface de milieu gélosé à base d’extrait de malt enrichi en NaCl : 0 ; 4 ; 8 ; 

12 ; 16 et 20 g/l. Dix boîtes sont prévues pour chaque concentration saline. Les 

étalements, incubés à l’obscurité et à 24°C, sont observés 24, 48 et 72 heures après 

ensemencement. Les pourcentages de germination des conidies sont alors 

déterminés. 

7. Effet sur les organes de résistance 

Cette étude a été faite en parallèle avec celle de la croissance diamétrale. L’effet de 

l’apport de NaCl dans le milieu de culture sur les microsclérotes est apprécié d’une 

part, par le délai d’apparition des organes de conservation et d’autre part, par 

l’estimation de l’étendue de la zone pigmentée visible sur le revers des boîtes de 

Pétri, la coloration noire des cultures de Verticillium étant due à la mélanisation 

des parois des microsclérotes. Tous les résultats sont comparés par analyse de la 

variance selon le test de Newman-Keuls. 

B. Résultats 

1. Effet de l’apport de NaCl sur la croissance de Verticillium 

1.1. Croissance diamétrale 

La croissance diamétrale des colonies de Verticillium soumis à différentes 

concentrations de sel a été notée tous les cinq jours durant 20 jours. Les résultats 

sont reportés sur la figure 6. Dès les cinq premiers jours qui suivent la mise en 

culture, l’effet de la salinité s’est manifesté par une stimulation de la croissance 

diamétrale du champignon pour les concentrations comprises entre 0 et 10 g/l de 

NaCl. Au delà de cet intervalle, la croissance diminue en corrélation avec 

l’augmentation de la salinité du milieu. 

Après 20 jours de culture, l’intervalle des concentrations stimulatrices de la 

croissance s’étend à 20 g/l de NaCl. Au delà de cette concentration et jusqu’à 60

25 

g/l , l’effet du sel s’est traduit par une réduction linéaire de la croissance mais qui 

reste toutefois supérieure et de manière significative à celle des témoins sans sel. 

Seules les très fortes concentrations inhibent la croissance mycélienne de 

Verticillium. Cette inhibition est de l’ordre de 51.7% et 78.5% respectivement à 80 

et 100 g/l de NaCl par rapport aux témoins sans sel. 

L’apport de sel dans le milieu de culture agit également sur la vitesse de la 

croissance diamétrale des colonies (figure 7) par rapport aux témoins sans sel 

comme le montrent les pentes des différentes courbes de croissance. Durant la 

période d’incubation, la vitesse moyenne est de 1.27 mm /jour en absence de sel 

alors qu’elle atteint 2.05 mm /jour en présence de 20g/l de NaCl. 

1.2. Croissance pondérale 

Le poids sec du mycélium est évalué après un mois de culture en milieu liquide 

enrichi en NaCl. Les résultats reportés sur la figure 8 montrent que le poids sec du 

mycélium n’est pas modifié pour les concentrations de NaCl comprises entre 0 et 

10 g/l. A partir de 10 g/l, on remarque une réduction régulière de la croissance 

pondérale du mycélium en fonction des salinités croissantes du milieu de culture. 

L’inhibition du poids sec est de 23.1% ; 60.9% et 93.9% respectivement à 20; 40 et 

60 g/l de NaCl. 

2. Effet de la salinité sur la conidiogénèse et le pouvoir germinatif 

des conidies 

2.1. Intensité de la sporulation 

Les résultats de l’estimation de la sporulation de Verticillium en fonction de la 

salinité du milieu sont résumés sur la figure 9. Il apparaît clairement que l’effet du 

sel se traduit par une stimulation de l’intensité de la conidiogénèse pour les

26 

Figure 6. Effet de la salinité sur la croissance 

diamétrale de l'isolat P80 de Verticillium 

Moyenne des deux diamètres des 

colonies (en mm) 

50 

45 

40 

35 

30 

25 

20 

15 

10 

5 

0 

après 5 jours 




0 5 10 20 30 40 50 60 80 100 

Concentration en sel (en g/l de NaCl) 

Figure 7. Vitesse de la croissance des colonies de 

l'isolat P80 de Verticillium en fonction de la salinité 

du milieu 

0g/l 10g/l 20g/l 40g/l 60g/l 

Diamètre moyen des colonies (en 

mm) 

50 

45 

40 

35 

30 

25 

20 

15 

10 

5 

0 

0 5 10 15 20 

Temps d'incubation (en jours)

27 

350 

Figure 8. Effet de la salinité sur le poids sec 

du mycélium de l'isolat P80 de Verticillium 

après un mois de culture 

Poids sec du mycélium en mg 

300 

250 

200 

150 

100 

50 

0 

0 5 10 20 30 40 50 60 

Concentration de NaCl (en g/)l 

Figure 9. Effet de la salinité sur l'intensité de la 

conidiogénèse de l'isolat P80 de Verticillium 

après un mois de culture 

200 

Nombre de spores x 10 5 /cm 2 

180 

160 

140 

120 

100 

80 

60 

40 

20 

0 

0 5 10 15 20 40 60 

Concentration de NaCl (en g/)l

28 

concentrations de NaCl allant de 0 à 15 g/l. En effet, à la concentration optimale, 

(15g/l), on enregistre une augmentation du nombre de conidies produites de 130 % 

par rapport au témoin sans sel. Pour les autres concentrations de l’expérience 

supérieures à 15 g/l, l’intensité de la sporulation diminue mais reste 

statistiquement supérieure à celle du témoin sans sel jusqu’à 40g/l. 

2.2. Pouvoir germinatif des conidies 

La germination in vitro des conidies de Verticillium a été suivie pendant 72h. Les 

résultats montrent que les conidies ont germé à toutes les salinités de l’expérience 

(figure 10). A 4 g/l de NaCl, le pourcentage de germination des conidies est 

semblable à celui du témoin non traité et atteint 71.8 %. La germination subit une 

hausse significative sous les concentrations salines comprises entre 8 et 16g/l de 

NaCl (Planche 1). En revanche, l’apport dans le milieu de 20g/l de sel réduit le 

pouvoir germinatif des conidies traitées. Le pourcentage de germination, bien que 

statistiquement plus faible que celui des conidies témoins sans sel, est encore 

appréciable ; il est de 67.6%. 

3. Effet de la salinité sur la sclérogénèse 

L’estimation de l’abondance des microsclérotes par la mesure du diamètre de la 

zone pigmentée où se localisent les microsclérotes n’est certes pas très précise mais 

permet de faire des comparaisons entre les effets des différents traitements salins 

sur la formation des organes de résistance. 

Des résultats présentés dans la figure 11, il ressort que l’apport de faibles quantités 

de sel (0 à 5 g/l) n’altère pas l’importance de la formation des microsclérotes. Leur 

abondance ne diffère pas de celle des témoins sans sel. Cependant l’augmentation 

des concentrations de NaCl dans le milieu de culture a entraîné une diminution 

nette de la sclérogénèse. Cette réduction est d’autant plus marquée que la 

concentration saline est élevée. L’effet de la présence de concentrations de sel 

supérieures à 5 g/l touche aussi bien l’étendue de la zone pigmentée que l’intensité 

de la coloration qui devient de plus en plus claire.

29 

Figure 10. Effet de la salinité sur le pouvoir 

germinatif des conidies de l'isolat P80 de 

Verticillium après 72 heures 

Pourcentage de germination des conidies 

100 

90 

80 

70 

60 

50 

40 

0 4 8 12 16 20 

Concentration en NaCl (en g/)l 

Figure 11. Effet de la salinité sur l'intensité de la 

sclérogénèse de l'isolat P80 de Verticillium après 

un mois de culture 

Diamètre moyen de la zone 

sombre (en cm) 

4,5 

4 

3,5 

3 

2,5 

2 

1,5 

1 

0,5 

0 

0 5 10 15 20 40 60 

Concentration en NaCl (en g/l)

30 

Planche 1. Effet de la salinité du milieu sur la germination des conidies 

de l’isolat P80 de Verticillium albo-atrum après 4 jours d’incubation. 

[0 ; 4 ; 8 ; 12 ; 16] : concentration saline du milieu en g/l de NaCl

31 

Par ailleurs, les concentrations de sel supérieures à 10 g/l entraînent en plus un 

retard dans l’apparition des microsclérotes. Alors que le délai d’apparition des 

microsclérotes est de 7 jours chez les témoins non traités et les cultures traitées 

avec 5 g/l, l’augmentation de la salinité du milieu allonge ce délai. Ainsi les 

microsclérotes apparaissent après 10; 12 et 20 jours d’incubation respectivement 

pour les concentrations de 10; 20 et 40 g/l de NaCl. 

4. Influence de l’interaction salinité-température sur la croissance 

de Verticillium 

Des boutures de Verticillium sont ensemencées sur du milieu Malt gélosé 

additionné de 0 ; 4 ; 8 ; 12 et 16 g de NaCl par litre. Les boîtes de Pétri sont 

réparties en 5 lots de 10 boîtes chacun. Chaque lot est mis à incuber pendant 3 

semaines à une température déterminée : 18°C soit la température ambiante ; 

24°C ; 30°C et 36°C. L’estimation de la croissance est faite selon le protocole décrit 

auparavant. Les résultats de l’interaction salinité-température sont résumés sur le 

tableau 3. 

L’effet de la salinité se traduit par une stimulation de la croissance diamétrale des 

colonies et ceci pour toutes les températures de l’expérience. Néanmoins, la 

comparaison des pourcentages de stimulation de la croissance, due à la présence 

de sel, montre des différences significatives entre les différents traitements 

thermiques. Ainsi, à 18°C, la croissance est stimulée de 49.03 % avec la présence 

de 16 g/l de sel par rapport au témoin sans sel. Le pourcentage de stimulation 

diminue à 24°C et à 30°C, mais augmente brusquement à 36°C puisqu’il atteint 

131.57 % par rapport aux témoins sans sel incubés à la même température. 

L’effet de la température sur la croissance de Verticillium dépend de la 

température à laquelle est soumis le champignon. Une stimulation de la croissance 

est notée pour les températures de 24°C et 30°C par rapport à celle notée à 18°C. 

La température optimale dans nos conditions de culture correspond à 30°C. 

Cependant, une chute brutale de la croissance des thalles est observée à 36°C, et 

ce, pour toutes les concentrations salines de l’expérience. La comparaison des 

pourcentages d’inhibition de la croissance due à l’exposition des cultures à 36°C

32 

montre des différences significatives entre les différents traitements salins. Ainsi, 

en absence de sel, le pourcentage d’inhibition de la croissance due à l’exposition 

des cultures à 36°C est de 81.61 % par rapport à la croissance enregistrée à 18°C. 

En présence de sel, l’inhibition de la croissance diminue avec l’augmentation de la 

salinité du milieu. Elle n’est que de 74.82 % et 71.42 % respectivement à 12 et 16 

g/l de NaCl (Planche 2). 

Tableau 3. Effet de l’interaction salinité-température sur la croissance 

diamétrale de l’isolat P80 de Verticillium. 

Diamètre moyen des colonies (cm) après 3 semaines d’incubation 

Température d’incubation en °C 

Concentration 

en NaCl (g/l) 

18 24 30 36 Inhibition*(%) 

à 36°C 

0 31.0±0.9 34.6 ±1.1 36.1±0.6 5.7±0.2 81.6 

4 32.8±0.7 35.5±0.8 37.3±0.4 6.5±0.4 80.1 

8 34.3±0.8 37.2±0.5 38.6±1.0 11.6±1.0 66.1 

12 42.1±0.9 41.2±0.9 41.9±0.4 10.6±0.6 74.8 

16 46.2±0.4 43.2±0.7 47.6±1.0 13.2±0.5 71.4 

Stimulation ** 49.0 24.8 31.8 131.5 - 

(%) 

* Pourcentage d’inhibition de la croissance diamétrale à 36°C par rapport à celle de 18°C. 

** Pourcentage de stimulation de la croissance diamétrale à 16g/l par rapport aux témoins sans sel 


En se basant sur les taux de la croissance mycélienne de l’isolat P80 de 

Verticillium observés sur milieux enrichis en sel, on peut en conclure que le 

chlorure de sodium stimule le développement de ce parasite même à de très fortes 

concentrations allant jusqu’à 60g/l.

33 

Planche 2. Effet de l’interaction salinité-température sur la croissance 

diamètrale de l’isolat P80 de Verticillium après trois semaines 

d’incubation. 

A. Croissance diamétrale du champignon exposé à 24°C 

B. Croissance diamétrale du champignon exposé à 36°C 

[0 ; 4 ; 8 ; 12 ; 16] : concentration saline du milieu de culture en g/l de NaCl

34 

Bien que sa croissance décline au delà de ces concentrations, le champignon tolère 

des salinités extrêmement élevées. 

Les concentrations de sel les plus favorables sont situées entre 5 et 20g/l de NaCl. 

Sous ces concentrations salines, la vitesse de croissance journalière est plus grande 

que celle manifestée en absence de sel. Nos résultats concordent avec ceux de Besri 

(1977); Ioannou et al. (1977) et Afailal (1987). Ces auteurs ont montré la capacité 

de Verticillium à se développer sous des potentiels osmotiques bas, avec une 

stimulation de la croissance à des concentrations salines qui rappellent celles de 

nos résultats. 

Une autre composante de la biologie de Verticillium est également stimulée par la 

présence de sel à savoir la conidiogénèse. Le taux de sporulation est fortement 

augmenté sous 15g/l de NaCl. Notre concentration optimale diffère de celle de 

Ioannou et al. (1977). Ces auteurs ont montré que l’augmentation de la production 

de conidies a lieu pour des potentiels osmotiques compris entre –2 et –20 bars soit 

des concentrations allant de 3.5 à 29 g/l de sel respectivement. 

La stimulation de la sporulation sous l’effet de la salinité serait due à un effet 

spécifique des ions (Benyahya, 1998). Selon cet auteur, les ions Na + et Cl - 

stimulent la production des sporanges de P. citrophthora et P. parasitica alors que 

l’effet osmotique inhibe cette activité biologique. 

Chez Verticillium, l’augmentation de la sporulation sous l’effet du sel ne semble 

pas être due uniquement à l’effet des ions Na + et Cl - mais aussi à l’effet osmotique. 

Ducan & Himelick, (1986) ont montré que la sporulation de Verticillium dahliae 

peut être fortement stimulée par un potentiel de pression négative sans que le 

milieu ne soit amendé de sel. Ces auteurs ont cultivé Verticillium sur des milieux 

nutritifs placés dans un dispositif permettant le maintien d’un potentiel de 

pression négative de –0.039 PMa rappelant l’environnement des vaisseaux du 

xylème. 

Nos résultats concernant l’effet du sel sur la formation des microsclérotes n’ont pas 

montré, dans nos conditions expérimentales, d’effet stimulateur du sel sur la 

sclérogénèse. L’aptitude de l’isolat P80 à former les organes de conservation est 

maintenue stable par les faibles concentrations de sel (0 à 5 g/l) mais diminue avec

35 

l’augmentation de la salinité. Néanmoins, les microsclérotes sont encore produits à 

la concentration de 60g/l de NaCl mais tardivement sur des cultures âgées. Ces 

résultats ne sont pas en accord avec ceux de Afailal (1987) qui a observé une 

stimulation de la sclérogénèse pour une augmentation de la salinité de 0 à 6g/l de 

NaCl. Cependant, Ioannou et al. (1977) ont bien rapporté que chez Verticillium, la 

production des microsclérotes est moins sensible à la baisse du potentiel 

osmotique que la sporulation ou la croissance mycélienne. 

L’étude de l’effet de la combinaison salinité-température sur le développement de 

l’isolat P80 a permis de dégager les constatations suivantes: 

- La salinité stimule la croissance du champignon alors que l’exposition à 

36°C la réduit sévèrement. 

- La stimulation de la croissance avec la salinité est relativement plus 

importante à 36°C que celle observée pour les températures plus basses de 

l’expérience. 

- L’inhibition de la croissance due à l’exposition à 36°C par rapport à celle 

enregistrée à 18°C est plus faible en présence de 16g/l de NaCl qu’en absence de 

sel. Alors que l’exposition à 36°C réduit la croissance in vitro de Verticillium sur 

milieu dépourvu de sel de 81.61%, la salinité semble réduire l’effet néfaste de cette 

température élevée puisque l’inhibition de la croissance n’est que de 71.42% à 

16g/l. 

Nos résultats laissent supposer une action positive de la salinité sur la capacité du 

Verticillium à mieux tolérer les températures élevées. Cette hypothèse est appuyée 

par les travaux de Subbarao et al., (1993a). Ces auteurs ont étudié l’effet de 

l’interaction température-potentiel osmotique sur la croissance de Fusarium 

moniliforme, agent de la pourriture du figuier. Ils ont montré que la croissance de 

F. moniliforme est plus importante à 35°C pour les potentiels osmotiques bas que 

pour les potentiels osmotiques élevés. Ils ont déduit quant à la capacité de 

Fusarium moniliforme à se développer dans un environnement chaud et sec. 

Les raisons de cette inversion de la croissance ne sont pas claires mais ce 

phénomène a été observé chez d’autres champignons (Subbarao et al., 1993a et b).

36 

Les parasites du genre Verticillium se rencontrent fréquemment sous les climats 

tempérés. Garber & Presley (1971) ont montré que les températures élevées 

réduisent l’effet des isolats de Verticillium du coton. Beye (1982) a attribué la 

dominance de Verticillium dans l’écosystème du littoral atlantique marocain, entre 

autres, à la douceur des températures. 

D’après nos résultats, on peut penser que la combinaison salinité-température 

pourrait favoriser la survie et l’adaptation de Verticillium à des conditions de 

sécheresse et de chaleur. La croissance du champignon est certes faible à 36°C en 

présence des fortes concentrations de sel mais plus importante qu’en absence de ce 

dernier. L’étude de l’interaction de ces deux facteurs abiotiques sur le 

développement du Verticillium dans un sol salin, naturellement infesté, 

apporterait plus d’informations sur la conservation du champignon en conditions 

de chaleur. 

La réponse du Verticillium aux potentiels osmotiques bas peut avoir un intérêt 

significatif pour la survie en dehors des plantes hôtes (Ioannou et al., 1977). En 

effet, les parasites qui vivent dans le sol sont amenés à s’adapter aux conditions de 

dessèchement entraînant l’augmentation de la concentration saline de la surface 

du sol. Ducan & Himelick, (1986) suggèrent à leur tour que la réponse de 

Verticillium à la baisse du potentiel osmotique peut être également avantageuse 

pour supporter les potentiels de pression négative qui règnent dans les vaisseaux 

du xylème. Sous de telles conditions, la sporulation serait stimulée comme le 

démontrent nos résultats et les travaux pré-cités, ce qui favoriserait la prolifération 

du parasite et la distribution du pathogène dans toute la hauteur de la plante. 

Par ailleurs, nos résultats ont montré une stimulation du pouvoir germinatif des 

conidies avec l’augmentation de la salinité de 0 à 15 g/l. Vu la rareté des travaux 

sur l’influence de la salinité sur cette activité biologique du Verticillium alboatrum 

, nous n’avons pas pu faire de comparaisons quant à la concentration 

optimale stimulatrice de la germination des conidies. Néanmoins, l’effet du sel sur 

la germination des conidies semble dépendre de l’espèce de Verticillium. 

Effectivement, la baisse du potentiel osmotique inhibe le pouvoir germinatif des 

conidies de Verticillium lecanii (Chandler et al., 1994).

37 

Les résultats permettent encore une fois de montrer que la salinité favorise la 

reproduction de l’agent pathogène in vitro. Ils laissent supposer une action 

positive du sel in vivo dans les tissus des plantes infectées si celles-ci sont 

soumises à un stress salin ou hydrique. La richesse de la sève en sel pourrait 

stimuler la sporulation du champignon et favoriser la colonisation de la plante. 

Pour vérifier cette hypothèse, nous nous proposons d’étudier l’effet de la salinité 

sur le développement in vivo de Verticillium albo-atrum et l’interaction des deux 

facteurs, abiotique et biotique, sur le comportement des plantes hôtes.

38 

Chapitre 2 : Etude des effets de la salinité sur la relation 

hôte-parasite dans le cas de la verticilliose 

Introduction 

La verticilliose est une maladie vasculaire qui cause chez la tomate 

rabougrissement et flétrissement. Au Maroc, elle présente une prévalence dans les 

sols où l’irrigation se fait avec des eaux salées (Besri, 1990). 

La salinité est souvent réputée être responsable de l’attaque sévère des plantes par 

les champignons pathogènes du sol. C’est le cas des trachéomycoses dues aux 

champignons du genre Fusarium et Verticillium qui sont aggravées par la salinité 

des sols et des eaux d’irrigation. Standaert (1978) a montré que la nutrition salée 

augmente la sévérité de la fusariose chez la tomate. Green, (1981) dans un article 

de synthèse a précisé que les symptômes de la verticilliose sont variables selon les 

conditions du milieu, les plantes hôtes et le pouvoir pathogène des Verticillium. 

Besri, (1990) et Besri & Afailal, (1993) ont rapporté que la salinité des sols et des 

eaux d’arrosage contribue à l’aggravation de la verticilliose de la tomate en 

augmentant la sensibilité de la plante à l’attaque par Verticillium dahliae. 

Nachmiais et al., (1993) ont étudié l’effet de la salinité et son interaction avec deux 

maladies de la pomme de terre ; le flétrissement dû à Verticillium dahliae et le 

"blight" précoce causé par Alternaria solani. Ces auteurs ont rapporté une hausse 

dans l'expression des symptômes chez les plantes cultivées en milieu semi-aride et 

arrosées avec des eaux à différents degrés de salinité. Dans le même sens, Howel et 

al., 1994) ont signalé que le comportement de deux variétés de luzerne vis-à-vis de 

Verticillium albo-atrum change si les cultivars sont exposés à des irrigations avec 

des eaux sodées. 

Chez d’autres pathosystèmes, la réaction des plantes hôtes à l’attaque fongique est 

également exagérée par le stress salin. Ainsi, une augmentation des symptômes 

des pourritures dus à Phytophthora sp. a été observée sur plusieurs espèces 

cultivées notamment sur Chrysanthemum (Mac Donald, 1984), sur Citrus (Blaker 

& Mac Donald, 1986, El Guilli et al., 2000) et sur tomate (Swiecki & Mac Donald, 

1991 ; Snapp & Shennan, 1994). De même, une aggravation des attaques de

39 

quelques variétés de Maïs par P. phaseoli a été constatée avec l'augmentation de la 

concentration en sel des eaux d'irrigation utilisées (El Mahjoub et al., 1979). Dans 

le même sens et selon Duczek (1993), il existe une corrélation positive entre le 

degré de salinité et l'apparition du piétin commun du blé et de l'orge de printemps. 

Soliman & Kostandi, (1998) ont montré que la sensibilité de certaines variétés de 

maïs à Ustilago maydis est conditionnée par le stress salin. Elle serait inversement 

en rapport avec la tolérance à la salinité. 

Ces données nous ont incité à étudier, dans le cadre de la verticilliose, l’effet de la 

salinité sur la relation hôte-parasite. Dans cette voie, nous proposons d’examiner, 

en conditions salines de culture, la manifestation d’un isolat de Verticillium alboatrum 

sur de jeunes plantes de tomate et d’étudier l’effet de la richesse du milieu 

nutritif en NaCl sur la variabilité de son pouvoir pathogène sur la tomate mais 

aussi envers d’autres plantes hôtes non habituelles. 

I. Effet de l’interaction salinité-Verticillium sur la 

manifestation de la maladie chez la tomate 


1. Plantes hôtes et conditions de culture 

Les caractéristiques des variétés de tomate testées, la mise en culture en pépinière 

et en pots et les conditions de culture ont été décrites au chapitre I. 

2. Inoculation des plantules 

2.1. L’agent pathogène : Verticillium albo-atrum, forme à 

microsclérotes 

L’isolat P80 de V. albo-atrum a été utilisé pour infecter artificiellement la tomate. 

Les caractéristiques morphologiques et pathogènes de cet isolat ont été décrites au 

chapitre précédent. Le champignon est cultivé en boite de Pétri sur milieu PDA ou 

milieu Malt gélosé à 2 %, à l’obscurité et à 24± 1° C.

40 

2.2. Préparation de l’inoculum 

Une pré-culture est réalisée en étalant une suspension concentrée de spores à 

partir de la culture mère de l’isolat P80, sur des boites de Pétri de 9cm contenant 

25ml du milieu PDA. Les cultures sont lavées quatre jours plus tard avec de l’eau 

distillée stérile. La densité de la suspension de spores recueillie est ajustée à 10 6 

par estimation de la densité initiale sur cellule de Malassez puis dilution. 

2.3. Protocole d’inoculation 

Les plantes de tomate, Marmande Claudia et Marmande VR, âgées de trois 

semaines, arrivées au stade premières vraies feuilles, sont délicatement arrachées 

de la pépinière. Les racines blessées sont trempées pendant 20 minutes dans 

l’inoculum fraîchement préparé. Les plantes sont ensuite transplantées dans des 

pots en plastique de 450 cm 3 , contenant du sable stérile préparé selon le protocole 

décrit précédemment, et arrosées au niveau du collet avec 3 ml du même 

inoculum. Les lots témoins subissent le même traitement mais l’eau stérile 

remplace la suspension de spores. 

3. Traitement par le sel 

L’application de la solution nutritive d’arrosage enrichie de NaCl a lieu deux 

heures après la transplantation des plantes témoins et infectées. Les 

concentrations en sel utilisées sont 0 ; 30 ; 60 et 90 millimoles de NaCl par litre 

soit 0 ; 1.75 ; 3.50 et 5.25 g/l. Ces concentrations se rapprochant des taux de 

salinité des sols du littoral atlantique marocain. 

Pour chaque traitement salin, deux lots de 15 plantes chacun sont constitués ; un 

lot de plantes saines et un lot de plantes infectées à raison de trois plantules par 

pot de culture. 

4. Notations des résultats 

4.1. Croissance des plantes 

La verticilliose se traduit par divers symptômes caractéristiques parmi eux le 

déficit de la croissance et les altérations foliaires. Le sel affecte également la

41 

croissance de la tomate et provoque aux fortes concentrations de sel un 

jaunissement des feuilles. Pour estimer l’action combinée des deux stress sur les 

plantes de tomate, nous avons opté pour l’évaluation de la croissance en mesurant 

la hauteur de l’épicotyle, et le poids frais des parties aériennes. Il a été difficile 

d’estimer l’action du champignon par les altérations foliaires vu que le 

jaunissement des feuilles parfois non typiques peut être attribué à l’effet de la 

salinité. 

4.2. Emission des feuilles 

Ce paramètre est souvent utilisé comme indicateur de la sensibilité de la tomate à 

la salinité mais aussi comme un critère de sélection pour la résistance à la 

verticilliose chez la tomate (Bey & Lafay, 1985). Les feuilles bien développées sont 

dénombrées en fin d’expérience. 

4.3. Colonisation des plantes par le pathogène 

Outre les critères d’évaluation de l’action des deux stress sur le développement des 

plantes, nous avons jugé nécessaire d’évaluer l’action de la salinité sur le pouvoir 

de colonisation de la plante par l’agent pathogène comme critère propre à 

l’infection avec Verticillium. 

Le ré-isolement de l’agent pathogène est effectuée en fin d’expérience. Le 

champignon est recherché dans les racines, l’hypocotyle et le dernier entrenoeud 

de toutes les plantes. Des rondelles de 3mm d’épaisseur de chaque partie sont 

stérilisées dans l’alcool pendant deux minutes, rincées plusieurs fois à l’eau 

distillée stérile, séchées rapidement sur un papier absorbant avant d’être déposées 

à la surface de boites de Pétri contenant de l’eau gélosée à 2%. La lecture des 

résultats a lieu après une semaine d’incubation à 24°C. En cas de succès, on peut 

voir au bout d’une semaine une colonie se développer à proximité des fragments 

du végétal. Les résultats sont exprimés en pourcentage des plantes ayant donné un 

ré-isolement positif (PRP) pour chaque niveau de la plante et par traitement salin. 

Il est calculé comme suit :

42 

PRP = nombre de plantes ayant donné un ré-isolement positif x 100 

Nombre total des plantes de chaque série 

4.4. Analyse statistique des résultats 

Nous avons procédé à une analyse des variances à deux critères de classification. 

Cette analyse est suivie par le test de Newman-keuls au seuil de 5% pour la 

comparaison des moyennes. Le logiciel utilisé est le SPSS. 

B. Résultats 

1. Manifestations externes de la combinaison Salinité-Verticillium 

sur les plantes de tomate hôtes 

1.1. Effet sur la croissance des plantes 

- Effet sur la variété Marmande Claudia 

Chez les plantes saines cultivées sur substrat arrosé avec la solution saline, la 

croissance est ralentie avec l’augmentation de la concentration en NaCl. La 

réduction de la croissance touche aussi bien la taille des plantes (figure 12) que le 

poids frais des parties aériennes (figure 13). Des différences significatives sont 

notées entre les différents traitements salins à l’exception des concentrations de 60 

et 90mM pour lesquelles l’effet du sel est statistiquement le même (Planche 3). 

En absence de sel, l’infection par l’isolat P80 de Verticillium se manifeste sur les 

plantes par une réduction de la croissance par rapport aux plantes saines. Le 

déficit de croissance est de l’ordre de 40 % pour la taille de l’épicotyle et de 22.1% 

pour le poids frais des parties aériennes. 

Les plantes infectées et soumises aux traitements par le sel enregistrent une 

réduction sévère de leur croissance par rapport aux témoins sains sans sel. Aux 

faibles concentrations de sel (30 mM), le pourcentage d’inhibition de la hauteur 

des plantes due à l’effet combiné de la salinité et de l’infection par Verticillium est 

de 63.4 %, celui du poids frais est de 45.22 %. Aux fortes concentrations de sel 

(90mM), les plantes infectées sont très rabougries et enregistrent des déficits de

43 

Figure 12 . Effet de la combinaison salinité-Verticillium sur 

la taille de l'épicotyle des plantes de tomate Marmande 

Claudia (après six semaines) 

Longueur de l'épicotyle (en cm) 

20 

18 

16 

14 

12 

10 

8 

6 

4 

2 

0 

plantes saines 

plantes infectées 

0 30 60 90 

Concentration en sel de la solution d'arrosage (en mM de NaCl) 

Figure 13. Effet de la combinaison salinité-Verticillium sur 

le poids frais des parties aériennes des tomates Marmande 

Claudia (après six semaines) 

6 

Poids frais des parties aériennes en g 

5 

4 

3 

2 

1 

0 

Plantes saines 

Plantes infectées 

0 30 60 90 

Concentration en sel de la solution d'arrosage (en mM de NaCl)

44 

Planche 3. Effet de la salinité sur la croissance des plantes de tomate, 

variété Marmande Claudia, saines et infectées avec Verticillium après 

six semaines de culture 

A. Plantes saines témoins (T) 

T0 ; T30 ; T60 ; T90 : plantes saines traitées 0 ; 30 ; 60 et 90mM de NaCl 

B. Plantes inoculées avec l’isolat P80 de Verticillium (P) 

P0 ; P30 ; P60 ; P90 : plantes infectées et traitées avec 0 ; 30 ; 60 et 90mM de 

NaCl

45 

croissance très importants ; 81.43% et 69.28% respectivement pour le déficit de la 

taille et du poids frais des tiges. 

- Effet sur la variété Marmande VR 

En absence de sel, l’inoculation des plantes Marmande VR avec l’isolat P80 de 

Verticillium provoque après six semaines d’observation une réduction de la taille 

de l’ordre de 49.5 % (figure 14A) et du poids frais de 38.4 % (figure 14B). 

En présence de sel, les plantes infectées ont le même comportement vis-à-vis des 

effets combinés de la salinité et de l’infection que Marmande Claudia, à savoir une 

régression très importante de la croissance des plantes par rapport à leurs témoins 

sains sans sel. Les pourcentages d’inhibition de la croissance des plantes atteignent 

aux faibles concentrations de sel 67.12 % pour le paramètre taille des plantes et 

55.79 % pour le poids frais des parties aériennes. La réduction de la croissance 

s’amplifie aux fortes concentrations de sel (90 mM) pour atteindre 80.98 % et 69.8 

% respectivement pour la taille et le poids frais des tiges (Planche 4). 

1.2. Effet sur l’émission de feuilles 

Les cultures ont été arrêtées après 50 jours. Les feuilles bien développées par 

chaque plant sont dénombrées. Les résultats sont consignés sur le tableau 4. 

Ils montrent que l’émission des feuilles chez les deux variétés de tomate ne semble 

pas être modifiée par le traitement salin qui leur est imposé. Le nombre de feuilles 

bien développées chez les témoins sans sel ne diffère pas statistiquement de celui 

des plantes traitées, indépendamment de la concentration saline des solutions 

d'arrosage. En revanche, l’infection avec Verticillium provoque une légère mais 

significative stimulation de l’émission des feuilles chez la variété Marmande 

Claudia. 

La combinaison salinité-Verticillium modifie les réactions des tomates observées 

pour chacun des deux stress pris à part. En effet, l’interaction des deux facteurs se 

manifeste chez les deux variétés de tomate par une réduction de l’émission des 

feuilles par rapport aux témoins infectés sans sel alors qu’aucun des deux facteurs 

ne réprime le développement foliaire à ce stade de la croissance. Cette réduction 

est d’autant plus importante que la concentration en sel augmente.

46 

Figure 14 A. Effet de la combinaison salinité-Verticillium 

sur la taille des plantes de tomate Marmande VR 

25 

Longueur de l'épicotyle en cm 

20 

15 

10 

5 

plantes témoins 


0 

0 30 60 90 

Concentration en sel de la solution d'arrosage en mM de NaCl 

Figure 14 B. Effet de la combinaison salinité- 

Verticillium sur le poids frais des parties aériennes des 

tomates Marmande VR 

Poids frais des parties aériennes en g 

6 


5 


4 

3 

2 

1 

0 

0 30 60 90 

Concentration en sel de la solution d'arrosage en mM de NaCl

47 

Planche 4. Effet de la salinité sur la croissance des plantes de tomate, 

variété Marmande VR, saines et infectées avec Verticillium après six 

semaines de culture 

A. Plantes saines témoins (T) 

T0 ; T30 ; T60 ; T90 : plantes saines traitées 0 ; 30 ; 60 et 90mM de NaCl 

B. Plantes inoculées avec l’isolat P80 de Verticillium (P) 

P0 ; P30 ; P60 ; P90 : plantes infectées et traitées 0 ; 30 ; 60 et 90mM de NaCl

48 

Tableau 4. Effet de la combinaison salinité-Verticillium sur l’émission 

de feuilles chez deux variétés de tomate 

Nombre de feuilles bien émises 

Variété Marmande Claudia Marmande VR 

NaCl en mM 

Plantes 

saines 

Plantes 

infectées 

Plantes 

saines 

Plantes 

infectées 

0 5.47±0.24 a 6.20±0.32 a 5.80±0.20 a 6.13±0.17 a 

30 5.33±0.23 a 5.93±0.33 b 5.67±0.23 a 5.40±0.24 b 

60 5.40±0.24 a 5.40±0.24 bc 5.73±0.22 a 5.20±0.27 b 

90 5.40±0.24 a 5.27±0.22 c 5.73±0.33 a 4.67±0.23 c 

Deux résultats lus sur une même colonne accompagnés de la même lettre ne diffèrent pas 

statistiquement au seuil de 5%. 

2. Manifestations internes 

L’aptitude du champignon à coloniser les plantes de tomate soumises au stress 

salin a été évaluée par la recherche du parasite à trois niveaux du végétal ; la 

racine, l’hypocotyle et l’apex de la tige. Les résultats des pourcentages de réisolements 

positifs du pathogène à partir des plantes infectées et différemment 

traitées par le sel sont consignés sur le tableau 5. 

Chez les deux variétés de tomate, le champignon a été ré-isolé à partir des trois 

niveaux des plantes infectées et ceci, pour tous les traitements salins appliqués. 

Les pourcentages de ré-isolements positifs augmentent avec l’augmentation de la 

concentration saline de la solution d’arrosage pour les trois niveaux du végétal. A 

90mM de NaCl, le champignon a été ré-isolé à partir de toutes les plantes et à tous 

les niveaux utilisés. Il faut signaler que le taux de colonisation de la base des tiges 

est plus élevé que celui des racines. De même les pourcentages de ré-isolements de 

Marmande Claudia sont plus élevés que ceux de Marmande VR.

49 

Tableau 5. Effet de la salinité sur la colonisation des tomates par 

l’isolat P80 de Verticillium estimé par le pourcentage de ré-isolement 

positif (PRP) après huit semaines 

Pourcentages des ré-isolements positifs (PRP) 

Variétés Marmande Claudia Marmande VR 

NaCl Racine Hypocotyle Apex Racine Hypocotyle Apex 

(mM) 

0 52.4 72.2 45.3 45.3 62.2 35.2 

30 64.7 81.2 55.1 52.4 78.3 52.0 

60 89.8 92.4 82.8 72.3 85.4 75.5 

90 100 100 100 100 100 100 


Pour estimer l’impact de la salinité sur le développement de la verticilliose, les 

plantes de tomate infectées ont été soumises à des arrosages successifs avec des 

eaux chargées de NaCl. 

Les tomates, Marmande Claudia et VR, réagissent à l’infection par l’isolat P80 de 

Verticillium, par un déficit de la croissance touchant la taille et le poids frais des 

parties aériennes De même, bien que les variétés testées soient moyennement 

tolérantes à la salinité, elles réagissent au stress salin par une réduction de la 

croissance. La combinaison salinité-infection se manifeste par une aggravation des 

symptômes de rabougrissement. Les mesures de la taille et du poids frais des tiges 

montrent un effet additif des effets des deux facteurs séparés plutôt qu’un effet 

synergique. L’existence donc d’une interaction entre les deux stress n’apparaît pas 

pour le critère croissance des plantes. Nos résultats concordent avec les travaux de 

Nachmias et al., (1993), sur la verticilliose de la pomme de terre cultivées dans les 

zones semi arides à forte salinité. Ces auteurs ont montré que aussi bien la salinité 

que l’infection par Verticillium induisent chacune la sénescence précoce de la 

pomme de terre. Ils ont en outre observé une augmentation des effets de la

50 

verticilliose avec l’augmentation de la salinité des sols sans toutefois qu’il y est 

signe d’une interaction substantielle entre les deux facteurs. 

L’émission des feuilles est parmi les critères d’évaluation de l’expression de la 

verticilliose chez la tomate. Selon les variétés, la réaction à l’infection peut 

s’exprimer par une stimulation ou une régression du développement de l’appareil 

foliaire (Beye & Lafay, 1985). C’est le cas de la variété Marmande Claudia qui réagit 

à l’infection par une légère stimulation de l’émission des feuilles alors que la 

variété VR ne montre pas, au même stade du développement, de modifications 

dans le déploiement des feuilles. 

En outre, la salinité ne semble pas perturber l’émission de feuilles chez les deux 

variétés de tomate après 7 semaines de culture. 

La combinaison salinité-Verticillium modifie les réactions des tomates observées 

pour chacun des deux facteurs pris à part. A cet effet, nos résultats démontrent un 

ralentissement dans l’émission des feuilles chez les deux variétés comme effet 

direct de l’interaction salinité-Verticillium sur le développement de l’appareil 

foliaire. Cette perturbation serait en rapport avec une plus grande sensibilité des 

variétés de tomate à la verticilliose en conditions salines. Cette hypothèse peut être 

confirmée par nos résultats sur les niveaux de colonisation des tiges par l’agent 

pathogène en présence de sel. En effet, la salinité semble augmenter le pouvoir 

parasitaire du champignon qui envahit les tissus de la racine et se propage dans la 

totalité de la tige puisqu’il a été ré-isolé, avec un grand pourcentage, de l’extrémité 

des plantes traitées par les fortes concentrations de sel. Nous avons montré au 

chapitre précédent que la salinité du milieu stimule la reproduction du 

champignon in vitro. On peut supposer que in vivo, la composition de la sève qui 

est le reflet de la composition du sol ou de la solution nutritive, stimulerait la 

sporulation du champignon installé dans les racines et par voie de conséquence, 

permettrait une colonisation plus aisée des vaisseaux conducteurs de la tige. 

La stimulation de la colonisation des plantes par l’agent pathogène en présence de 

NaCl a été rapportée par plusieurs travaux notamment ceux de Mac Donald (1984) 

sur le couple Phytophthora cryptogea-Chrysanthemum, de Afailal (1987) sur le 

couple Verticillium-tomate et ceux de Benyahia (1998) sur le couple P. parasitica-

51 

agrumes. Ces auteurs ont tous montré que l’augmentation de la salinité du milieu 

favorise une colonisation plus intense des plantes par l’agent pathogène. 

La relation entre le taux de colonisation de la plante par le parasite et la sévérité de 

la maladie a été établie par plusieurs auteurs ; Standaert (1975) et Smith & Hardy 

(1982) sur le pathosystème Fusarium-tomate, Brand et al., (1984) sur le couple 

Verticillium-menthe et Garas et al., (1986) sur le couple Verticillium-coton. Selon 

ces auteurs, la différence de sensibilité entre les plantes hôtes réside dans 

l’importance de la prolifération du champignon à l’intérieur des tiges des plantes 

sensibles. 

A la lumière de ces données, on peut supposer que la plus grande colonisation des 

plantes de tomate soumises au stress salin de nos conditions expérimentales 

témoigne de leur plus grande sensibilité à la maladie qui s’est traduite par les 

symptômes sévères de rabougrissement. 

II. Effet de la salinité sur la variabilité du pouvoir pathogène 

de Verticillium albo-atrum 

Introduction 

Les champignons du genre Verticillium sont connus par leur grande facilité de 

variations. Ces variations touchent aussi bien la morphologie des thalles que le 

pouvoir pathogène (Boisson & Lahlou, 1980 ; 1982; Lahlou & Boisson, (1981). Ces 

auteurs ont réussi à obtenir, après vieillissement d’une culture d’une souche 

sauvage de Verticillium albo-atrum, des variants qui ont perdu, au cours de la vie 

saprophytique, leur aptitude à la sclérogénèse et/ou leur pouvoir pathogène vis-àvis 

de la tomate. Ces variations sont spontanées. Lahlou, (1983) disait : « ..toute 

population de microconidies issues d’une culture clonale de phénotype sauvage est 

composée de lignées de pouvoir pathogène très variable. Lorsque la population est 

inoculée en masse à de jeunes plants de tomates, les lignées qui s’expriment 

peuvent être celles qui, testées isolément, ont un pouvoir pathogène fort, moyen ou 

faible. La variabilité du pouvoir pathogène des lignées et leurs interactions au sein

52 

des populations sont à l’origine des variations du pouvoir pathogène observées au 

cours du vieillissement des cultures..». 

L’expression du pouvoir pathogène de Verticillium est la résultante des 

interactions entre l’agent pathogène et la résistance de la plante. Elle se traduit par 

l’apparition des symptômes de la plante malade. Les mécanismes qui régissent ces 

interactions sont bien connus ; la pathogénécité du champignon est relatée à ses 

capacités à produire au contact de l’hôte des enzymes ( Mussel, 1973 ; Meyer et 

Dubery, 1993) des toxines (Gour & Dube, 1985 ; Nachmiais et al., 1982) et des 

phytohormones (Cronshaw & Pegg, 1976). Les variabilités de ces composantes de 

l’agressivité peuvent expliquer les variations du pouvoir pathogène des individus 

d’un même clone (Lahlou, 1983 ; Chaib, 1987 et Sebti, 1982). 

Si l’origine des variations spontanées de la morphologie et du pouvoir pathogène 

du Verticillium n’est pas suffisamment élucidée, il est établi que ces variations 

peuvent être déclenchées par différents facteurs de l’environnement du pathogène. 

Ainsi, la quantité d’inoculum du Verticillium peut avoir de grandes conséquences 

sur l’expression du pouvoir pathogène. La relation entre la densité de l’inoculum et 

la gravité de la maladie a fait l’objet de plusieurs études. Les travaux de 

Schnathorst & Mathre, (1966) et ceux de Pullman & Devay, (1982) sur le coton, de 

Franck et al., (1975) sur la pomme de terre, et de Ashworth et al., (1979), Grocan et 

al., (1979) et Visser & Hatting, (1980) sur la tomate, ont montré une corrélation 

positive entre le degré d’expression de la maladie et l’augmentation de la densité 

de l’inoculum. La plus grande manifestation de la maladie serait liée à une plus 

grande attaque des racines par le parasite et/ou une incapacité de la plante à 

mettre en œuvre ses mécanismes de défense face aux attaques multiples du 

parasite (Chaib, 1987). 

Le maintien prolongé d’un isolat de Verticillium au contact d’une plante hôte 

différente de la plante qui lui est spécifique peut être la cause de variations du 

pouvoir pathogène. Ces variations vont dans le sens d’une perte de l’agressivité visà-vis 

de l’hôte d’origine et l’acquisition de nouvelles aptitudes pathogéniques à 

l’encontre de l’hôte inhabituel. Ces variations sont souvent accompagnées d’un 

changement dans les caractères culturaux (El Aissami, 1990). Par conséquent, la

53 

notion de spécificité parasitaire chez Verticillium n’est pas figée. Elle est sujette à 

évolution. 

Ainsi, Fordyce & Green, (1963) sont parvenus, après plusieurs passages sur tomate 

d’un isolat de Verticillium albo-atrum, connu pour sa spécificité à la menthe, à 

l’adapter à ce nouvel hôte. Dans le même sens, l’adaptation d’un isolat de 

Verticillium, d’origine tomate à de nouvelles plantes hôtes, après une série d’ 

inoculations et de ré-isolements successifs de l’agent pathogène, a été couronnée 

de succès sur plusieurs pathosystèmes. Citons à titre d’exemples l’adaptation d’un 

isolat de tomate au piment (Douira & Lahlou, 1989) et à la luzerne (El Aissami & 

Lahlou, 1999). Selon ces derniers auteurs, la variation de la pathogénécité de cet 

isolat vis-à-vis de l’hôte d’origine d’une part et l’hôte inhabituel d’autre part, serait 

la conséquence d’un ensemble de modifications touchant les différents modes 

d’action du parasite à la suite de la pression exercée par l’hôte inhabituel, la 

luzerne, plante hautement sélective. 

En se basant sur ces informations bibliographiques, nous nous sommes demandés 

si la salinité du milieu nutritif pouvait avoir une influence sur la variabilité de 

l’expression du pouvoir pathogène de Verticillium d’autant plus qu’une 

augmentation de la gravité de la maladie a été constatée en présence de sel et que 

la salinité favorise le développement et la reproduction du champignon in vitro. 

Dans cette voie, nous avons successivement évalué l’impact de la salinité des eaux 

d’arrosage sur: 

- le potentiel infectieux de l’inoculum de l’isolat P80 sur la tomate, 

- le comportement de la tomate (Marmande Claudia) vis-à-vis d’une 

souche non pathogène de Verticillium 

- la spécificité parasitaire de l’isolat P80 d’origine tomate . 

A. Impact de la salinité sur le niveau infectieux de l’inoculum 

du Verticillium sur les plantes de tomate 

1. Matériel et méthodes 

1.1. Inoculation

54 

Nous avons utilisé des suspensions de spores du champignon (voir chapitre II) de 

concentrations croissantes ; 10 4 ; 10 5 ; 10 6 spores /ml. Les plantes de tomate, 

Marmande Claudia et Marmande VR, âgées de trois semaines ont été inoculées par 

trempage de leurs racines pendant 20 minutes dans une des suspensions de spores 

préparées. Les témoins subissent un trempage dans de l’eau distillée stérile. Après 

transplantation dans les pots, les plantes sont arrosées au niveau de leur collet 

avec 3ml de leur inoculum respectif. 

1.2. Traitement par le sel et conditions de culture 

Les plantes témoins et infectées par les différents inoculums sont régulièrement 

arrosées avec des solutions nutritives salines de différentes concentrations ; 0 ; 

20 ; 40 ; 60 et 80mM de NaCl. Elles sont maintenues dans une chambre de culture 

sous une photopériode de 16 heures à 24 ± 2°C. Pour chaque traitement salin, 

quatre lots de 15 plantes sont constitués correspondant chacun à une densité de 

l’inoculum. 

1.3. Estimation des résultats 

Après six semaines de culture, la taille de l’axe aérien des plantes différemment 

traitées par le sel et par les différents inoculums a été mesurée. Les résultats sont 

comparés selon le test de Newman-Keuls. 

2. Résultats : effet de la salinité sur le pouvoir infectieux de 

l’inoculum de Verticillium vis-à-vis de la tomate 

2.1. Effet sur la tomate Marmande Claudia 

Des résultats consignés sur la figure 15 se dégagent les points suivants : 

- en absence de sel, l’inoculation des plantes avec les inoculums à 

différentes concentrations de spores induit une réduction de la 

croissance de l’axe aérien par rapport aux témoins non inoculés. 

L’inoculum à 10 4 spores/ml provoque un déficit de la croissance 

semblable à celui induit par l’inoculum à 10 5 spores/ml mais diffère 

statistiquement de l’effet provoqué par l’inoculation avec 10 6 spores/ml.

55 

Figure 15. Influence de la salinité sur le niveau infectieux du 

taux d'inoculum de l'isolat P80 de Verticillium vis-à-vis de 

la tomate Marmande Claudia estimé par la taille des plantes 

inoculées après six semaines de culture 

30 


25 

20 

15 

10 


4 

inoculum à 10 spores/ml 


6 


5 

5 

0 

0 20 40 60 80 

Concentrations salines de la solution d'arrosage en mM de NaCl.

56 

- En présence de sel, le comportement des plantes infectées avec les 

différents inoculums dépend de la concentration saline imposée. Ainsi, pour 

les concentrations comprises entre 20-60mM de NaCl, les plantes saines et 

infectées montrent certes une taille plus faible que celles des témoins sans 

sel, mais toujours avec des différences significatives entre l’effet de 

l’inoculum à 10 4 et celui à 10 6 spores/ml. Néanmoins, à 80mM, la taille des 

plantes, ayant reçu l’action de l’inoculum à 10 4 spores/ml au niveau de leurs 

racines, est aussi affectée que celle des plantes inoculées avec 10 5 ou 10 6 

spores/ml. 

2.2. Effet sur la tomate Marmande VR 

Les effets de l’inoculation avec différentes concentrations de spores diffèrent selon 

que les plantes sont soumises ou non au stress salin. Les résultats de la figure 16 

montrent qu’en absence de sel, les effets des inoculums à 10 5 et 10 6 spores/ml sur 

la croissance des plantes sont de même importance et sont plus marqués que celui 

enregistré avec l’inoculum à 10 4 spores/ml. Ce résultat rejoint les observations 

faites sur la tomate Marmande Claudia. Cependant, dès que les plantes sont 

soumises au régime salin de l’expérience, elles répondent à l’infection avec les 

différents inoculums avec la même intensité quelque soit la concentration saline 

des solutions d’arrosage. Ainsi, pour une même salinité, les mesures de la taille des 

plantes infectées avec 10 4 , 10 5 ou10 6 spores/ml sont statistiquement semblables. 

3. Discussion et conclusion 

Le test de l’effet de la salinité sur le pouvoir infectieux de l’isolat P80 de 

Verticillium a montré que dans les conditions salines de culture, un inoculum de 

faible densité (10 4 spores/ml) est capable d’infecter les plantes de tomate et 

d’induire des symptômes de rabougrissement aussi sévères que ceux provoqués 

par un inoculum plus riches en spores (10 6 spores/ml), alors que sous un régime 

nutritif normal sans apport de sel, ce même inoculum n’induit qu’un léger déficit 

de la croissance.

57 

Figure 16. Influence de la salinité sur le niveau infectieux de 

l'inoculum de Verticillium vis-à-vis de la tomate 

Marmande VR après six semaines de culture 


35 

30 

25 

20 

15 

10 

5 


4 




5 

6 

0 

0 20 40 60 80 

Concentrations salines de la solution d'arrosage en mM de NaCl.

58 

L’augmentation du potentiel infectieux de l’inoculum à 10 4 spores/ml en présence 

de sel serait due à une action directe du NaCl sur les spores de l’inoculum et/ou sur 

la sensibilité de la plante à l’agent pathogène. 

Louvet et Alabouvette, (1988) ont proposé un modèle schématisant les interactions 

entre les facteurs déterminant une maladie tellurique. D’après ce modèle, le 

potentiel infectieux du sol dépendrait de la densité de l’inoculum et des effets de 

l’environnement sur cet inoculum (température, humidité, salinité, pH…). 

Dans nos conditions expérimentales, l’inoculation des racines est suivie par le 

traitement du substrat par des solutions riches en NaCl. En se basant sur nos 

résultats du premier chapitre concernant l’effet stimulateur de la salinité du milieu 

sur la germination des conidies de Verticillium in vitro, on peut supposer une 

action bénéfique du chlorure de sodium sur le pouvoir germinatif des conidies de 

l’inoculum au contact de la plante hôte et par voie de conséquence, une 

augmentation des points d’infection. Plus ces derniers sont nombreux, plus la 

plante sera attaquée et plus le degré de la maladie sera important. Cette hypothèse 

est corrobée par la plus grande sensibilité des plantes à un faible niveau 

d’inoculum observée en conditions de stress salin. 

Bien que dans les conditions normales de culture, la faible densité de l’inoculum de 

Verticillium n’entraîne pas d’apparition importante de la maladie, les 

modifications des concentrations salines du milieu nutritif peuvent contribuer à la 

prédisposition des racines à l’infection par le pathogène. Cette suggestion a été 

également avancée par Grote & Claussen, (2001). Ces auteurs ont, en effet, montré 

une augmentation rapide de la quantité de Phytophthora nicotianae dans les 

racines des tomates à la suite du traitement des plantes avec un faible taux 

d’inoculum du pathogène et une forte concentration du milieu nutritif ou 

l’exposition des plantes à une forte intensité lumineuse. 

Il faut toutefois rappeler que l’infection des plantes avec les différents inoculums 

dans nos conditions expérimentales a été réalisée artificiellement avec une 

suspension de spores. Dans la nature, l’inoculum de Verticillium est 

principalement constitué par les organes de conservation, les microsclérotes, 

situés au niveau du sol. Ces propagules germent en réponse aux stimuli que sont

59 

les exs udats racinaires de la plante hôte. Il faut être prudent avant de généraliser 

quanà à l’effet de la salinité sur le pouvoir infectieux d’un sol car il n’ y a pas eu 

d’expérience conduite dans ce sens. L’étude de l’influence du sel sur le pouvoir 

infectieux de l’inoculum d’un sol naturellement infesté par Verticillium pourrait 

lever ce doute. 

B. Influence de la salinité sur l’expression du pouvoir 

pathogène de deux isolats de Verticillium sur la tomate 


1.1. Test de pathogénécité 

1.1.1. L’isolat pathogène 

L’isolat P80 a été choisi dans ce test pour son fort pouvoir pathogène vis-à-vis de la 

tomate Marmande Claudia. Les caractéristiques de cet isolat ont été décrites au 

premier chapitre. 

1.1.2. L’isolat non pathogène 

L’isolat P3A est un clone d’un isolat initial obtenu par Lahlou, (1983). Ce clone est 

issu d’une culture mère conservée à 4°C pendant 9 mois. Inoculé à des plantes de 

tomate var Marmande Claudia, l’isolat P3A s’est montré peu pathogène. Sa 

morphologie n’a pas été modifiée par le vieillissement et rappelle celle de l’isolat 

initial, à savoir un mycélium blanchâtre et dense et une sclérogénèse importante 

apparaissant au bout de 6 à 7 jours de culture. 

Les cultures fongiques sont conduites sur milieu PDA à l’obscurité et à 24 ± 1°C. 

Une suspension de spores ajustée à 10 6 spores/ml est préparée à partir de chacun 

des deux isolats et sert alors d’inoculum. Après l’inoculation, les plantes sont 

arrosées régulièrement avec une solution nutritive complète enrichie en NaCl aux 

concentrations de 0 ; 20 ; 40 ; 60 et 80mM.

60 


L’incidence de la maladie est estimée par la taille de l’épicotyle et le poids frais des 

parties aériennes six semaines après inoculation. Les tests sont réalisés sur des lots 

de 15 plantes par isolat et par traitement salin. Les résultats sont comparés par 

analyse de variance suivie du test de Newman-Keuls. 

2. Résultats 

Après six semaines d’observation, les plantes saines soumises au traitement par le 

sel montrent une réduction régulière de la croissance sous l’effet des 

concentrations croissantes de NaCl de la solution d’arrosage allant de 0 à 80 Mm ; 

concentrations fréquentes dans les sols du littoral atlantique marocain. L’effet de 

la salinité se manifeste sur les deux paramètres de la croissance ; la taille des 

épicotyles (figure 17 A) et le poids frais des parties aériennes (figure 17 B). A 80 

mM de NaCl, la réduction de la taille par rapport aux témoins cultivés sans sel est 

de l’ordre de 48 % , celle du poids frais est de 54 %. 

Les plantes inoculées avec l’isolat pathogène P80 montrent des symptômes sévères 

de rabougrissement. La taille et le poids frais des tiges sont significativement plus 

faibles que ceux des témoins sains respectifs, à toutes les concentrations salines de 

l’expérience. 

Les plantes infectées avec l’isolat non pathogène montrent le même comportement 

vis-à-vis de la salinité que les témoins sains et ce, pour les faibles concentrations 

de NaCl. A partir de 60 mM, les deux paramètres de la croissance chutent 

brusquement pour rejoindre ceux des plantes infectées avec l’isolat agressif . A 80 

mM de NaCl, l’isolat non pathogène P 3 A provoque sur les tomates traitées les 

mêmes dégâts que ceux causés par l’isolat pathogène P80. 


L’effet de la salinité s’est manifesté sur l’expression du pouvoir pathogène des deux 

isolats de Verticillium, pathogène et non pathogène vis-à-vis des tomates 

Marmande Claudia. Ainsi, les plantes infectées et soumises au stress salin 

montrent :

61 

Figure 17A. Effet de la salinité de la solution d'arrosage sur 

le pouvoir pathogène de deux isolats de Verticillium vis-àvis 

des tomates Claudia estimé par la taille des épicotyles 

après six semaines. 

Taille de l'épicotyle en cm 

25 

20 

15 

10 

5 


Plantes infectées par l'isolat P80 

Plantes infectées par l'isolat P3A 

0 

0 20 40 60 80 

Concentration de la solution d'arrosage en NaCl (mM) 

Figure 17B. Effet de la salinité de la solution d'arrosage sur 

le pouvoir pathogène de deux isolats de Verticillium vis-àvis 

des tomates Claudia estimé par le poids frais des parties 

aériennes 

Poids frais des parties 

aériennes en g 

7 

6 

5 

4 

3 

2 

1 

0 


Plantes infectées par l'isolat P80 

Plantes infectées par l'isolat P3A 

0 20 40 60 80 

Concentration de la solution d'arrosage en NaCl (mM)

62 

- une aggravation des symptômes de rabougrissement due probablement à l’effet 

additif de la salinité et de l’infection par l’isolat agressif P80 sur la croissance des 

plantes. 

- l’acquisition de nouvelles aptitudes pathogènes pour l’isolat P 3 A connu 

pour son faible pouvoir pathogène. Ainsi, les tomates Marmande Claudia peu 

sensibles à cet isolat se trouvent attaquées par ce dernier sous l’effet de l’arrosage 

par des solutions enrichies en NaCl alors qu’elles maintiennent leur caractère de 

résistance en absence de sel. 

Cette cassure de la résistance vis-à-vis de cet isolat pourrait être due, entre autres, 

à une action directe du sel sur les plantes en les prédisposant à l’agression 

parasitaire. Davet et al., (1966) ont déjà émis l’hypothèse que l’augmentation des 

ions Na + dans le milieu nutritif prédispose les tomates à la fusariose vasculaire par 

suite d’une insuffisance en ions Ca ++ provenant d’un antagonisme entre le sodium 

et le calcium. En effet, dans les terrains irrigués par des eaux chargées en sel, les 

ions Na + ou Mg ++ peuvent remplacer les ions Ca ++ dans les chaînes pectiques des 

parois cellulaires. Standaert, (1978) rapporte que l’augmentation du rapport 

Na/Ca du milieu nutritif induit une moindre saturation en calcium de tous les 

composés constitutifs des parois cellulaires des racines des tomates. Or, le calcium 

joue un rôle important dans la physiologie de la plante. Il intervient dans la 

préservation de la structure membranaire et règle le transport des ions et l’activité 

enzymatique au niveau des membranes. En outre, il joue un rôle primordial dans 

la résistance des plantes aux agressions parasitaires (William, 1993). 

La carence en calcium induite par la salinité réduit la résistance des parois 

cellulaires qui deviennent alors facilement dégradables par les enzymes fongiques. 

Il est donc possible que l’arrosage des tomates par des eaux riches en chlorure de 

sodium provoque une fragilité des parois cellulaires des racines , ce qui favoriserait 

une colonisation aisée des tissus racinaires, et inhibe les mécanismes de défense de 

la plante responsables du freinage de l’avancé du mycélium dans les tissus de la 

plante. Cette dernière hypothèse peut être appuyée par les travaux de Sulistyowati 

& Keane (1992) qui ont montré que la salinité cause une diminution de la synthèse

63 

des phytoalexines dans les rhizomes du Citrus et augmente donc la sensibilité de la 

plante à l’attaque par le champignon. 

C. Influence de la salinité sur la variabilité de la spécificité 

parasitaire d’un isolat de Verticillium d’origine tomate 


1.1. Choix des plantes hôtes inhabituelles 

- La luzerne 

La luzerne (Medicago sativa L.), est la plus importante légumineuse cultivée sous 

irrigation dans les régions arides et semi-arides dans le monde. Au Maroc, elle 

constitue la plante fourragère la plus cultivée. Elle occupe environ 85 000 hectares 

représentant environ 22% de la superficie totale consacrée aux plantes fourragères. 

Son intérêt réside dans sa grande productivité (fauche, foin, pâturage, 

déshydratation et ensillage). Les semences utilisées au Maroc appartiennent à la 

variété Moapa choisie pour son faible repos hivernal et sa bonne adaptation aux 

conditions édaphoclimatiques marocaines (Birouk et al, 1997). 

- L’aubergine 

L’aubergine (Solanum melongena L) est une plante très sensible au Verticillium. 

Elle est souvent utilisée comme plante « piège » pour estimer le potentiel 

infectieux d’un sol naturellement infecté par Verticillium. 

La variété Reina negra a été retenue pour nos essais. 

Les semences des deux plantes nous ont été gracieusement fournies par le service 

de la certification des semences de l’INRA. 

1.2. Inoculation et traitement par le sel 

Après 15 jours de culture en pépinière pour la luzerne et 21 jours pour l’aubergine, 

les jeunes plants sont inoculés par trempage de leurs racines dans une suspension 

de spores à 10 6 préparée à partir d’une culture de l’isolat P80 d’origine tomate. 

Après transplantation en pots, les plants sont arrosés avec des solutions salines de

64 

différentes concentrations et sont placés dans les mêmes conditions culture 

décrites auparavant. 


Après un mois de culture, la maladie est estimée par la taille de l’axe aérien des 

plantes et par l’importance des dégâts foliaires. Un indice d’altération foliaire est 

calculé en fin d’expérience. Il exprime l’intensité des altérations foliaires. Une note 

est attribuée à chaque feuille : 

- 0 : feuille saine 

- 1 : flétrissement ou jaunissement des feuilles cotylédonnaires 

- 2 : chute des feuilles cotylédonnaires 

- 3 : chlorose des autres feuilles 

- 4 : nécrose 

- 5 : chute 

La somme des notes rapportée au nombre de feuilles bien formées pour chaque 

plante constitue l’indice d’altération foliaire (IAF). 

Les tests sont réalisés sur des lots de 15 plantes pour chaque traitement. La 

comparaison des moyennes est faite par l’analyse des variances selon le test de 

Newman-Keuls. 

2. Effet de la salinité sur la variation du pouvoir pathogène de 

l’isolat P80 au contact de nouvelles plantes hôtes. 

2.1. Effet sur l’expression du pouvoir pathogène au contact 

de la luzerne 

2.1.1. Effet sur la croissance des plantes 

Des résultats consignés sur la figure 18, se dégagent les observations suivantes : 

- Après un mois de culture, la taille de l’épicotyle des plantes de luzerne 

saines est significativement réduite quand celles-ci sont irriguées avec des 

solutions salines à 40 et 80mM de NaCl par rapport aux témoins cultivés sans sel.

65 

La réduction de la croissance est de 45.63 % et 62.61 % respectivement à 40 et 

80mM. 

- En absence de sel, l’inoculation des plantes avec l’isolat P80 d’origine 

tomate n’a pas induit de symptômes chez cet hôte inhabituel. En effet la croissance 

des plantes infectées est similaire à celles des témoins non inoculés. 

- Chez les plantes soumises au traitement salin, l’inoculation a induit un 

déficit de la croissance par rapport aux témoins sains soumis au même stress salin. 

En effet, des différences significatives existent entre les hauteurs des plantes saines 

et infectées, soumises toutes les deux au même degré de salinité (Planche 5). 

2.1.2. Manifestations foliaires 

L’observation des plantes de luzerne soumises au stress salin montre que le 

sel affecte également le développement de l’appareil foliaire. Ainsi, les plantes du 

traitement avec 80mM de NaCl sont rabougries avec de petites feuilles de couleur 

vert foncé mais sans jaunissement. 

En absence de sel, l’infection avec l’isolat d’origine tomate ne perturbe pas 

la fonction chlorophyllienne des feuilles des plantes inoculées. En revanche, la 

combinaison du stress salin et de l’infection avec un isolat non spécifique induit 

des altérations foliaires caractéristiques de la verticilliose de la luzerne : 

jaunissement des nervures et coloration rose des folioles de la base qui finissent 

par se dessécher. Les résultats de l’étendue de ces symptômes foliaires sont 

reportés sur la figure 19. Ils montrent que les indices d’altération foliaire 

augmentent avec l’augmentation de la concentration saline de la solution 

d’arrosage (Planche 6). 

2.2. Effet sur l’expression du pouvoir pathogène au contact 

de l’aubergine 

2.2.1. Effet sur la taille des plantes 

Les plantes d’aubergine répondent aux différents traitements par le sel par une 

réduction de la hauteur de l’axe aérien d’autant plus importante que la 

concentration en sel est élevée (figure 20). Le déficit de la croissance est

66 

Figure 18. Effet de la salinité sur l'expression du pouvoir 

pathogène de l'isolat P80 de Verticillium d'origine tomate 

au contact de la luzerne estimé par la taille de l'épicotyle 

après six semaines 

80 

Longueur de l'épicotyle en mm 

70 

60 

50 

40 

30 

20 

10 

0 


plantes inoculées 

0 40 80 

Concentrations salines de la solution d'arrosage en mM de NaCl 

1,2 



au contact de la luzerne exprimé par l'indice d'altération 

foliaire 

Indice d'altération foliaire 

1 

0,8 

0,6 

0,4 

0,2 

0 

0 40 80 

Concentrations salines de la solution d'arrosage en mM de NaCl

67 

Planche 5. Effet de la salinité sur la manifestation de l’isolat P80 de 

Verticillium, d’origine tomate, sur la luzerne estimé par la taille des 

plantes après un mois de culture. 

T0 ; T80 : plantes saines traitées respectivement avec 0 et 80mM de NaCl 

P0 ; P80 : plantes infectées et traitées respectivement avec 0 et 80mM de NaCl 


Verticillium, d’origine tomate, sur la luzerne estimé par les symptômes 

foliaires après un mois de culture. 

Absence de symptômes foliaires sur les plantes inoculées en absence de sel (P0) 

chloroses et nécroses sur les feuilles des plantes inoculées et traitées avec 80mM 

de NaCl (P80) en comparaison avec les plantes saines du même traitement salin 

(T80)

68 

accompagné d’une réduction de la surface des feuilles mais sans aucun signe de 

chlorose. En outre, en absence de sel, l’inoculation des jeunes plantes avec un 

isolat d’origine tomate a induit des symptômes de rabougrissement typiques de 

verticilliose. 

Les plantes soumises à la combinaison salinité et infection avec l’isolat de 

Verticillium d’origine tomate ont montré des réductions sévères de la taille de 

leurs axes aériens par rapport aux témoins malades cultivés en absence de sel mais 

aussi par rapport aux témoins sains exposés à la même salinité. 

2.2.2. Effet sur le système foliaire 

L’effet de la salinité seule ne semble pas perturber la fonction chlorophyllienne des 

feuilles des plantes traitées. Cependant, l’infection avec l’isolat P80 se traduit par 

des altérations foliaires typiques des maladies de flétrissement (figure 21). 

Les plantes infectées et soumises aux différents traitements par le sel montrent des 

chloroses et nécroses dont l’importance augmente avec la concentration saline des 

solutions d’arrosage. Les feuilles des plantes infectées et traitées avec 90mM de 

NaCl sont pratiquement toutes atteintes (Planche 7). 


Les résultats de ces essais montrent que la salinité du milieu nutritif peut modifier 

l’expression du pouvoir pathogène de l’isolat P80 de Verticillium d’origine tomate 

vis-à-vis de nouvelles plantes hôtes qui ne lui sont pas spécifiques. 

Dans les conditions normales de culture, l’isolat P80 inoculé à la luzerne (Moapa) 

s’est montré non pathogène sur cet hôte inhabituel. Ce résultat correspond aux 

observations d’El Aissami, (1999). Cet auteur a précisé en plus que l’isolat d’origine 

tomate a pu être isolé des racines de la luzerne, après la première inoculation, sans 

qu’aucune manifestation pathologique ne soit déclarée. Cependant, des passages 

successifs de cet isolat chez la luzerne ont conduit à l’émergence de lignées 

d’aptitudes parasitaires et pathogènes nouvelles affichant une diminution du 

pouvoir pathogène vis-à-vis de l’hôte d’origine et un gain d’agressivité à l’encontre 

de l’hôte inhabituel.

69 



au contact de l'aubergine estimé par la taille de l'épicotyle 

90 

Taille de l'épicotyle en mm 

80 

70 

60 

50 

40 

30 

20 



10 

0 

0 30 60 90 

Concentrations salines de la solution d'arrosage en mM de NaCl 




au contact de l'aubergine exprimé par l'indice d'altération 

foliaire 

5 

4,5 

4 

3,5 

3 

2,5 

2 

1,5 

1 

0,5 

0 

0 30 60 90 

Concentrations salines de la solution d'arrosage en mM de NaCl

70 


Verticillium, d’origine tomate, sur les plantes d’aubergine après un 

mois de culture. 

A. Plantes saines (T) 

T0 ; T30 ; T60 ; T90 : plantes saines traitées avec 0 ; 30 ; 60 et 90mM de NaCl 

B. Plantes inoculées (P) 

P0 ; P30 ; P60 ; P90 : plantes infectées et traitées avec 0 ; 30 ; 60 et 90mM de 

NaCl

71 

Il apparaît donc que la spécificité parasitaire chez ce champignon est variable. 

Cette variabilité serait due à une pression de sélection exercée par l’hôte inhabituel 

qui favorise les formes de Verticillium les plus aptes à surmonter les obstacles que 

lui oppose la luzerne (El Aissami & Lahlou, 1999). 

En conditions de stress salin, les plantes de luzerne inoculées avec l’isolat d’origine 

tomate ont manifesté dès le premier contact avec le parasite des symptômes 

typiques de verticilliose, alors que sous un régime nutritif normal, des contacts 

plus prolongés, 9 passages successifs selon El Aissami, (1999), s’avèrent 

nécessaires pour induire des symptômes de même intensité que ceux obtenus à la 

suite de l’infection par une souche de Verticillium spécialisée à la luzerne. 

La salinité du milieu semble ainsi modifier l’expression du pouvoir pathogène de 

l’isolat d’origine tomate vis-à-vis des plantes hôtes inhabituelles. Cette variation va 

dans le sens d’un gain d’agressivité envers la plante hôte non spécifique dès le 

premier contact, comme c’est le cas pour la luzerne et d’une augmentation du 

pouvoir pathogène vis-à-vis d’une plante peu spécifique comme l’aubergine. 

Face à ses données, rien ne nous empêche de penser que la salinité agit au niveau 

des interactions pathogène-hôte inhabituel et qui s’opposent normalement à la 

manifestation de la maladie. 

Bien que la luzerne Moapa soit modérément sensible à la salinité, le sel semble 

avoir : 

- une action sur la plante hôte en affaiblissant les moyens de défense 

élaborés contre l’attaque par un isolat qui ne lui est pas spécifique, 

- une action sur le pathogène en stimulant sa reproduction et sa 

progression à l’intérieur de la plante puisque nous l’avons ré-isolé de 

l’apex des tiges alors qu’il ne dépasse guère les racines chez les plantes 

inoculées et soumises à un régime nutritif normal. 

Ce résultat se rapproche des travaux de Howell et al., (1994) qui ont montré que 

l’addition de la salinité à l’inoculation de la luzerne par Verticillium albo-atrum 

augmente la progression du parasite dans la plante et entraîne une diminution de 

la production végétale.

72 

En faisant allusion à nos précédents résultats relatifs à la stimulation de la 

multiplication du champignon et la germination des conidies par la salinité, on 

peut supposer que la progression du parasite dans la totalité de la plante s’opérera 

rapidement avant que ne soient mises en route les différentes étapes de défense de 

la plante hôte inhabituelle. Cette situation serait en faveur de l’agent pathogène. 

La résistance de la luzerne à un premier contact avec l’isolat de Verticillium 

d’origine tomate semble être brisée par les conditions salines de culture. Quelque 

soit l’origine de cette cassure, la présence de génotypes de Verticillium, dans les 

terrains où la maladie de certains cultivars n’est pas connue, doit être prise en 

considération si le sol est irrigué avec des eaux salées. 

Les sols salés du littoral atlantique marocain sont utilisés pour la culture de la 

tomate. Certaines parcelles sont naturellement infestées par des souches de 

Verticillium qui sont à l’origine de la verticilliose de la tomate. La verticilliose de la 

luzerne n’a jamais été rapportée au Maroc. Ainsi, la culture de cette plante 

hautement sélective dans ces sols salés peut entraîner assez rapidement la 

sélection de souches de Verticillium de plus en plus pathogènes vis-à-vis de ce 

nouvel hôte, d’où l’intérêt qu’il faut accorder aux tests de la résistance de la luzerne 

aux champignons du genre Verticillium en incluant la présence de sel. 

L’analyse des différents résultats présentés montre que l’interaction salinité- 

Verticillium s’est traduite par une plus grande sensibilité des plantes à l’agent 

pathogène couplée d’une variation dans l’expression du pouvoir pathogène du 

parasite. Ce phénomène est rendu apparent par l’apparition et/ou l’aggravation 

des symptômes de rabougrissement caractéristiques de la verticilliose. 

La réduction de la croissance serait due à des changements dans le potentiel 

hydrique de la plante induits par la présence du champignon dans les vaisseaux du 

xylème et à un déséquilibre ionique suite à une nutrition riche en sel. 

Les causes du changement de la sensibilité des plantes à l’égard du champignon 

sont donc à rechercher dans les interactions physiologiques milieu-hôte-parasite. 

L’étude des modifications physiologiques et métaboliques liées à la salinité et à 

l’infection verticillienne est une tentative d’éclaircissement du phénomène observé.

73 

Chapitre 3 : Conséquences physiologiques et biochimiques 

de l’interaction salinité-Verticillium chez la tomate 

Introduction 

Nos résultats précédemment présentés montrent que la salinité affecte la 

physiologie de la tomate en réprimant sa croissance et en augmentant sa sensibilité 

à la verticilliose. Elle intervient dans la relation hôte-pathogène favorisant une plus 

grande expression du pouvoir pathogène du parasite. 

Si la réaction des plantes à l’infection est connue pour être modifiée par les 

facteurs de l’environnement (Ayres, 1984), le potentiel d’une interaction entre la 

salinité et la maladie est une possibilité qui doit être prise en compte. 

Face à cette situation, plusieurs questions affluent : 

Si la salinité est incriminée dans l’augmentation de la sensibilité de la plante au 

Verticillium, agit-elle sur le métabolisme impliqué dans les mécanismes de défense 

des plantes ou bien sur les armes pathogéniques du pathogène qu’elle stimulerait ? 

Et si c’est une action simultanée sur les deux à la fois, la réponse de la plante estelle 

la somme des deux effets individuels ou la résultante d’une interaction entre le 

facteur sel et la relation hôte-parasite ? Quelles seraient alors les composantes de 

cette interaction et qui doivent se traduire à la fin par l’apparition de la maladie ? 

Pour répondre à toutes ces questions, nous avons été incité à chercher les réponses 

au niveau de la physiologie nouvelle de la plante doublement stressée. 

C’est ainsi que nous avons analysé les modifications physiologiques et 

biochimiques induites par la salinité du milieu nutritif et touchant les teneurs en 

éléments minéraux, les taux des solutés cytoplasmiques osmorégulateurs ; la 

proline et les sucres solubles et l’activité de certaines enzymes de la plante telles la 

nitrate réductase et la peroxydase. L’évolution de ces caractéristiques métaboliques 

de la salinité chez les plantes infectées apporterait des renseignements sur les 

finalités de l’interaction salinité-Verticillium et qui conduiraient à la gravité de la 

maladie en conditions de stress salin.

74 

A. Effets sur les teneurs en cations majeurs 

1. Introduction 

Verticillium albo-atrum est un champignon qui se développe dans les vaisseaux du 

xylème de la plante hôte engendrant l’obstruction des vaisseaux et par conséquent 

le flétrissement partiel ou total conduisant parfois à la mort de la plante infectée. 

Le flétrissement serait dû à une perturbation du transport de l’eau et des sels 

minéraux à la suite de la présence du champignon dans les vaisseaux conducteurs. 

L’action physiologique du Verticillium sur les plantes infectées se traduit ainsi par 

des déficiences ou des excès de certains éléments minéraux (Huber, 1978 ; 1980). 

Guerrier et al., (1985) et Regragui et al., (1989) ont montré que l’infection des 

tomates avec des isolats de V. albo-atrum provoque des altérations de l’absorption 

et de l’accumulation des ions Na + et K + dans les racines et les parties aériennes ; 

augmentation des teneurs en sodium et diminution des teneurs en potassium. 

Cette perturbation de la nutrition minérale n’est pas due uniquement aux barrières 

physiques liées à la présence du champignon dans les vaisseaux du xylème mais 

également, à la libération d’enzymes et de toxines par le champignon à l’intérieur 

des tissus infectés. En effet Gour & Dube, (1985) ont montré que les toxines de 

Verticillium dahliae provoquent une augmentation de la perméabilité 

membranaire des cellules du coton sensible qui se traduit par des pertes sélectives 

des ions Na + et K + . De telles modifications ont été observées auparavant par 

Dimond, (1967), dans les feuilles de coton infectées par le même champignon. 

Certains éléments minéraux peuvent avoir un effet très important sur la sensibilité 

de l’hôte à un agent potentiel. Ainsi, la carence en Ca ++ peut augmenter la 

sensibilité de la tomate à Fusarium oxysporum f.s.p. lycopersici. Le manque de 

calcium sur les substances pectiques semblent augmenter la dégradation des 

parois cellulaires par les enzymes fongiques (Corden, 1965). 

En outre, l’augmentation du rapport Na/Ca augmente la sévérité de la fusariose 

des plantes de tomate. Cette plus grande sensibilité semble provenir d’une 

déficience en calcium, conséquence de l’antagonisme entre le calcium et le sodium 

(Standaert, 1978).

75 

Généralement, l’effet de la salinité se manifeste par un ensemble de perturbations 

qui touchent aussi bien les caractères morphologiques que la physiologie de la 

plante. L’effet le plus fréquent de la salinité est la réduction de la croissance. Cette 

réduction serait due d’une part à une diminution de la disponibilité en eau 

résultant de l’augmentation de la pression osmotique de la solution du sol et 

d’autre part, à l’effet toxique de l’accumulation de divers ions dans la cellule à la 

suite de leur augmentation dans le sol. D’après Shannon (1984) la réduction de la 

croissance est positivement corrélée avec la pression osmotique croissante du 

milieu et dépend en grande partie de l’espèce cultivée. 

Selon Hamza, (1980), le sel affecte la perméabilité sélective des membranes, ce qui 

favorise l’absorption excessive des ions lorsque ces derniers sont présents en 

grande quantité dans le sol. Leur accumulation dans la cellule peut créer un état de 

toxicité qui perturbe le fonctionnement normal de la plante et aboutit parfois à la 

mort de celle-ci. 

Pour se protéger contre le stress causé par la présence du chlorure de sodium dans 

le sol, les glycophytes effectuent une exclusion sélective des ions en excès (Flowers 

et al., 1977). Une autre stratégie des plantes glycophytes tolérantes au sel est 

d’accumuler les ions sodium dans la vacuole. Tel est le cas de l’espèce sauvage de 

tomate, Lycopersicon cheemanii (Hook) CH Mill, tolérante, qui accumule les ions 

sodium dans les parties aériennes alors que l’espèce cultivée L. esculentum Mill, 

moyennement tolérante, excrète les ions sodium à partir des feuilles (Rush et 

Epstein, 1981). Tad & Shanon (1983) cité par Cruz & Cuartero (1990) ont conclu 

que la tolérance au sel des plantes de tomate est liée à la teneur des feuilles en ions 

sodium et chlore. Cependant certains hybrides de L. esculentum x L. pennellii ont 

des concentrations de Na + et de Cl - similaires à celles des lignées sensitives. 

D’après Cruz et Cuartero, (1990) la concentration foliaire en Na + et Cl - reste un bon 

indicateur de la tolérance au sel chez les espèces de tomate puisque les 39 

génotypes de tomate testés par les auteurs ont manifesté une augmentation des 

teneurs en Na + en réponse à l’exposition à différentes concentrations de NaCl. 

Ces données bibliographiques rapportent donc une altération de la balance 

minérale des plantes après exposition au sel ou à la suite de l’infection par les

76 

champignons vasculaires. Ceci nous a incité à analyser l’influence de la 

combinaison des deux stress sur la nutrition minérale des plantes de tomate. Deux 

éléments ont été retenus : le sodium dont l’accumulation est corrélée avec la notion 

sensibilité/tolérance à la salinité et le potassium , élément entrant en compétition 

avec le sodium pour son absorption (Guerrier et al., 1985). 


Après quatre semaines de culture, les plantes de tomate, variétés Claudia et VR, 

saines et infectées par Verticillium, soumises à des différents traitements salins, 

sont excisées au niveau de la cicatrice des cotylédons puis mises à l’étuve à 70°C 

pendant 72 heures puis broyées dans un mortier. La poudre végétale est ensuite 

pesée et placée dans des creusets en quartz puis mise à calciner à 400°C pendant 

une nuit. Après refroidissement, les cendres sont récupérés dans un mélange 

d’acide nitrique et d’acide chlorydrique à 10% et portées à ébullition. Les cendres 

reprises sont transvasées dans une fiole jaugée qu’on ajuste avec de l’eau 

bidistillée. Le dosage est effectué par absorption atomique après passage au 

spectrophotomètre Perkin Elmer 2380. Les teneurs en Na + et K + sont exprimées 

en gramme pour 100g de matière sèche. Les résultats, moyennes de trois 

répétitions sont accompagnés des intervalles de confiance au seuil statistique de 

5% selon le test de Newman-Keuls. 

3. Résultats 

Les teneurs en Na + et K + , ont été analysées au niveau de l’ensemble tige+feuilles 

des plantes de tomate différemment traitées par le sel, avec et sans infection avec 

Verticillium. 

3.1. Teneurs en ions sodium 

Les variations des teneurs en Na + chez lez plantules de tomate Claudia et VR, en 

fonction de la salinité des eaux d’arrosage sont reportées sur les figures 22A et 

22B. Les résultats montrent qu’en absence de sel, l’infection avec Verticillium 

provoque une augmentation significative des teneurs en Na + chez les deux variétés.

77 

4,5 

Figure 22 A. Teneurs en ions Na+ foliaires chez les 

tomates Claudia saines ou infectées avec Verticillium 

et soumises à différents traitements par NaCl après un 

mois 

Teneurs en Na+ en % du poids 

sec 

4 

3,5 

3 

2,5 

2 

1,5 

1 

0,5 

0 


plantes 

0 30 60 90 

Concentrations des solutions d'arrosage en NaCl (mM) 

4,5 

Figure 22 B. Teneurs en ions Na+ foliaires chez les 

plantes de tomate VR saines ou infectées par 

Verticillium et soumises à différents traitements par 

NaCl après un mois 

Teneurs en ions Na+ en % du 

poids sec 

4 

3,5 

3 

2,5 

2 

1,5 

1 

0,5 

0 



0 30 60 90 

Concentrations en NaCl des solutions d'arrosage en mM

78 

Par ailleurs, on constate chez les plantes saines une augmentation des teneurs en 

Na+ lorsque la salinité des solutions d’arrosage s’élève. Ainsi à 90mM de NaCl, 

l’augmentation atteint des valeurs 26 et 29 fois plus élevées que celles des témoins 

sans sel respectivement chez Marmande VR et Marmande Claudia. 

Chez les plantes infectées et soumises au stress salin, les teneurs en Na + sont plus 

élevées que celles des témoins sains principalement pour les concentrations 

modérées de sel. Néanmoins, à 90mM de NaCl, les teneurs en Na + , bien que plus 

élevées que celles des autres concentrations de sel, ne montrent plus de différences 

significatives avec celles des plantes saines du même traitement salin. 

Enfin, l’analyse des variances ne montrent pas de différence significatives entre les 

deux variétés. 

3.2. Teneurs en ions potassium 

A l’opposé des ions Na + , l’infection avec Verticillium entraîne en absence de sel, 

une diminution des teneurs en K + par rapport aux plantes saines témoins des deux 

variétés de tomate Claudia (figure 23 A) et VR (figure 23 B). Chez ces dernières , la 

salinité provoque une chute des teneurs en K + proportionnelle avec l’augmentation 

de la concentration en NaCl des solutions nutritives d’arrosage. A 90 mM de sel, la 

diminution est de l’ordre de 51.7% et 53.5% pour Claudia et VR respectivement. 

Lorsque les plantes sont soumises à la salinité et à l’infection par le champignon, 

les teneurs en K + sont encore plus faibles que celles des plantes saines soumises au 

même traitement salin sauf pour la concentration de 90mM de NaCl où la 

déficience en K + rejoint celle des plantes saines. 

4. Discussion et conclusions 

Nos résultats montrent l’existence d’une grande ressemblance entre l’effet de la 

salinité et l’action de Verticillium sur la nutrition minérale des plantes de tomates. 

En effet, les deux contraintes, appliquées séparément, provoquent une 

perturbation de la nutrition minérale conduisant à une modification des teneurs en 

ions monovalents qui se traduit par un déficit en ions K + compensé par une 

accumulation des ions Na + dans les feuilles.

79 

Figure 23 A. Teneurs en ions K+ foliaires chez les plantes de 

tomate Claudia saines ou infectées avec Verticillium et 

soumises à différents traitements par NaCl 

Teneurs en ions K+ en % du poids 

sec 

8 

7 

6 

5 

4 

3 

2 

1 

0 



0 30 60 90 

Concentrations en NaCl des solutions d'arrosage en mM 

Teneurs en ions K+ en % du 

poids sec 

Figure 23 B. Teneurs en ions K+ foliaires chez les 

plantes de tomate VR saines ou infectées par 

Verticillium et soumises à différents traitements par 

NaCl 

8 

7 

6 

5 

4 

3 

2 

1 

0 



0 30 60 90 

Concentrations en NaCl des solutions d'arrosage en mM

80 

Ce résultat concorde avec les travaux de Tal et al., (1978) ; Arahou, (1986 ) et Ullah 

et al., (1994) qui ont rapporté une augmentation des teneurs en Na + des feuilles de 

tomate en présence de sel. Rush & Epstein, (1981) et Schachtman & Munns, 

(1992), ont attribué l’aptitude des plantes à transporter les ions Na + dans les 

feuilles avec la tolérance au sel. En outre, il a été montré que certaines plantes 

tolérantes accumulent l’ion Na + dans les feuilles alors que chez les plantes 

sensibles comme la haricot, le Na + n’est pas ou peu transporté vers les feuilles et 

s’accumulent dans les racines (Slama, 1986). 

L’effet physiologique de l’infection avec Verticillium sur la tomate se traduit 

également par une élévation des teneurs en Na + et une baisse des teneurs en K + . 

Un résultat similaire a été reporté par Guerrier et al., (1985) concernant l’effet 

physiologique de quelques souches de Verticillium albo-atrum sur la balance 

ionique de jeunes plantes de tomate. Selon les mêmes auteurs, les perturbations 

ioniques causées par l’infection par Verticillium seraient dues à un effet spécifique 

du champignon sur l’absorption des éléments minéraux et sur le transport de ces 

éléments dans le xylème. Il est connu que Verticillium libère, au contact de l’hôte 

et à l’intérieur des tissus vasculaires, des toxines et des enzymes qui pourraient 

agir sur les sites d’absorption des ions monovalents et sur la distribution de ces 

ions dans les différents organes de la plante (Nachmias et al., 1982, 1985 ; 

Balandina et al ., 1976 ; Gour & Dube, 1985 et El Aissami, 1999). 

L’analyse de nos résultats montre donc une similitude entre l’effet de la salinité et 

l’action de Verticillium sur la teneur des cations monovalents des plantes de 

tomate soumises à l’une ou l’autre des deux contraintes. 

Lorsque les plantes de tomate sont exposées à l’action concomitante de la salinité 

et du champignon, les perturbations ioniques induites montrent un effet additif 

des deux contraintes sur la composition minérale de la plante et qui se traduit par 

une réponse exagérée dans l’accumulation et la déficience de ces ions. Cette 

situation a été observée chez les plantes de tomate infectées et traitées par les 

concentrations modérées de sel ne dépassant pas 60mM de NaCl. Ces plantes ont 

montré des teneurs en Na + bien supérieures à celles des témoins sains soumis 

uniquement à la salinité et inversement pour les teneurs en K + dont la baisse est

81 

plus prononcée que celle des plantes saines. Néanmoins, aux fortes concentrations 

de sel (90mM), les réponses des plantes infectées ne reflètent pas l’effet additif 

attendu. Les teneurs en Na + et en K + ne diffèrent pas de celles des plantes saines 

soumises uniquement à la même salinité. 

Deux hypothèses peuvent être envisagées quant à la réduction de l’effet de 

Verticillium sur les teneurs en ces ions aux fortes concentrations salines : 

- Les modes d’action du champignon sur la perméabilité membranaire et le 

transport des ions ne seraient pas optimum aux concentrations élevées de sel 

(90mM) de nos conditions expérimentales. 

- Le développement du champignon, stimulé par la salinité de la sève, peut 

perturber le flux de cette dernière dans le xylème et agir sur le transport des ions 

vers les feuilles. 

En effet, il a été démontré que la présence des conidies de Verticillium dans le 

xylème induit la formation de thylles et de gommoses qui obturent les vaisseaux et 

entrainent le flétrissement de la plante (Page et al., 1992). 

Nos résultats laissent supposer que l’augmentation de la sensibilité des plantes en 

présence des concentrations modérées de sel serait due entre autres, à 

l’augmentation excessive des teneurs en Na + qui dépassent la réponse normale des 

plantes à l’élévation de la salinité du milieu. Cet excès d’ions que la plante n’arrive 

pas à exclure peut créer un état de toxicité qui nuirait à la croissance normale des 

plantes. 

En présence de fortes concentrations de sel, l’action du Verticillum sur 

l’accumulation des ions Na + étant réduite, des facteurs autres que l’altération de la 

balance minérale semblent intervenir dans l’augmentation de la sensibilité des 

plantes à la maladie. 

B. Effets sur les taux de sucres solubles totaux 


Le stress salin induit chez plusieurs espèces de plantes des modifications dans les 

teneurs relatives des hydrates de carbone avec une accumulation plus ou moins 

importante des sucres solubles totaux (saccharose, glucose et fructose). Ces

82 

derniers semblent jouer un rôle important dans l’ajustement osmotique (Rhodes, 

1987). En effet, pour ajuster le potentiel osmotique interne perturbé par 

l’absorption excessive des ions sodium, la plante accumule dans son cytoplasme 

des solutés organiques principalement la proline (Handa et al., 1986) et les sucres 

solubles (Rhodes, 1987). 

Ces derniers protègent également les membranes contre la déshydratation 

(Schwab et Gaff, 1986). Leurs teneurs ont été utilisées comme indicateurs du degré 

de tolérance à la salinité chez plusieurs espèces (Rathert, 1984). 

L’augmentation des teneurs en sucres solubles en conditions de stress salin a été 

mise en évidence chez la tomate (Lycopersicon esculentum Mill.). La variété Radja 

réagit aux concentrations modérées de sel (70mM de NaCl) par une élévation des 

teneurs en sucrose. Par contre, ces teneurs chutent brutalement aux fortes 

concentrations de sel (Perez-alfocea et al., 1996). Mitchell et al., (1991) ont 

également mis en évidence une augmentation des teneurs en glucose et en fructose 

dans les fruits immatures de tomate (L. esculentum Mill.cv. UC 82 B) après 

l’arrosage des plantes par des solutions enrichies en sel. 

Récemment, Goicoechea et al., (2000) ont montré pour la première fois une 

augmentation des sucres solubles comme réaction des plantes de piment à 

l’infection par Verticillium dahliae. 

Il apparaît ainsi que l’accumulation de sucres solubles serait une réponse des 

plantes aux stress salin et infectieux. Il serait alors intéressant d’étudier les 

niveaux de ses solutés dans les feuilles des tomates soumises à la combinaison 

salinité-Verticillium en vue d’évaluer l’interaction de ces deux stress sur la 

physiologie des tomates. 


Le dosage des sucres solubles totaux se fait par colorimétrie selon la méthode à 

l’anthrone. Cette méthode est basée sur la déshydratation intramoléculaire des 

oses en milieu acide (H2SO4 pur) à chaud. Les dérivés obtenus se condensent avec 

l’anthrone pour donner des produits colorés ; bleu-vert avec les hexoses et rouge 

avec les pentoses.

83 

2.1. Extraction des sucres solubles totaux 

L’extraction est réalisée sur des jeunes feuilles fraîchement coupées et prélevées 

dans le 1/3 supérieur de la tige. 100mg environ de matière fraîche foliaire sont 

broyés dans 3ml d’éthanol à 80%. 

2.2. Réaction à l’anthrone 

A 2 ml d’extrait sont ajoutés 4 ml du réactif d’anthrone préparé au moins 4 heures 

à l’avance et rangé à l’obscurité (2g d’anthrone dans 100 ml d’H2SO4). Le mélange 

doit passer dans de la glace fondante avant agitation. Les tubes sont ensuite fermés 

et mis à ébullition au bain-marie à 100°C pendant 10 minutes. Après un 

refroidissement de 30 minutes, l’absorbance, lue à 600nm, au spectrophotomètre 

est référée à une courbe étalon effectuée à partir de quantités croissantes d’une 

solution de glucose à 100µg.ml -1 . 

Les résultats, moyennes de 4 répétitions sont exprimés en mg de glucose.g -1 de 

matière fraîche. Ils sont comparés par analyse des variances selon le test de 

Newman-Keuls au seuil de 5%. 

3. Résultats 

L’accumulation des sucres solubles totaux a été estimée sur les feuilles des deux 

variétés de tomate après un mois de culture, délai nécessaire pour l’apparition des 

symptômes de verticilliose. 

3.1. Chez Marmande Claudia 

Les résultats sont traduits dans la figure 24 A. Ils montrent que chez les plantes 

saines cultivées sur milieu enrichi en sel, les teneurs en sucres solubles diminuent 

légèrement mais de manière significative par rapport aux témoins cultivés sur 

substrat sans sel. A 90mM de NaCl, on note une diminution de 18.27 %. 

En absence de sel, l’infection par l’isolat P80 de Verticillium n’a aucun effet sur les 

taux de sucres puisque les teneurs des plantes infectées sont similaires à celles des 

plantes saines. Cependant, en présence de sel, les teneurs en sucres solubles 

diminuent dans les feuilles des plantes infectées et diffèrent de manière

84 

significative de celles des plantes saines du même traitement salin. A 90mM de 

NaCl, la baisse des teneurs en sucres est de l’ordre de 36.61% par rapport aux 

plantes infectées de contrôle. 

3.2. Chez Marmande VR 

Les résultats de la figure 24 B montrent que cette variété réagit à l’égard de la 

salinité du milieu par une baisse des teneurs en sucres pour les concentrations 

supérieures à 30mM de NaCl. En effet, à la concentration de 30mM, on n’observe 

pas de changement dans les teneurs en sucres solubles par rapport aux témoins 

sans sel. La baisse des teneurs en sucres solubles relevées à 60 et 90mM est de 

l’ordre de 16.68% et 26.61% respectivement. 

En absence de sel, et contrairement à Marmande Claudia, l’infection avec 

Verticillium entraîne une baisse significative des teneurs en sucres solubles par 

rapport aux plantes saines de l’ordre de 30.18%. 

Chez les plantes soumises à l’action combinée de la salinité et de l’infection, le taux 

de sucres solubles totaux subit une augmentation à 30mM de NaCl par rapport aux 

témoins infectés sans sel, puis diminue avec l’augmentation de degré de salinité. 

Notons toutefois que les teneurs en sucres restent toujours plus faibles que celles 

des plantes saines du même traitement salin. 


Le stress salin appliqué aux plantes de tomate modifie le métabolisme des glucides 

des deux variétés de tomate utilisées en diminuant l’accumulation des sucres 

solubles totaux particulièrement pour les concentrations supérieures à 30 mM de 

NaCl. 

Ces résultats traduisent d’une part, la capacité des deux génotypes de tomate à 

s’adapter à un stress salin faible (30mM) en utilisant les sucres solubles pour 

ajuster le potentiel osmotique perturbé par la salinité et d’autre part, la sensibilité 

de ces variétés aux salinités modérées et élevées comme en témoignent les faibles 

teneurs en sucres solubles accumulés dans les feuilles. En effet, les teneurs en

85 

Figure 24 A. Teneurs en sucres solubles totaux foliaires des 

tomates Claudia saines ou infectées par Verticillium et 

soumises à différents traitements par NaCl (après un mois) 

Teneurs en sucres solubles totaux (mg 

de glucose/g. MF) 

12 

10 

8 

6 

4 

2 

0 



0 30 60 90 

Concentrations en NaCl des eaux d'arrosage en mM 

Figure 24 B. Teneurs en sucres solubles totaux foliaires 

des tomates VR saines ou infectées par Verticillium et 

soumises à différents par NaCl (après un mois) 

Teneurs en sucres solubles totaux (mg 

de glucose/g. MF) 

12 

10 

8 

6 

4 

2 

0 



0 30 60 90 

Concentrations en NaCl des eaux d'arrosage en mM

86 

sucres sont utilisées comme critères de tolérance à la salinité chez plusieurs 

espèces (Rathert, 1984 ; Misra & Dwivedi, 1995). 

L’action de Verticillium sur les teneurs en sucres solubles dépend de la variété de 

tomate et du traitement par le sel. Ainsi, chez la variété Marmande Claudia, 

l’infection par Verticillium ne semble pas avoir d’effet sur les teneurs en sucres 

solubles, cependant, elle semble accentuer l’effet néfaste de la salinité sur ces 

composés organiques puisque les teneurs en sucres solubles des plantes infectées 

atteignent des valeurs plus basses que celles des témoins sains de même salinité. A 

l’inverse, l’infection des plantes Marmande VR par Verticillium entraîne une baisse 

des teneurs en sucres solubles même en absence de sel. Cette action est maintenue 

en présence de sel. 

La baisse des teneurs en sucres solubles induite par la salinité et accentuée par 

l’infection, ne permet plus à ces composés de jouer leur rôle dans l’ajustement 

osmotique (Munns & Weir, 1981 ). Elle reflète une plus grande sensibilité des 

tomates à la salinité et à la maladie dans les conditions salines ce qui peut 

expliquer, en partie, l’augmentation de la sévérité de la verticilliose des tomates 

sous stress salin. 

La diminution des taux de sucres solubles pourrait favoriser la synthèse d’enzymes 

fongiques impliquées dans l’apparition des symptômes de la maladie. Cette 

hypothèse pourrait être étayée par les travaux de Standaert, (1975) qui a montré 

que les faibles concentrations en glucose dans les filtrats de culture de Fusarium 

oxysporum, favorisent la synthèse des endopectinases fongiques. On peut 

supposer que la salinité agirait de manière indirecte sur l’aptitude du Verticillium 

à produire les enzymes impliquées dans la pathogénèse du champignon en 

diminuant les teneurs en sucres solubles. 

L’étude de l’effet de la salinité sur les mécanismes d’action de Verticillium pourrait 

vérifier cette suggestion. Elle fera l’objet du chapitre suivant.

87 

C. Effets sur l’accumulation de la proline 


L’accumulation de la proline dans le système racinaire et foliaire est parmi les plus 

remarquables manifestations du stress salin et hydrique. Cette accumulation serait 

le signe d’une perturbation du métabolisme ou /et d’un processus de stockage de 

l’azote nécessaire à la survie de la cellule (Hanson et al., 1977, Sivaranakrishnan & 

al., 1988). En outre, la proline pourrait contribuer à l’ajustement du potentiel 

osmotique interne de la plante (Voetberg & Sharp., 1991). L’augmentation de la 

proline est souvent corrélée avec la capacité des plantes à survivre en condition de 

stress. Cependant, cet acide aminé ne semble pas intervenir dans le phénomène de 

tolérance au sel. C’est le cas de l’hybride Tricicum aestivum L cv Chinese Spring 

(sensible) x Lophopyrum elongatum (tolérant) dont la teneur en proline est plus 

faible que celle du parent sensible (Colmer et al., 1995). 

Perez-alfocea et al., (1996) ont évalué la tolérance au sel de l’hybride F1 de tomate 

(Radja) en utilisant entre autres l’accumulation de la proline comme critère 

physiologique d’adaptation au sel. Ces auteurs ont rapporté que les concentrations 

modérées de sel n’entraînaient pas d’accumulation de proline alors que, sous des 

concentrations élevées, la proline s’accumule dans tous les organes de la plante. 

Qader (1997), en étudiant les conséquences métaboliques de la salinité chez trois 

cultivars de blé tendre, a mis en évidence l’existence d’une corrélation positive 

entre la teneur en proline et la concentration de NaCl dans le milieu. Le même 

auteur a montré que l’accumulation de la proline causée par le stress salin dépend 

de l’organe considéré ; elle est plus importante dans les feuilles que dans les 

racines. 

L’augmentation des teneurs en proline a été également rapportée comme réponse 

aux stress biotiques. Grote & Claussen, (2001) ont montré que l’inoculation des 

tomates avec Phytophthora nicotianae entraîne une augmentation du taux de 

proline dans les feuilles de tomates infectées. Ces auteurs suggèrent que les 

teneurs en proline des feuilles de tomates peuvent être un bon indicateur de stress 

induits aussi bien par des facteurs abiotiques que biotiques. De même, les travaux

88 

de Goicoechea et al., (2000) sur le couple piment-Verticillium démontrent que les 

taux de proline augmentent dans les feuilles des plantes après infection avec 

Verticillium dahliae. Ces auteurs supposent que ces substances organiques 

peuvent être des détecteurs des dommages causés par l’infection fongique. 

A la lumière de ces données, nous avons été incités à suivre l’évolution des taux de 

proline chez les tomates à la suite de leur exposition aux stress de la salinité et de 

l’infection verticillienne. 


La détermination de la proline est réalisée selon la méthode colorimétrique de 

Troll et Lindsley (1955) reprise par Magné et Larher, (1992). 

2.1. Extraction 

Les échantillons de feuilles (150mg environ) prélevées près de l’apex subissent une 

extraction alcoolique dans 3 ml de méthanol placé dans un tube à hémolyse. 

L’ensemble est placé dans un bain-marie à 90°C pendant une heure. Les tubes où 

se fait l’extraction doivent être bien fermés pour éviter l’évaporation du méthanol. 

2.2. Dosage 

Après refroidissement, à 1 ml de l’extrait sont ajoutés 2 ml d’une solution de 

ninhydrine à 1% dans l’acide acétique glacial :eau (60 :40 V/V) et l’ensemble est 

mis au bain-marie à 100°C pendant une heure. Après refroidissement, 5 ml de 

toluène sont ajoutés et le mélange est agité vigoureusement. Le chromatophore 

formé est stable pendant 24 heures. Pour la lecture de l’absorbance, on prélève la 

phase supérieure après 30 minutes de repos. La densité optique est lue à 520nm. 

Les résultats sont référés à une courbe étalon effectuée à partir de quantités 

croissantes d’une solution de proline à 1µg/ml. Les résultats sont exprimés en µg/g 

.MF. Trois répétitions sont prévues par traitement salin pour les plantes saines et 

les plantes infectées.

89 

3. Résultats 

3.1. Chez la variété Marmande Claudia 

Chez les plantes saines de cette variété (Figure 25 A), les teneurs en proline foliaire 

augmentent régulièrement en fonction de la concentration saline des solutions 

d’arrosage. A 90mM de NaCl, les teneurs en proline foliaires atteignent des valeurs 

quatre fois plus élevées que celles des plantes cultivées sans sel. 

En absence de sel, l’infection avec Verticillium induit une augmentation des 

teneurs en proline de 133.7% par rapport aux plantes saines. Cependant, chez les 

plantes infectées et cultivées en présence de sel, on ne remarque plus de 

différences significatives dans les taux de proline des plantes saines et infectées 

quelque soit la concentration saline imposée aux plantes. 

3.2.Chez la variété Marmande VR 

La variété VR réagit à la salinité par une légère accumulation de la proline dans les 

feuilles des plantes traitées en rapport avec l’augmentation de la salinité du milieu 

(figure 25 B). L’augmentation des teneurs en proline étant de l’ordre de 49.02% à 

90mM de NaCl. 

En absence de NaCl, l’infection avec Verticillium ne provoque pas, à ce stade de la 

culture, de modifications dans l’accumulation de la proline dans les feuilles. Les 

teneurs en cet acide aminé des plantes saines et infectées ne diffèrent pas 

statistiquement. 

En présence de sel, les plantes infectées accumulent plus de proline dans leurs 

feuilles que les plantes saines cultivées en présence des mêmes concentrations 

salines. 


Les résultats démontrent, dans nos conditions expérimentales, que la salinité et 

l’infection par Verticillium sont associées à une augmentation des teneurs en 

proline dans les feuilles des tomates stressées. 

En absence d’infection, les plantes cultivées dans les conditions salines élevées 

(90mM) accumulent plus de proline que les plantes développées sous des

90 

Teneurs en proline en µg/g. MF) 

900 

800 

700 

600 

500 

400 

300 

200 

100 

0 

Figure 25 A. Teneurs en proline des feuilles des tomates Claudia 

saines ou infectées par Verticillium et soumises au stress salin 

(après un mois) 



0 30 60 90 

Concentrations en NaCl des eaux d'arrosage en mM 

Figure 25 B. Teneurs en proline des feuilles des tomates VR 

saines ou infectées par Verticillium et soumises au stress 

salin (après un mois) 

900 

Teneurs en proline en µg/g,MF 

800 

700 

600 

500 

400 

300 

200 

100 

0 



0 30 60 90 

Concentrations en NaCl des eaux d'arrosage en mM

91 

concentrations modérées ou faibles (60 et 30mM). Ces résultats sont en accord 

avec les observations de Pérez-alfocea et al., (1996) qui ont montré une 

augmentation de la proline dans tous les organes de la plante principalement aux 

fortes concentrations de NaCl. 

Les teneurs en proline ont évolué également chez la tomate après l’infection avec 

Verticillium. En effet, des teneurs élevées en proline ont été détectées dans les 

feuilles des tomates Claudia infectées en comparaison à celles des témoins sains. 

Toutefois, l’accumulation de la proline ne semble pas être affectée par l’infection 

chez la variété VR. Chez cette dernière, une augmentation de la proline a été 

observée lorsque la salinité a été ajoutée à l’infection. 

Goicoechae et al., (2000) travaillant sur le piment (Capsicum annuum) ont 

montré que l’infection des plantes avec Verticillium dahliae induit une 

augmentation substantielle de proline après 20 jours d’inoculation. Des résultats 

analogues ont été rapportés par Tzeng & Devay, (1985) . Ces auteurs ont montré 

que des teneurs élevées en proline sont détectées dans les feuilles de coton 

infectées par rapport à celles des plantes de contrôle. Les premiers auteurs 

suggèrent que les toxines libérées par le champignon dans les tissus infectés 

peuvent altérer la physiologie de la plante. 

L’accumulation de la proline peut être due à une augmentation de la synthèse de 

cet acide aminé ou à la diminution de son utilisation dans la synthèse de protéines 

dans les plantes stressées (Delauney & Verma, 1993). 

Plusieurs fonctions physiologiques ont été attribuées à l’accumulation de la proline 

dans les cellules en conditions de stress. L’accumulation de cet acide aminé peut en 

effet jouer un rôle dans l’osmorégulation des cellules en cas de déficit hydrique et 

servir comme indicateur de la sécheresse et/ou un détecteur de stress (Aspinall & 

Paleg, 1981 ; Grote & Claussen, 2001). 

Chez la tomate, et selon Pérez-alfocea et al., (1993), la proline contribue avec une 

faible proportion à l’ajustement osmotique par rapport aux autres solutés 

accumulés dans le cytoplasme des plantes soumises aux conditions de stress 

hydrique. En s’appuyant sur ces données, on peut supposer que l’augmentation de 

la proline consécutive au traitement des tomates par la salinité et par l’infection

92 

pourrait jouer un rôle différent dans la stratégie de la plante à éviter le stress ou au 

moins être considéré comme un indicateur signalant l’intensité du stress (Grote & 

Claussen, 2001). 

Concernant ce dernier aspect, une relation a été établie entre l’accumulation de la 

proline et le degré du déficit hydrique des plantes stressées par la sécheresse ou 

par l’infection avec Verticillium. En effet, Goicoechae et al., (2000) ont démontré 

que la diminution des teneurs relatives en eau des plantes de piment infectées 

coïncide avec l’augmentation de l’accumulation de la proline. Un résultat similaire 

a été observé par Irigoyen et al., (1992) chez la luzerne soumise à la sécheresse. 

L’effet de l’infection par Verticillium se manifeste en général par le 

rabougrissement et le flétrissement des plantes. Par suite de la présence du 

champignon dans les vaisseaux du xylème, le transport de l’eau est perturbé. Il en 

résulte un stress hydrique qu’on peut rapprocher de celui des plantes soumises à la 

sécheresse ou à la salinité. De ce fait, l’augmentation de la proline dans les feuilles 

de tomates infectées par Verticillium et traitées avec le sel serait le reflet de 

l’importance du déficit hydrique de ces plantes et expliquerait, par la même 

occasion, l’importance des symptômes de rabougrissement manifestés par ces 

dernières par rapport aux plantes saines témoins sans sel. 

Öncel et al., (1996) rapportent de leur côté que l’accumulation de proline serait en 

relation avec la résistance des cultivars aux maladies. Chez les cultivars de piment 

résistants à Phytophthora capsici, la proline est plus accumulée en comparaison 

aux cultivars sensibles. Ces auteurs suggèrent que la proline peut jouer un rôle 

important dans les mécanismes de défense de la plante contre cet agent pathogène. 

Dans cette voie, on peut penser que la quantité de proline induite chez la tomate 

par la combinaison salinité-Verticillium ne s’avèrerait pas suffisante pour assurer 

la protection des tomates du double stress qui leur est imposé, ce qui pourrait 

expliquer la plus grande sensibilité des plantes à la maladie sous stress salin. Cette 

hypothèse peut être appuyée par les valeurs des teneurs en proline des tomates 

Claudia infectées en conditions salines qui rappellent celles des témoins sains du 

même traitement salin et qui ne reflètent pas l’effet additif attendu des deux stress 

sur l’accumulation de la proline.

93 

Enfin, quels que soient les mécanismes par lesquels intervient la proline dans la 

gestion des stress de la plante, cet acide aminé paraît être un indicateur quantitatif 

des stress qui affectent le statut hydrique des plantes de tomate (Grote & Claussen, 

2001) comme la concentration saline élevée du milieu nutritif et l’attaque par 

Verticillium. 

D. Effets de l’interaction salinité-Verticillium sur certaines 

activités enzymatiques des plantes de tomate 

1. Effets sur l’activité nitrate réductase 

1.1. Introduction 

La nitrate réductase, enzyme catalysant la réaction des nitrates en nitrites est 

l’enzyme limitante du processus d’assimilation de l’azote (Beevers & Hageman, 

1969) par comparaison aux autres enzymes situées en aval telles que la nitrite 

réductase, la glutamine synthétase et la glutamate synthase. De nombreux travaux 

ont rapporté l’impact de la salinité sur les enzymes impliquées dans les voies de 

l’assimilation de l’azote. La nitrate réductase, principalement, a été largement 

évoquée (Misra & Dwivedi, 1990 ; Botella et al., 1993 a). L’altération du 

métabolisme azoté par le sel serait attribuée à une inhibition de l’absorption de 

NO3 - et de son accumulation dans les tissus foliaires et racinaires (Soltani et al., 

1990 ). 

La perturbation de la nitrate réductase peut en outre être induite par l’infection. 

Regragui et al. (1990) ont montré que l’inoculation de jeunes plantes de tomate 

avec différentes souches de Verticillium a provoqué des modifications de l’activité 

nitrate réductase, principalement avec les souches pathogènes du champignon. 

Selon ces mêmes auteurs, le champignon pourrait avoir une action inhibitrice 

directe de l’enzyme par l’intermédiaire des métabolites toxiques qu’il sécrète à 

l’intérieur des tissus de l’hôte. 

L’étude des modifications du métabolisme azoté des plantes de tomate infectées et 

soumises au stress salin pourrait contribuer à rendre explicite le comportement 

des tomates face à ces deux stress.

94 

1.2. Matériel et méthodes 

Plusieurs méthodes ont été décrites pour la détermination de l’activité nitrate 

réductase. Nous avons opté pour la méthode « in situ » telle qu’elle a été décrite 

par Robin et al., (1983 a). Si on se réfère aux résultats de Robin et al., (1983 b) sur 

le maïs, cette méthode permet d’évaluer avec une bonne approximation la 

réduction réelle de nitrate en nitrite, contrairement à la méthode in vitro qui 

mesure l’activité potentielle de l’enzyme. 

Le principe consiste à doser le nitrite formé au moment de la réduction des 

nitrates. 

Après un mois de culture, les parties aériennes des plantes de tomate soumises au 

stress salin et à l’infection par Verticillium sont prélevées après 6 heures du début 

de la photopériode. Elles sont ensuite pesées et mises à incuber dans des vénojects 

de 140ml en anoxie et à l’obscurité en présence de KNO3 ( 100mM) (Gojon et al., 

1983). 

Après un temps d’incubation d’une heure, le nitrite accumulé est extrait par de 

l’eau bouillante pour arrêter la réaction puis dosé par colorimétrie après addition 

des réactifs de diazotation (N. Naphty Ethylène Diamine Dichlorure NNEDD) ; 

0.2g/l) et de sulfanilamide (10g/l d’HCl). On laisse ensuite la coloration violette se 

développer pendant au moins 30 minutes puis on mesure la densité optique au 

spectrophotomètre à 540 nm. Les résultats , moyennes de six répétitions sont 

exprimés en µM de NO2 - /h/ g de matière fraîche en utilisant la formule qui suit : 

A N R = DO x V 

PF. E 0. t 

DO= densité optique lue à 540 nm 

V= volume d’extraction en litre 

t= temps d’incubation en heure 

PF= poids frais en g 

E 0= coefficient d’extinction molaire 

NNEDD : N.Naphty Ethylène Diamine Dichlorure

95 

1.3. Résultats 

L’évolution de l’activité nitrate réductase en fonction de la salinité et de l’infection 

par Verticillium chez les plantes de tomate est représentée sur la figure 26. 

En absence de sel, l’infection par ce pathogène entraîne une légère mais 

significative baisse de l’activité nitrate réductase des plantes de tomate par rapport 

aux plantes saines. 

En présence de sel, l’activité nitrate réductase des plantes saines n’est pas 

influencée par les concentrations faibles et modérées (30-60mM de NaCl). On note 

toutefois à 90 mM, un effet dépressif du sel sur l’activité de l’enzyme de 79.76% par 

rapport aux témoins non traités par le sel. 

Par contre, les plantes infectées et soumises au stress salin voient leur activité 

nitrate réductase diminuer fortement dès que la salinité du milieu commence à 

augmenter. En effet, l’activité nitrate réductase chute brutalement à 30mM de 

NaCl et manifeste des niveaux d’activité comparables pour toutes les 

concentrations salines de l’expérience. Les réductions par rapport aux témoins 

malades sans sel sont de l’ordre de 85.47% ; 80.34% et 84.18% à 30, 60 et 90mM 

de NaCl respectivement. L’analyse de la variance montre que l’interaction salinité- 

Verticillium est hautement significative. 

1.4. Discussion et conclusion 

L’étude de l’activité nitrate réductase des tomates infectées par Verticillium et 

soumises au stress salin rend compte des perturbations causées par ces deux stress 

sur le métabolisme azoté de la plante. 

Cette étude a porté d’abord sur l’action physiologique de Verticillium sur l’activité 

nitrate réductase chez les tomates artificiellement infectées. Elle a montré que le 

champignon affecte légèrement la capacité des plantes à réduire le nitrate. Nos 

études précédentes (Regragui et al., 1990) sur cet aspect du parasitisme ont 

montré que des souches de Verticillium de pouvoir pathogène différent affectent 

différemment l’activité nitrate réductase des jeunes plantes de tomate ; l’enzyme 

étant inhibée uniquement par les souches pathogènes.

96 

Figure 26. Activité Nitrate Réductase des plantes de 

tomate infectées par l'isolat P80 de Verticillium et soumises 

au stress salin 



700 

Activité nitrate réductase en 

nmol/h/g M.F 

600 

500 

400 

300 

200 

100 

0 

0 30 60 90 

Concentration en NaCl des solutions d'arrosage en mM

97 

La répression de l’enzyme peut avoir plusieurs origines : 

- Une action directe du champignon sur la nitrate réductase par le biais des 

enzymes fongiques et des toxines libérées par le champignon au cours de 

l’infection. En effet la nitrate réductase est connue pour être une enzyme très 

instable, très sensible aux dégradations protéolytiques et qui perdrait sa capacité 

de réduire le nitrate (Schrader et al., 1974). 

- Un manque de la disponibilité en pouvoir réducteur, le NADH. Il est bien 

établi que la nitrate réductase de la majorité des plantes supérieures utilise 

spécifiquement le NADH comme cofacteur ( Schrader et al., 1968 ; Beevers & 

Hageman, (1969). De même, Srivasta, (1980) et Duck & Duck, (1984) ont précisé 

que les métabolites issus de la photosynthèse sont indispensables au 

fonctionnement de l’enzyme. Dans le même sens, la limitation de la photosynthèse 

par privation de CO2 retentit sur l’absorption et la réduction des nitrates (Pace et 

al., 1990). L’épuisement du donneur d’électrons (NADH) serait donc la 

conséquence d’une action plus profonde du Verticillium sur le métabolisme de la 

plante (Guerrier et al., 1985) et qui se résumerait à une baisse de la synthèse 

carbonée, substance représentant une source de pouvoir réducteur pour le 

fonctionnement de la nitrate réductase. 

- Une absence de l’induction de l’enzyme. La nitrate réductase est une 

enzyme qui peut être induite par son substrat, le NO - 3 (Hageman et Flesher, 1960 ; 

Beevers & Hageman, 1969 ; Hewitt & Cutting, 1979 cité par Bazzigalupi, et al., 

1992). La faible activité assimilatrice de l’azote constatée chez les plantes infectées 

serait imputable à une absence de l’induction de l’enzyme consécutive à la 

diminution de l’absorption de nitrate. On peut supposer que Verticillium altère 

l’absorption de NO - 3 et par là même, empêche l’induction de l’enzyme. 

D’un autre coté, il est connu que le stress hydrique ou salin affecte les enzymes 

impliquées dans les voies de l’assimilation de l’azote ( Misra & Dwivedi, 1990 ; 

Botella et al., 1993a). La modification de certaines enzymes est corrélée avec la 

notion de sensibilité/tolérance à la salinité. 

Nos résultats montrent que chez les tomates traitées par le sel, l’activité nitrate 

réductase n’est pas influencée par les concentrations faibles et modérées de sel

98 

(30mM et 60mM). Seules les concentrations élevées de NaCl (90mM) perturbent 

l’aptitude des plantes à assimiler le nitrate. L’absence d’altération de l’activité 

nitrate réductase constatée témoigne de la tolérance relative de la variété de 

tomate aux concentrations modérées de sel. Cette tolérance semble être brisée par 

l’infection par Verticillium comme le montrent les niveaux d’activité nitrate 

réductase, très bas, enregistrés chez les plantes infectées et traitées par ces 

concentrations de sel. 

L’activité nitrate réductase est représentative du niveau des synthèses d’acides 

aminés et de protéines. En effet, la réduction des nitrates conduit à la formation de 

nitrites puis d’ammoniac lequel est incorporé dans un squelette carboné, 

généralement le glutamate pour former la glutamine. La baisse de l’activité nitrate 

réductase suite à l’interaction salinité-Verticillium ne peut être écartée comme une 

cause possible de la réduction sévère de la croissance des plantes doublement 

stressées. 

En résumé, l’action combinée des effets de la salinité et de l’infection par 

Verticillium perturbe de manière hautement dépressive l’activité nitrate réductase 

et par voie de conséquence tout le métabolisme azoté de la plante. L’infection par 

Verticillium semble augmenter la sensibilité des plantes à la salinité et les 

prédisposer à l’attaque fongique. 

2. Effets sur l’activité peroxydasique 

2.1. Introduction 

Les peroxydases sont des oxydoréductases qui catalysent l’oxydation de divers 

groupes de composés organiques en utilisant le peroxyde d’hydrogène (H 2 O 2 ) 

comme accepteurs d’électrons (Dawson, 1988). Elles sont présentes dans tous les 

tissus des végétaux et se présentent sous plusieurs formes isoenzymes ; les 

isoperoxydases. On distingue deux groupes d’isoperoxydases ; les isoperoxydases 

basiques localisées normalement dans la vacuole et les isoperoxydases acides liées 

à la paroi cellulaire. Les isoperoxydases vacuolaires semblent être impliquées dans 

plusieurs voies métaboliques comme le catabolisme auxinique. Les autres seraient

99 

impliquées dans la biosynthèse de la lignine et de la subérine (Normanly et al., 

1995, Robert et al., 1988, Wetten et al., 1998). 

Les peroxydases jouent un rôle important dans le métabolisme et la physiologie de 

la plante et sont impliquées dans les réponses des plantes aux infections et aux 

stress abiotiques. 

Le stress salin a été rapporté comme facteur stimulant l’activité des peroxydases et 

induisant la synthèse de la lignine et/ou la subérine. Il produit par conséquent une 

altération du transport d’eau (Cruz et al., 1992). D’autres travaux (Quirago et al., 

2000) ont montré que le traitement par le sel entraîne une augmentation des 

peroxydases des racines de tomates. 

Le rôle des peroxydases et de leurs produits du métabolisme dans les mécanismes 

de défense des plantes infectées a fait l’objet de plusieurs études (Maraitre, 1973 ; 

Hammerschmidt et al., 1982 ; Andreeva, 1991). 

Ces études ont porté sur plusieurs combinaisons hôte-parasite. Ainsi, une 

importante augmentation de l’activité peroxydasique a été détectée après infection 

du melon par Spaerotheca fuliginea ou de la tomate par Verticillium dahliae, 

augmentation touchant aussi bien les plantes sensibles que résistantes (Reuveni & 

Bothma, 1985 et Reuveni & Ferreira, 1985). 

L’activité peroxydasique a été également associée avec l’induction de la résistance 

systémique du concombre à Colletotrichum lagenarium (Hammerschmidt et al., 

1982). 

Le rôle des peroxydases dans les phénomènes de résistance serait lié à la 

production de lignine, de phenylalanine et de l’accumulation de phénols (Maxw ell 

& Bateman, 1967 ; Pollok & Drysdale, 1976 et Carrosco et al., 1978). L’activité de 

ces composés métaboliques serait apparentée à leurs propriétés anti-microbiennes, 

au renforcement des parois cellulaires et à l’induction des réponses des plantes 

(Clerivet et al., 1996). 

Le présent travail a pour objectif de montrer l’influence de l’interaction 

Verticillium-salinité sur les mécanismes de défenses des tomates via l’étude de 

l’activité peroxydasique .

100 

2.2. Matériel et méthodes 

La détection de l’activité peroxydasique a été effectuée selon le protocole décrit par 

Reuveni & Ferreira, (1985). 

2.2.1. Préparation de l’extrait enzymatique 

Des échantillons de racines de tomate Claudia pesant environ 0.5 g issus des 

plantes de chaque traitement sont homogénéisés à froid dans un mortier en 

présence de 5ml de tampon phosphate sodium 0.015M, pH 6. Après centrifugation 

à 5000g pendant 20 minutes à 4°C, le surnageant constitue l’extrait enzymatique. 

2.2.2. Mesure de l’activité de l’enzyme 

L’activité peroxydasique est mesurée à température ambiante utilisant comme 

substrat, le guaïacol. 50µl d’extrait sont additionnés à 3ml du mélange réactionnel 

de composition suivante : 

- 15mM du tampon phosphate , pH 6 

- 1 mM de peroxyde d’hydrogène 

- 0.1 mM de guaïacol 

Le mélange enzyme–substrat est agité par inversion de la cuve et les variations de 

l’absorbance à 450nm sont mesurées toutes les minutes pendant 6 minutes 

d’incubation à l’obscurité, contre un extrait dépourvu d’enzyme. 

Les activités peroxydasiques sont déterminées par les pentes des droites obtenues 

et rapportées au poids de la matière fraîche (Absorbance à 450nm/min/g. MF) 

2.3. Résultats 

L’activité peroxydasique des racines des tomates différemment traitées par le sel et 

par l’infection avec Verticillium a été évaluée après trois et quatre semaines de 

culture. 

2.3.1. Activité peroxydasique après trois semaines 

Chez les plantes saines, l’activité peroxydasique augmente en fonction de la salinité 

croissante du milieu (figure 27 A). Les augmentations par rapport aux témoins non 

traités sont de l’ordre de 55% et 80.6 % respectivement à 60 et 90mM de NaCl.

101 

Les réponses des plantes à l’infection se traduisent, en absence de sel, par une 

hausse très importante de l’activité peroxydasique par rapport aux plantes saines, 

de l’ordre de 190%. 

En présence de sel, les niveaux d’activité de la peroxydase des plantes infectées 

diminuent avec l’augmentation de la salinité. Cependant, ils restent toujours 

significativement supérieurs à ceux des plantes saines. Cette constatation est 

valable pour tous les traitements salins de l’expérience. 

2.3.2. Activité peroxydasqiue après quatre semaines 

Bien que l’évolution de l’activité peroxydasique en fonction de la salinité et de 

l’infection soit parallèle à celle observée après trois semaines (Figure 27 B), il faut 

signaler qu’en général, les niveaux d’activité ont diminué avec le temps aussi bien 

chez les plantes infectées que saines. 

Pour estimer l’effet de l’interaction salinité-Verticillium, nous avons comparé 

l’augmentation des niveaux d’activité des peroxydases des plantes saines et 

infectées en fonction de la salinité. Les résultats sont résumés sur le tableau 6. 

Il apparaît clairement que pour une même salinité, l’activité des peroxydases des 

plantes infectées est plus élevée que celles des plantes saines mais à des degrés qui 

diffèrent selon la salinité. Le rapport R établi entre l’activité des plantes infectées 

et celles des plantes saines est plus grand quand le milieu est dépourvu de sel. Ce 

rapport diminue progressivement avec la salinité.

102 

Figure 27 A. Influence de la salinité sur l'activité 

peroxydasique des plantes de tomate infectées par l'isolat 

P80 de Verticillium (après trois semaines) 

Activité peroxydasique 

(Variation de l'absorbance /min/g,MF) 

8 

7 

6 

5 

4 

3 

2 

1 

0 

" 



0 30 60 90 

Concentration en NaCl des solutions d'arrosage en mM 

Figure 27 B. Influence de la salinité sur l'activité 

peroxydasique des plantes de tomate infectées par l'isolat 

P80 de Verticillium (après quatre semaines) 

7 

Acivité peroxydasique 

(Variation de l'absorbance/min/g, MF) 

6 

5 

4 

3 

2 

1 

0 



0 30 60 90 

Concentration en NaCl des solutions d'arrosage en mM

103 

Tableau 6. Activité peroxydasique des racines de tomate saines et 

infectées avec Verticillium en fonction de la salinité du milieu. 

AP* Après trois semaines Après quatre semaines 

NaCl 

en mM 

Plantes 

saines 

Plantes 

infectées 

R** Plantes 

saines 

Plantes 

infectées 

0 2.27±0.21 7.34±0.13 3.23 2.07±0.11 5.53±0.38 

a 

a 

a 

a 

30 2.53±0.11 5.23±0.05 2.06 2.13±0.11 5.50±0.24 

a 

b 

a 

a 

60 3.52±0.3 5.27±0.05 1.49 2.53±0.11 4.47±0.14 

b 

b 

b 

b 

90 4.10±0.05 4.50±0.16 1.09 3.27±0.05 4.07±0.11 

c 

c 

c 

c 

* AP : activité peroxydasique 

** Rapport R= AP des plantes infectées/AP des plantes saines 

R** 

2.67 

2.58 

1.76 

1.24 

Deux résultats lus sur une même colonne et non accompagnés de la même lettre sont différents 

statistiquement. 


Nos résultats montrent que le stress salin, appliqué à la tomate (Marmande 

Claudia) a entraîné, dans nos conditions expérimentales, une stimulation 

progressive de l’activité peroxydasique dans les racines en fonction de la salinité 

croissante des eaux d’arrosage. Ce résultat concorde avec celui de Quirago et al., 

(2000). Ces auteurs ont montré que le traitement des tomates (Lycopersicon 

esculentum, cv Pera) par 100mM de NaCl induit l’augmentation de l’activité 

peroxydasique des racines. Ce phénomène a été observé chez d’autres plantes 

cultivées en présence de NaCl. C’est le cas notamment du blé tendre qui répond au 

stress salin par une augmentation de l’activité des peroxydases (Qader, 1997). 

La stimulation des peroxydases par la salinité semble être due à une activation du 

gène de l’enzyme. Selon Quirago et al., (2000), le sel provoque des modifications

104 

dans l’expression du gène TPXI de la peroxydase, gène isolé de la tomate par 

Botella et al., (1993 b), et qui serait impliqué dans la synthèse de la lignine et de la 

subérine. 

La salinité pourrait entre autres agir sur l’activité de la peroxydase en favorisant la 

disponibilité des composés phénoliques fournis par l’oxydation des glucides et/ou 

la disponibilité du peroxyde d’hydrogène (H 2 O 2 ). D’ailleurs, Hurkman et al., (1991) 

ont bien rapporté que le sel stimule l’activité de l’oxalate oxydase, enzyme 

catalysant la formation du peroxyde d’hydrogène. 

L’infection des tomates par l’isolat P80 de Verticillium s’est manifestée elle aussi 

par une augmentation considérable de l’activité peroxydasique des racines, 

nettement supérieures à celle induite par la salinité. L’augmentation de l’activité 

des peroxydases due à l’infection par les organismes pathogènes, a été détectée 

chez différentes combinaisons hôte-parasite (Johnson & Lee, 1978 ; 

Hammerschmidt et al., 1982). 

A propos du couple tomate-Verticillium, Reuveni & Ferreira, (1985) ont rapporté 

un résultat similaire au nôtre. Ces auteurs ont précisé en plus que l’augmentation 

de l’activité de la peroxydase à la suite de l’infection par Verticillum touche aussi 

bien les variétés de tomate sensibles que résistantes au champignon. Le rapport de 

l’augmentation par rapport aux témoins sains étant plus élevé chez les plantes 

sensibles. 

L'exposition des tomates à la combinaison salinité-Verticillum ne s’est pas traduite 

par un effet synergique des niveaux d’activité de la peroxydase supposés être 

stimulés par la salinité ou par l’infection. Bien au contraire, cette activité, très 

élevée chez les plantes infectées, chute graduellement si celles ci sont cultivées en 

présence de sel. Le rapport établi entre l’activité peroxydasique des plantes 

infectées et celles des plantes saines diminue avec la salinité. Tout se passe comme 

si le facteur sel inhibe l’action du champignon sur la peroxydase. 

La baisse des niveaux de l’activité de l’enzyme laissent prévoir une augmentation 

de la sensibilité des plantes au Verticillium dans les conditions salines de culture. 

Cette hypothèse peut être étayée par les travaux de Reuveni & Ferreira, (1985). Ces 

auteurs ont observé des différences entre l’activité des peroxydases des tomates

105 

sensibles et résistantes à Verticillium ; les niveaux d’activité étant plus élevés chez 

les plantes résistantes que sensibles. De même, en étudiant les réponses de onze 

variétés de tomate, ces auteurs ont établi une corrélation hautement positive entre 

l’activité de la peroxydase des racines et la présence du gène Ve de résistance à 

Verticillium dahliae. 

Reuveni & Bothma, (1985) ont de leur côté mis en évidence une corrélation 

positive similaire entre l’activité peroxydasique et la résistance de quatre variétés 

de melon à Spaerotheca fuliginea. Des travaux plus récents (Reuveni et al., 1992), 

ont montré que les niveaux d’activité peroxydasique de plusieurs variétés de melon 

sont liés avec les différents niveaux de résistance des plantes à Pseudoperonospora 

cubentis. De ce fait, l’activité des peroxydases serait un indicateur ou un marqueur 

biochimique de la résistance des plantes à ces agents pathogènes et pourrait, à titre 

d’exemple, être utilisé dans les programmes de sélection des variétés résistantes. 

En se référant à ces données, nos résultats laissent supposer que la salinité 

augmente la sensibilité des tomates à la verticilliose comme en témoigne la baisse 

des niveaux d’activité de la peroxydase des plantes malades soumises au stress 

salin. La réduction de l’activité de l’enzyme dans ce cas, serait la résultante des 

perturbations métaboliques engendrées par l’interaction salinité-Verticillium sur 

les mécanismes de défenses de la plante et qui pourrait se traduire par une baisse 

de la synthèse de lignine et de subérine, facteurs très importants dans la résistance 

des plantes aux pathogènes vasculaires (Pegg, 1981). En effet, les composés 

phénoliques jouent un rôle complexe dans la pathogénèse des trachéomycoses. 

L’augmentation de leur concentration a été associée avec l’augmentation de la 

résistance aux champignons (Carrasco et al., 1978 ; Pegg, 1981 ; Candela et al., 

1995). 

Cette étude biochimique a dévoilé une certaine analogie entre les effets 

physiologiques de la salinité et ceux induits par l’infection. Certains paramètres 

physiologiques sont des indicateurs de la tolérance au sel. 

L’interaction salinité-Verticillium perturbe profondément les caractéristiques 

physiologiques liées à l’adaptation au sel. Les conséquences de ces modifications 

seraient à l’origine de la dépression sévère de la croissance des plantes et

106 

traduisent une augmentation de la sensibilité de la plante à la salinité et/ou à la 

maladie. 

Cette étude biochimique s’est limitée à l’analyse des caractéristiques 

physiologiques de la plante hôte doublement stressée. Mais qu’en est-il de l’effet 

du sel sur la physiologie du parasite ? 

L’étude de l’influence de la salinité du milieu nutritif sur les composantes 

biochimiques de l’agressivité du champignon apportera plus d’éclaircissement.

107 

Chapitre 4 : Impact de la salinité du milieu sur les 

mécanismes d’action de Verticillium albo-atrum 

I. Effet de la salinité sur la toxinogénèse de l’agent pathogène 

Introduction 

Les mécanismes physiologiques qui déterminent l’agressivité des espèces 

pathogènes des champignons du genre Verticillium sont maintenant bien connus. 

Il a été démontré depuis les six dernières décennies que Verticillium forme des 

métabolites phytotoxiques qui sont importants dans la formation des symptômes 

de flétrissement caractéristiques des verticillioses (Pegg, 1965 ; Michail & Carr, 

1966 ; Keen & Long, 1972 ; Chaïb, 1987 ; Meyer et al., 1994). Ces métabolites 

toxiques ont été détectés dans les filtrats de culture de Verticillium isolé de 

diverses plantes hôtes, notamment le coton et la tomate (Keen & Long, 1972 ; 

Cronshaw & Pegg, 1976). Leur caractérisation a fait l’objet de plusieurs travaux. Il 

s’agit d’un complexe protéo-lipo-polysaccharidique PLPC considéré comme toxine 

de Verticillium dahliae induisant flétrissement et chloroses sur les feuilles 

détachées du coton (Keen & Long, 1972 ; Keen et al., 1972 ; Nachmias et al., 

(1982). Plus tard, Nachmias et al., (1985) ont purifié une fraction toxique de faible 

poids moléculaire (< 3000) à partir du PLPC produit par un isolat de V. dahliae de 

la pomme de terre. 

Plus tard encore, Mansoori et al., (1995) ont étudié la production de mycotoxines 

par Verticillium et ont réussi à purifier une toxine de poids moléculaire plus faible 

(

108 

cellules des feuilles et des racines des cotons sensibles et qui se traduit par la perte 

des électrolytes à partir des cellules. Les pertes des ions Na + et k + , mais pas celles 

des ions Ca ++ , des tissus infectés suggèrent une altération du système spécifique du 

transport des ions qui sont présents sur les membranes des cellules (Gour & Dube, 

1985). 

Le complexe PLPC, testé sur la germination du pollen, a réduit de manière 

significative la germination et la croissance du tube pollinique des grains de pollen 

des pommes de terre sensibles à Verticillium mais pas ceux des génotypes 

résistants (Orenstein et al., 1994). Ce biotest permet d’une part de tester 

l’agressivité du Verticillium par le biais de son complexe toxique et d’autre part, de 

servir comme moyen de sélection des variétés résistantes avant la pollinisation des 

pommes de terre. 

La toxinogénèse des champignons dépend de facteurs génétiques et de conditions 

liées au substrat et à l’environnement comme la température, le pH et l’humidité. 

Les variations de ces paramètres peuvent fortement affecter d’une part, la 

croissance fongique et d’autre part, modifier la production de mycotoxines 

(Moreau, 1974). 

A la lumière de ces données, nous nous sommes demandés si la faculté de produire 

des toxines par Verticillium serait affectée par les changements de la concentration 

saline du milieu. Dans cette optique, nous avons étudié in vitro l’effet de l’apport 

du NaCl sur la toxinogénèse de l’isolat P80 de Verticillium afin de mieux 

comprendre les interactions du milieu riche en sel avec les propriétés 

physiologiques du champignon pour l’exercice de son pouvoir pathogène. 


1. Préparation des filtrats de culture de l’isolat P80 de Verticillium 

Des fioles contenant 100ml de milieu Czapeck enrichi en NaCl aux concentrations 

de 0 ; 2 ; 4 ; 6 ; et 8 g/l sont ensemencées avec 1 ml d’une suspension de spores à 

10 6 spores/ml obtenue à partir de pré-cultures de l’isolat P80 âgées de 4 jours. 

Après trois semaines d’incubation à l’obscurité et à 24°C, les cultures sont filtrées 

sur mousseline pour éliminer le mycélium. Les spores sont éliminées par filtration

109 

sous vide sur filtre millipore à 0.22µ. Les cinq filtrats bruts ainsi obtenus sont prêts 

pour les tests de toxicité. 

2. Mise en évidence de la toxicité des filtrats de culture de 

Verticillium par des tests biologiques 

Deux tests ont été utilisés pour évaluer la toxicité des filtrats de culture de 

Verticillium. La méthode a été inspirée de celle mise au point par Payen et al., 

(1983) utilisée pour détecter les moisissures toxinogènes. Ces tests consistent à 

estimer la toxicité des filtrats de culture du champignon par l’inhibition de la 

croissance racinaire des graines en germination (test graine) et du développement 

des plantes entières (test plante). 

2.1. Test graine 

2.1.1. Choix des espèces végétales 

La toxinogénèse de l’isolat P80 cultivé sous différents régimes salins a été testée 

sur des graines appartenant à deux espèces végétales : 

- la tomate, (Lycopersicum esculentum Mill) var Marmande Claudia, plante hôte 

sensible au Verticillium 

- le cresson (Lepidum sativum) var alénois, dont la germination est très rapide et 

constitue un test sensible pour la mise en évidence des mycotoxines ( Samane et 

al., 1991). Les graines germent au bout de 24 heures en présence d’eau distillée. 

2.1.2. Action des filtrats de culture sur la croissance 

racinaire des graines en germination 

Les graines à tester sont stérilisées et mises à germer selon le même protocole 

décrit au chapitre I. Après la sortie de la radicule, des graines d’apparence 

homogène sont sélectionnées et déposées sur deux couches de papier filtre imbibé 

par les différents filtrats de culture à raison de 10 graines par boite de Pétri. Trois 

boites sont prévues par traitement salin. Les graines témoins sont imbibées de 

solution saline de même concentration que les filtrats de culture. Les boites sont 

mises à incuber à l’obscurité et à 24 ± 1°C. La longueur des racines est mesurée 72

110 

heures plus tard. L’effet des filtrats de culture est estimé par le pourcentage 

d’inhibition de la croissance racinaire calculé comme suit : 

% ICR = Lte – Ltr x 100 

Lte 

Lte : accroissement moyen des radicelles témoins 

Ltr : accroissement moyen des radicelles traitées 

2.2. Test plante entière 

Les plantes de tomate ou d’aubergine âgées de trois semaines et arrivées au stade 

premières vraies feuilles sont délicatement déterrées de la pépinière et réparties en 

cinq lots de 15 plantes. Chaque lot reçoit un traitement par un des 5 filtrats de 

culture dont l’obtention est décrite précédemment. Le traitement des plantes 

consiste en un trempage des racines pendant 30 minutes dans le filtrat. Les plantes 

sont ensuite repiquées dans des pots de sable de 450 cm 3 (3 plantes par pot) et 

arrosées au niveau du collet avec 10ml du même filtrat de culture. Les plantes 

témoins subissent le même traitement ; des solutions salines remplacent les filtrats 

de culture. Les plantes sont placées dans une chambre de culture et arrosées 

régulièrement avec une solution nutritive normale sans sel. La croissance des 

plantes est estimée par la mesure de l’épicotyle après 6 semaines de culture. 

B. Résultats 

1. Effet du NaCl sur la phytotoxicité des filtrats de culture de l’isolat 

P80 de Verticillium sur la croissance racinaire de deux espèces 

végétales 

1.1. Manifestation sur la tomate 

Les graines de tomate pré-germées et soumises à l’action du filtrat de culture de 

l’isolat P80 développé sans sel montrent une réduction de la croissance de leur 

racine par rapport aux témoins traités avec de l’eau distillée stérile (figure 28). 

Cette réduction est de l’ordre de 53.16 %.

111 

Les différents filtrats de culture, obtenus après développement du champignon sur 

milieux enrichis en NaCl, provoquent une réduction sévère de la croissance 

racinaire, déficit d’autant plus important que la concentration en sel est élevée. Le 

pourcentage d’inhibition de la croissance atteint 72.77 % sous l’action du filtrat de 

culture du pathogène ayant été soumis à 8g/l de NaCl. 

Rappelons que pour chaque traitement, la croissance racinaire des graines en 

germination soumises à l’action des différents filtrats de culture est comparée à 

celle de leurs témoins respectifs traités par la même concentration saline ; l’eau 

distillée remplaçant le filtrat de culture. Le trouble de la croissance dans ce cas est 

dû à la présence de substances inhibitrices excrétées par le champignon au cours 

de son incubation. 

1.2. Manifestation sur le cresson 

En absence de sel, les racines du cresson se montrent sensibles à l’action du filtrat 

de culture de l’isolat P80 de Verticillium. L’inhibition de la croissance racinaire est 

de 39.65% (figure 29). Cependant, les filtrats de culture du champignon développé 

sur milieux enrichis en NaCl induisent des réductions très importantes de la 

longueur des racines. L’inhibition induite par le filtrat à 2g/l ne diffère pas 

statistiquement de celle du filtrat sans sel. Mais à partir de 4g/l de NaCl, la toxicité 

des filtrats de culture augmente brutalement ; la croissance des racines est 

totalement inhibée par le filtrat de culture à 8g/l par rapport aux témoins soumis 

au même degré de salinité. 

2. Effet du NaCl sur la phytotoxicité des filtrats de culture de l’isolat 

P80 de Verticillium sur la croissance végétative de deux plantes 

hôtes 

2.1. Manifestation sur la tomate Claudia 

L’action toxique des filtrats de culture de Verticillium développé sur milieux à 

différentes concentrations de sel s’est manifestée par une réduction de la taille des 

plantes estimée six semaines après traitement.

112 

Figure 28. Effet de la salinité sur la phytotoxicité des filtrats 

de culture de Verticillium estimée par l'inhibition de la 

croissance racinaire des plantules de tomate 

100 

Inhibition de la croissance racinaire en 

% 

90 

80 

70 

60 

50 

40 

30 

0 2 4 6 8 

Concentration en NaCl des filtrats de culture en g/l 



croissance racinaire des plantules de cresson 

120 

Inhibition de la croissance racinaire en 

% 

100 

80 

60 

40 

20 

0 

0 2 4 6 8 

Concentration en NaCl des filtrats de culture en g/l

113 

Le filtrat de culture du champignon développé sans sel provoque chez les plantes 

traitées un déficit de la croissance d’environ 30% (figure 30). Le traitement des 

plantes par les différents filtrats de culture du champignon développé sur milieux 

de plus en plus enrichis en sel entraîne un rabougrissement des plantes au fur et à 

mesure que la salinité du milieu augmente sauf pour le filtrat de culture à 2g/l de 

NaCl pour lequel le déficit de la croissance observé ne diffère pas statistiquement 

de celui du filtrat dépourvu de sel. L’inhibition de la croissance atteint 58.29% chez 

les plantes traitées par le filtrat à 8g/l. Il faut signaler que le trempage des racines 

témoins dans l’eau distillée additionnée des mêmes concentrations de sel que les 

filtrats de culture n’entraîne pas d’altération de la croissance. Ainsi, le déficit de la 

croissance observé ne peut être dû à la salinité mais uniquement aux substances 

secrétées par le champignon dans le milieu de culture. 

2.2. Manifestation sur l’aubergine Reina negra 

La phytotoxicité des filtrats de culture de l’isolat P80 d’origine de tomate a été 

testée sur une plante d’une espèce différente de l’hôte habituel. 

Les résultats de l’effet de la salinité sur la toxicité des filtrats de culture sur la 

croissance des aubergines sont reportés sur la figure 31. Il apparaît clairement que 

les filtrats de culture de l’isolat P80 développé sans sel ou en présence de 2 et 4g/l 

de NaCl ne montrent pas d’action toxique sur la croissance des plantes 

d’aubergine. En effet, la taille des plantes traitées par ces filtrats ne diffère pas 

statistiquement de celle des témoins traités uniquement avec les solutions salines. 

Cependant, les filtrats de culture du champignon développé sur milieux enrichis 

avec 6 et 8g/l de sel, provoquent un déficit de la croissance des plantes traitées de 

26.42 % et 41.89 % respectivement pour les filtrats à 6 et 8g/l de sel par rapport 

aux témoins de contrôle. 


Les résultats présentés confirment les travaux antérieurs de nombreux auteurs qui 

ont montré que Verticillium produit des métabolites toxiques dans le milieu de

114 



taille des plantes entières de tomate (après six semaines) 

Inhibition de la taille en % 

70 

60 

50 

40 

30 

20 

10 

0 

0 2 4 6 8 

Concentration en NaCl des filtrats de culture en g/l 

Figure 31. Influence de la salinité sur la phytotoxicité des filtrats de 

culture de Verticilliumestimée par l'inhibition de la taille des plantes 

d'aubergine (après six semaines) 

Inhibition de la taille en % 

70 

60 

50 

40 

30 

20 

10 

0 

0 2 4 6 8 

Concentration en NaCl des filtrats de culture en g/l

115 

culture ( Chaib, 1987 ; Keen & Long, 1972 ; Cronshaw & Pegg, 1976 ; Nachmias et 

al., (1982). 

La toxicité des filtrats de culture de l’isolat P80 de Verticillium, facilement mise en 

évidence par le biais de biotests, semble être influencée par la composition en sel 

du milieu de culture. En effet, nos résultats montrent que l’apport de NaCl dans le 

milieu augmente la phytotoxicité des filtrats de culture du champignon. Ces 

résultats sont confirmés par l’augmentation de l’inhibition de l’élongation des 

racines des graines pré-germées de tomate avec la salinité des milieux de culture 

du pathogène ; l’action toxique est d’autant plus importante que la concentration 

en sel est élevée. 

Par ailleurs, la plus grande toxicité de l’isolat de Verticillium développé en 

présence de sel n’est pas limitée aux plantules de tomate mais agit aussi sur une 

plante non hôte ; le cresson. Les graines de cette plante sont souvent utilisées pour 

la détection de mycotoxines chez les moisissures (Payen et al., 1983 ; Lemrani, 

1992). Ces graines se sont montrées plus sensibles à l’action des toxines des 

différents filtrats de culture que les graines de tomate. 

D’autres biotests réalisés sur des plantes entières de tomate et d’aubergine ont 

confirmé les résultats des tests graines. En effet, l’action toxique des différents 

filtrats de culture appliqués sur les racines des plantes avant la transplantation en 

pot s’est manifestée par une réduction de la croissance des plantes 

particulièrement celles traitées par les filtrats du champignon développé en 

présence d’une salinité importante. 

L’influence de la salinité sur la physiologie du parasite se manifeste donc, non 

seulement par une stimulation de la croissance et de la reproduction comme cela a 

été décrit au premier chapitre, mais aussi par la stimulation de la production de 

mycotoxines et/ou de leur action toxique. 

Le rôle joué par les toxines émises par Verticillium est maintenant bien apprécié. 

Elles sont impliquées dans la pathogénèse du champignon et constituent une 

composante principale de l’agressivité (Keen & Long, 1972 ; Chaïb, 1987 ; Meyer et 

al., 1994). D’après les résultats obtenus in vitro, on peut supposer que la présence 

de sel in vivo pourrait augmenter les capacités pathogéniques du parasite. Ce

116 

dernier vit dans la sève dont la composition minérale change avec les changements 

de la concentration saline du milieu extérieur. Ainsi la richesse de la sève en sel des 

plantes soumises au stress salin pourrait constituer un milieu favorable pour la 

production de mycotoxines et/ou intervenir sur leur mode d’action à l’intérieur de 

la plante hôte. Si une telle situation est réalisée, l’action pathogène ne pourra 

qu’être amplifiée. 

II. Influence de la salinité sur l’activité des enzymes 

pectocellulosiques produites in vitro par Verticillium alboatrum 

Introduction 

De nombreux champignons phytopathogènes sont connus pour leur production 

d’enzymes capables de dégrader les polysaccharides des parois cellulaires de leurs 

plantes hôtes. Les cellulases et les pectinases seraient impliquées dans les maladies 

des plantes et dans le processus de la dégradation des tissus durant la colonisation 

par l’agent pathogène (Wood, 1960 ; Cooper & Wood, 1975). 

Verticillium albo-atrum produit une gamme de polysaccharidases qui dégradent 

les parois cellulaires des tissus vasculaires de la tomate (Cooper et al ; 1978 ; 

Cooper & Wood, 1980 ; Durand & Cooper, 1988). Une augmentation de l’activité 

endopectine lyase dans les vaisseaux conducteurs des tomates sensibles a été 

enregistrée trois jours après l’infection par V. albo-atrum et bien avant l’apparition 

de symptômes (Cooper & Wood, 1980). 

Dans le processus de pénétration des champignons pathogènes à travers la paroi 

cellulaire, un rôle essentiel est également joué par les enzymes hydrolysant les 

hémicelluloses et les celluloses. En effet, Russel, (1975) a montré que l’infection 

des tomates avec V. albo-atrum entraîne une augmentation de l’activité 

cellulolytique aussi bien chez les plantes sensibles que résistantes. Cet auteur 

stipule que les cellulases sont produites par les plantes mais aussi en grande partie 

par le pathogène.

117 

La production des polysaccharidases par les champignons dépend de la nature de 

la source de carbone du milieu (Gupta & Heale, 1971 ; Bahkali, 1995). Les études 

menées in vitro par Gupta & Heale, (1971) ont montré que parmi le grand nombre 

de sucres et de polysaccharides, seul les substrats à base de cellulose et de 

cellobiose peuvent induire la production de cellulases. Selon le même auteur, 

l’activité cellulase peut être convenablement étudiée en utilisant plusieurs formes 

de cellulose soluble et incluant les sels de Na + du carboxyméthylcellulose comme 

substrat. 

Bateman, (1969) a rapporté que l’environnement où se développent certains 

champignons phytopathogènes influe sur le type et la quantité d’enzymes 

pectocellulosiques qu’ils produisent. 

Toujours dans le sens d’expliquer la plus grande sensibilité des tomates à la 

verticilliose sous stress salin, nous nous sommes demandés si la sévérité de la 

maladie ne serait pas le résultat d’une modification de l’activité des enzymes du 

pathogène sous l’effet de la salinité du milieu ? 

Dans cet esprit, nous avons étudié l’impact de la salinité sur la production in vitro 

des enzymes cellulolytiques par deux souches de Verticillium qui diffèrent par leur 

pouvoir pathogène vis-à-vis de la tomate. 


1. Les isolats de Verticillium utilisés 

Deux isolats de Verticillium albo-atrum, d’origine tomate, P80 et P3A, 

respectivement pathogène et non pathogène sur tomate, Marmande Claudia, ont 

été utilisés. L’origine et les caractéristiques de ces deux isolats ont été décrites au 

chapitre précédent. 

2. Analyse de l’activité carboxyméthylcellulase 

2.1. Production de l’enzyme

118 

La carboxyméthylcellulase est la principale enzyme cellulolytique produite par les 

isolats de Verticillium d’origine tomate (El Aissami et al., 1998). Elle a été retenue 

pour étudier l’effet de la salinité sur l’activité cellulase de Verticillium. 

A partir d’une culture des deux isolats de Verticillium âgée de 15 jours menée sur 

milieu PDA, des rondelles de 3 mm de diamètre sont découpées sur le pourtour des 

thalles et déposées au centre de boîtes de Pétri (9cm) contenant 25 ml de milieu 

(CMC) approprié à la production de l’enzyme, formé de (en g/l ): KH 2 PO 4 ,1 ; 

NaCO 3 , 2 ; KCl, 0,5 ; MgSO 4 , 0,5 ; Agar 20. La carboxyméthylcellulose (2%, p/v) 

est utilisée comme seule source de carbone ; le saccharose ou le glucose 

n’induisant pas de production optimale de cellulases chez Verticillium ( Gupta & 

Heale, 1971 ; Bahkali, 1995). Le sel est ajouté au milieu de culture aux 

concentrations de 0 ; 4 ; 8 ; 12 et 16 g/l. Le pH est de 5. Les cultures sont mises à 

incuber à 24 ± 1°C à l’obscurité. 

2.2. Révélation 

L’activité enzymatique est mise en évidence par un test quantitatif rapide inspiré 

de la méthode des cup-plate (Mann, 1962). Il est basé sur la diffusion radiale de 

l’enzyme libérée par le champignon dans le substrat gélosé. La révélation est 

réalisée sur les cultures après 12 jours d’incubation. Les diamètres 

perpendiculaires de chaque colonie sont mesurés pour l’estimation de la croissance 

mycélienne des deux isolats sur milieu CMC. Les boîtes portant les cultures sont 

ensuite inondées d’une solution aqueuse de rouge Congo à 0,5% pendant 30 

minutes sous agitation à température ambiante. Elles sont ensuite rincées par trois 

bains successifs d’une solution de NaCl (1M) d’une durée de 15 minutes chacun. 

Un dernier et 4 ème bain de NaCl dure une nuit. L’activité enzymatique est mise en 

évidence par la présence d’un halo clair ou très foncé qui apparaît autour de la 

culture fortement colorée en rouge . Elle est estimée par la mesure de la zone 

d’activité ; différence entre le diamètre de la zone claire et le diamètre de la 

colonie. 

Les valeurs obtenues sont la moyenne de huit répétitions. Les résultats sont 

comparés par l’analyse des variances au seuil de probabilité de 5% selon le test de 

Student.

119 

3. Analyse de l’activité pectine méthyle estérase 

3.1. Production de l’enzyme 

Le champignon est mis en culture dans des fioles de 250ml contenant 100ml de 

milieu Czapeck liquide modifié : le saccharose est remplacé par de la pectine 

comme seule source de carbone et le milieu est enrichi en vitamine B1 à raison de 

375µg par litre. Le traitement par le sel consiste en l’addition au milieu de culture 

de 4 ;8;12 et 16g/l de NaCl. Le pH final est ajusté à 5.9 par addition de NaOH. 

Après autoclavage, chaque fiole est ensemencée par 5.10 4 spores de Verticillium 

prélevée d’une suspension de spores fraîchement préparée. Après deux semaines 

d’incubation à 24°C, les cultures sont filtrées selon le protocole décrit 

précédemment. Les filtrats de culture servent immédiatement au dosage de 

l’activité enzymatique. 


La révélation de l’enzyme est faite dans des boites de Pétri contenant 30ml du 

milieu suivant : 

- Pectine (pectin apple) 0.5 % 

- Agar noble 2 % 

- Tampon citrate phosphate 0.05 M, pH 6.5 

L’enzyme est dosée selon la technique des cup-late ( Mann, 1962). On dépose 50µl 

de chaque filtrat de culture dans des puits creusés à l’emporte pièce dans des 

boites de Pétri contenant le milieu gélosé de révélation de l’enzyme à raison de 3 

puits par boite. 

Après 16 heures d’incubation à 30°C les boites sont submergées d’acide malique 

0.1 M et mises en agitation pendant une heure à la température ambiante. Les 

boites sont ensuite rincées et inondées avec une solution aqueuse de rouge de 

ruthénium à 0.02 %. Après une nuit, un halo clair apparaît autour des puits et 

indique la présence de la pectine méthyle estérase.

120 

B. Résultats 

1. Croissance de deux isolats de Verticillium développés sur milieu 

CMC enrichi en NaCl 

Les deux isolats P80 et P 3 A, cultivés sur milieu CMC enrichi en sel, semblent 

tolérer des concentrations importantes de sel à en juger par les valeurs des 

diamètres des colonies à 16 g/l de NaCl (figure 32). On note cependant une légère 

réduction de la croissance mycélienne avec l’augmentation de la salinité par 

rapport aux témoins respectifs cultivés sur le même milieu sans sel. Cette baisse du 

développement ne dépasse guère 30% et 24% respectivement pour les isolats 

pathogène P80 et non pathogène P 3 A à la concentration de 16 g/l de NaCl. 

2. Effet de la salinité sur l’activité carboxyméthylcellulase 

L’activité carboxyméthylcellulase a été mise en évidence par la technique du cupplate. 

Les résultats sont estimés par la mesure de la zone d’activité (Planche 8) et 

sont reportés sur la figure 33. En absence de sel, les deux isolats P80 et P3A de 

Verticillium respectivement pathogène et non pathogène sur tomate Marmande 

présentent une activité carboxyméthylcellulase similaire. Avec l’augmentation de 

la salinité du milieu, l’activité de l’enzyme croît progressivement. Pour les 

concentrations comprises entre 4 et 12g/l, l’isolat P 3 A montre une activité 

carboxyméthylcellulase nettement plus élevée que celle de l’isolat P80. Sous ces 

conditions salines, P 3 A semble plus efficient pour la production de l’enzyme in 

vitro. A 16 g/l, l’activité cellulase se stabilise pour l’isolat P 3 A et continue 

d’augmenter pour l’isolat pathogène P80 pour atteindre celle de P 3 A ; les deux 

valeurs de l’activité sont semblables et dépassent de 4 fois celles de l’activité de 

l’enzyme en absence de sel. 

3. Effet de la salinité sur l’activité pectine méthyle estérase 

Les résultats des tests ont tous été négatifs aussi bien en absence qu’en présence de 

NaCl. Les deux isolats de Verticillium testés ne présentent pas d’activité pectinase 

dans nos conditions de culture.

121 

Figure 32. Effet de la salinité sur la croissance mycélienne de 

deux isolats de Verticillium développés sur milieu CMC 

après 12 jours d'incubation 

40 

Diamètre des cultures en mm 

35 

30 

25 

20 

15 

10 

5 

0 

Isolat P80 

Isolat P3A 

0 4 8 12 16 

Concentration en NaCl en g/l 

Figure 33. Effet de la salinité sur l'activité 

carboxyméthylcellulase estimée par la mesure de la zone 

d'activité en mm de deux isolats de Verticillium développés 

sur milieu CMC 

Activité carboxyméthylcellulase (en 

mm) 

20 

18 

16 

14 

12 

10 

8 

6 

4 

2 

0 

Isolat P80 

Isolat P3A 

0 4 8 12 16 

Concentration en NaCl en g/l

122 

Planche 8. Effet de la salinité du milieu CMC sur l’activité 

carboxyméthylcellulase de l’isolat P80 de Verticillium estimée par 

l’halo clair apparaissant autour de la colonie 

0 : culture de Verticillium sur milieu dépouvu de NaCl 

8 : culture de Verticillium sur milieu enrichi avec 8g/l de NaCl

123 

C. Conclusion et discussion 

Le rôle des enzymes cellulolytiques dans la détermination de l’agressivité des 

isolats de Verticillium a fait l’objet de plusieurs études (Mussel, 1973 ; Russel, 

1975 ; Balandina et al., 1976 ; El Aissami, 1998 ; Regragui et al., 2003). Nos 

résultats sur l’activité cellulolytique du Verticillium montrent qu’en absence de 

stress salin, les isolats P80 et P 3 A respectivement pathogène et non pathogène sur 

tomate sont capables de produire in vitro la carboxyméthylcellulase dans le 

milieu de culture CMC gélosé contenant la carboxyméthylcellulose comme seule 

source de carbone. En présence de sel, une augmentation nette de l’activité 

carboxyméthylcellulase est enregistrée avec les concentrations croissantes de NaCl 

du milieu avec un maximum à 16 g/l. Notons toutefois que l’activité enzymatique 

de l’isolat non pathogène P 3 A est supérieure à celle de l’isolat pathogène P80 pour 

les concentrations moyennes de NaCl. 

La salinité du milieu de culture semble donc stimuler la production de 

carboxyméthylcellulases in vitro chez les deux isolats de Verticillium. L’isolat P 3 A 

semble plus efficient pour la production de l’enzyme dans nos conditions 

expérimentales. 

La salinité peut affecter différemment l’aptitude des champignons 

phytopathogènes à produire les enzymes cellulolytiques in vitro (El Abyad et al., 

1992). Ainsi Sclerotium rolfsii et Rhizoctonia solani, deux champignons du sol 

pathogènes sur la betterave, voient leur aptitude à dégrader les parois cellulaires 

de leur hôte perturbée par le sel in vitro. Chez S. rolfsii, l’activité enzymatique 

augmente avec l’augmentation de la salinité du milieu, ce qui concorde avec nos 

résultats sur Verticillium, alors que celle de R. solani diminue. 

L’activité enzymatique de Verticillium peut être également perturbée à la suite 

d’un stress autre que la salinité. Ainsi, l’activité caséine kinase de Verticillium 

dahliae, parasite du coton, peut disparaître sous l’effet d’un choc thermique 

(Vasiliev et al., 1992). 

L’augmentation des performances cellulolytiques des deux isolats de Verticillium 

in vitro en présence de sel laisse prévoir une augmentation de la pathogénèse du

124 

parasite in vivo en conditions salines. L’étude de l’effet du sel sur la variabilité du 

pouvoir pathogène de Verticillium présentée au deuxième chapitre a bien révélé 

une augmentation des pouvoirs parasitaire et pathogène de l’isolat P80 sur la 

tomate mais aussi sur d’autres plantes qui ne lui sont pas spécifiques comme 

l’aubergine et la luzerne. De même, cette étude a montré l’expression de nouvelles 

aptitudes pathogènes par l’isolat P3A connu pour sa faible agressivité envers la 

tomate. Ces variations dans l’expression du pouvoir pathogène induites par le sel 

peuvent être expliquées, en partie, par l’augmentation des activités cellulolytiques 

du parasite touchant aussi bien la souche virulente qu’avirulente. Cette aptitude 

acquise favoriserait l’invasion et la colonisation des cellules hôtes par le parasite. 

Cette interprétation peut être appuyée par les travaux de Mussel (1973). Cet auteur 

a montré qu’il y a une corrélation positive entre l’activité enzymatique des isolats 

de Verticillium et leur agressivité vis-à-vis du coton. Dans le même sens, Witney et 

al., (1972) ont déduit que la carboxyméthylcellulase est d’autant produite par 

Verticillium albo-atrum que l’infection de la luzerne est forte. 

III. Influence de la salinité sur l’activité phénoloxydasique de 

Verticillium albo-atrum 

Introduction 

Les phénoloxydases (Pox) sont des enzymes largement distribuées dans les 

végétaux supérieurs et les micro-organismes (Bollag & Leonowicz, 1984). Elles 

comprennent trois types d’enzymes ; les laccases, les péroxydases et les 

tyrosinases. Elles jouent un rôle important dans la biodégradation de la lignine et 

des composés phénoliques qui en dérivent (Eriksson et al., 1990), d’où l’intérêt de 

leur utilisation dans la délignification des éléments du bois comme alternative aux 

procédés physico-chimiques coûteux et polluants. 

La lignine, composant des parois cellulaires des végétaux supérieurs est l’un des 

polymères les plus importants à la surface de la terre. En comparaison avec la 

cellulose, la lignine n’est dégradée que par un nombre réduit de microorganismes. 

La biodégradation des lignines par les bactéries a été surtout étudiée chez les 

Actinomycètes et principalement le genre Streptomyces (Crawford et al., 1982).

125 

Concernant les champignons, ce sont les Basidiomycètes de la pourriture blanche 

qui sont considérés comme les organismes lignilolytiques les plus performants et 

le mieux exploités (Kirk & Shimada, 1985). Seulement, la biodégradation des 

lignines par ces champignons reste un phénomène lent. 

Rahouti et al., (1995) ont testé l’activité phénoloxydasique d’une collection de 1059 

Micromycètes et ont rapporté que 57% des souches sont capables de produire des 

Pox de différents types et à des taux variables. Selon les mêmes auteurs, la 

production de Pox , très hétérogène à l’intérieur des groupes taxonomiques, est 

commune aux Sphaeropsidales, Mélancoliales, Basidiomycètes, Demathiaceae, 

Tuberulariales, Stilbellales et Agromycètes, alors que les levures et les Zygomycètes 

ont une faible activité phénoloxydasique. 

Les champignons du genre Verticillium ont une activité phénoloxydasique 

variable selon les espèces (Rahouti, 1995). Les espèces V. lamellicola et V. lecanii 

seraient les plus performantes. 

N’ayant pas de données sur l’activité phénoloxydasique de l’espèce V. albo-atrum 

et vu l’importance de la biodégradation des lignines dans le cycle du carbone, on se 

propose d’étudier d’une part l’activité phénoloxydasique de deux souches de 

Verticillium d’origine tomate qui diffèrent par leur morphologie et par leur pouvoir 

pathogène, et d’autre part, d’examiner l’impact de la salinité du milieu sur la 

production de Pox. 


1. Les souches fongiques 

Deux souches de Verticillium ont été testées : 

- La souche P80 de phénotype sauvage dont les caractéristiques sont 

décrites au chapitre précédent 

- La souche P1 ; souche hyaline obtenue après vieillissement d’un isolat 

sauvage de Verticillium (Lahlou, 1983). Ce variant a perdu la capacité de produire 

des microsclérotes mais aussi son pouvoir pathogène vis-à-vis de la tomate 

Marmande sensible.

126 

Les cultures sont conduites en boites de Pétri sur milieu gélosé à base d’extrait de 

malt et sont incubées à l’obscurité et à 24±1°C. 

2. Détection des phénoloxydases. 

1.2. Les réactifs 

La détection des Pox a été réalisée selon la méthode de Käärik, (1965), et de Ander 

& Eriksson (1976) en utilisant des solutions alcooliques (0.1M dans l’éthanol à 95°) 

de l’acide gallique AG, du gaïacol GUA et de l’alpha-naphtol (NPH) comme 

substrat des Pox. 

La production des laccases a été recherchée selon la technique de Harkin & Obst 

(1973) et de Harkin et al., (1974) : la syringaldazine SYR , en solution à 0.1% dans 

l’éthanol à 95° est utilisée pour révéler la présence de laccases. En absence de ces 

dernières, l’addition d’une solution aqueuse de H 2 O 2 à 0.03% permet la détection 

des peroxydases. 

2.2. Révélations 

Des expériences préliminaires ont montré que la détection des Pox était meilleure 

sur un étalement de spores que sur une colonie obtenue à partir d’une bouture. 

Sur des étalements de spores des deux souches de Verticillium, âgés de 4 jours ou 

de 12 jours selon le test, on dépose 4 gouttes d’un des réactifs à l’aide d’une pipette 

Pasteur. La présence de Pox est révélée par l’apparition d’une coloration à l’endroit 

du dépôt. La lecture est faite 24 heures après le dépôt sauf pour la syringaldazine 

où la lecture est effectuée après 20 minutes. Des tests témoins sont réalisés afin de 

vérifier qu’il n’y ait pas de fausses réactions positives. Ils consistent à déposer 

quelques gouttes d’éthanol à 95° ou de la solution aqueuse de H 2 O 2 sur la culture. 

B. Résultats 

1. Influence de la salinité sur la cinétique de la production des Pox 

La détection des Pox a été répétée tous les jours et durant deux semaines. Les 

réactions aux différents substrats sont reportées sur le tableau 7.

127 

1.1. La souche sauvage P 80 

L’activité phénoloxydase apparaît dès le 4 ème jour de culture avec une réaction 

faiblement positive avec l’acide gallique et le NPH. Ce n’est qu’au 7 ème jour de 

culture que la réaction au gaïacol devient positive (tableau 7A). 

Au 11 ème jour, tous les réactifs donnent des réactions colorées y compris la 

syringaldazine. 

En fin d’expérience, les résultats montrent que la souche P80 produit des Pox, 

principalement des laccases. 

1.2. La souche hyaline P1 

Chez cette souche hyaline de Verticillium la production de Pox apparaît plutôt que 

chez la souche sauvage et se manifeste dès le 3 ème jour de culture (tableau 7B). De 

même, la réaction à la syringaldazine devient positive le 8 ème jour 

comparativement à celle de la souche P 80 qui apparaît le 11 ème jour de culture. En 

général, la production de laccases par la souche hyaline semble plus importante 

que celle obtenue par la souche sauvage. 

2. Influence de la salinité sur l’activité phénoloxydasique globale de 

Verticillium 

Les tests ont été réalisés selon le même protocole que précédemment. Les milieux 

de culture ayant été enrichis avec NaCl aux concentrations suivantes: 0; 1 ; 2 ; 3 ; 4 

g/l. Les résultats sont reportés sur le tableau 8. Ils montrent que l’activité 

phénoloxydasique de la souche P80 dépend de la concentration saline du milieu. 

En présence de 1g de NaCl par litre, la production de Pox est semblable à celle des 

témoins. Dès que la concentration atteint 2g/l, l’activité Pox devient réduite ; elle 

est faiblement positive avec l’AG et le GUA et négative pour les deux autres 

réactifs. Pour les concentrations supérieures à 3g/l, toutes les réactions sont 

négatives ; le champignon ne produit plus de laccases en comparaison avec le 

témoin sans sel.

128 

Tableau 7. Cinétique de la production des phénoloxydases par deux 

souches de Verticillium albo-atrum. 

7 A. Souche sauvage P80 

Réactifs AG GUA NPH SYR 

1 jour - - - - 

2 jours - - - - 

3 jours - - - - 

4 jours + - + - 

Temps 

d’incubation 

5 jours ++ + + - 

6 jours +++ ++ ++ - 

7 jours +++ ++ ++ - 

8 jours +++ ++ ++ - 

9 jours +++ ++ ++ - 

10 jours +++ ++ ++ - 

11 jours +++ ++ ++ + 

12 jours +++ ++ ++ + 

13 jours +++ ++ ++ + 

14 jours +++ ++ ++ + 

(-) : réaction négative (+) : réaction positive 

AG : Acide gallique 

GUA : gaïacol 

NPH: alpha-naphtol 

SYR : syringaldazine

129 

7 B. Souche hyaline P1. 

Réactifs AG GUA NPH SYR 

1 jour - - - - 

2 jours - - - - 

3 jours ++ + - - 

4 jours +++ + ++ - 

Temps 


5 jours +++ + ++ - 

6 jours +++ ++ ++ - 

7 jours +++ ++ +++ + 

8 jours +++ ++ +++ + 

9 jours +++ ++ +++ + 

10 jours +++ ++ +++ ++ 

11 jours +++ +++ +++ ++ 

12 jours +++ +++ +++ ++ 

13 jours +++ +++ +++ ++ 

14 jours +++ +++ +++ ++ 


AG : Acide gallique 

GUA : gaïacol 

NPH: alpha-naphtol 

SYR : syringaldazine

130 

Tableau 8. Activité phenoloxydasique de l’isolat P80 de Verticillium en 

fonction de la salinité du milieu 

NaCl en g/l 

Réactifs 

AG GUA NPH SYR H2O2 

0 +++ ++ ++ + - 

1 ++ ++ ++ + - 

2 + + - - - 

3 + + - - - 

4 - - - - - 


AG : Acide gallique, GUA : gaïacol, NPH: alpha-naphtol, SYR : syringaldazine, 

H2O2 : peroxyde d’hydrogène 


La détection des Pox in vitro sur une culture de Verticillium albo-atrum a révélé la 

capacité de cette espèce à produire ces enzymes. Cette aptitude semble plus 

performante chez la souche hyaline hypovirulente par rapport à la souche sauvage 

virulente. Ce résultat s’ajoute aux travaux de Rahouti et al., (1995) qui ont mis en 

évidence une activité phénoloxydasique chez d’autres espèces de Verticillium. 

La principale Pox produite étant la laccase. Ce type d’enzyme est spécifiquement 

détecté par la syringaldazine mais aussi par le gaïacol et l’acide gallique considérés 

comme des substrats très sensibles aux trois phénoloxydases. 

En revanche, Verticillium albo-atrum ne produit pas de peroxydases ni de 

tyrosinases. 

L’activité phénoloxydasique de l’isolat P80 de Verticillium albo-atrum semble être 

modifiée par la salinité du milieu. L’addition de très faibles quantités de sel dans le 

milieu ne modifie pas la production de laccases, mais l’augmentation de la salinité 

au-delà de 3g/l annule complètement l’activité de l’enzyme.

131 

Le chlorure de sodium paraît avoir ainsi un effet négatif sur l’activité métabolique 

de Verticillium albo-atrum vis-à-vis de la lignine. La sensibilité des Pox au sel 

serait due à un effet direct des ions sur l’activité des laccases et/ou un effet du sel 

sur l’induction de ces enzymes. 

Les conséquences de l’inactivation des Pox en présence de sel peuvent se 

manifester sur la vie saprophytique de Verticillium. En effet, ce champignon est un 

parasite hemibiotrophe ou parasite « facultatif » qui passe successivement d’une 

phase de vie parasitaire à une phase de vie saprophytique. Les débris végétaux 

après récolte, les cellules et tissus tués par l’action du champignon sont dégradés et 

servent de base nutritive que l’agent pathogène va exploiter au cours de sa vie 

saprophytique et sur laquelle il va se multiplier en formant des conidies et des 

microsclérotes (Lahlou, 1983). Si les conditions du milieu sont défavorables, la vie 

saprophytique peut être réduite, seuls les microsclérotes résistent et permettent la 

conservation du champignon dans le sol. Rien ne nous empêche de penser que 

l’augmentation de la salinité du sol puisse ralentir la dégradation de la lignine des 

parois cellulaires des débris végétaux par le champignon via une inhibition des 

Pox et écourter par conséquent sa phase saprophytique. L’étude de l’influence du 

sel sur la vie saprophytique du Verticilium dans le sol pourrait lever ce doute. 

IV. Effet de la salinité du milieu sur le profil protéique de 

l’isolat P80 de Verticillium albo-atrum. 

Introduction 

Les champignons du genre Verticillium sont des parasites vasculaires qui vivent et 

se reproduisent à l’intérieur des vaisseaux du xylème de leurs plantes hôtes. Ils 

sont donc soumis aux fluctuations de la composition chimique de la sève elle 

même dépendante des variabilités du milieu nutritif extérieur. Nos précédents 

travaux ont permis de mettre en évidence la tolérance de ces parasites à des 

concentrations salines extrêmement élevées. La salinité stimule non seulement la 

croissance et la sporulation de ces parasites mais aussi leurs capacités toxinogènes 

et leurs performances cellulolytiques (Regragui et al., 2003). Ces deux fonctions 

physiologiques déterminent une grande part de l’agressivité de l’agent pathogène.

132 

L’influence du sel semble s’exercer sur la production de métabolites toxiques et 

d’enzymes ayant une activité cellulolytique comme la carboxyméthylcellulase. 

La salinité serait donc à l’origine de remaniements biochimiques qui touchent le 

métabolisme des protéines chez cet agent pathogène. Pour contribuer à apporter 

plus d’arguments aux modifications biochimiques des composantes de la 

pathogénèse de Verticillium induites par la salinité, nous proposons de faire une 

estimation des taux de protéines extracellulaires produites par l’agent pathogène 

au cours de son incubation sur milieu salé et d’analyser leurs profils 

électrophorétiques en fonction de la richesse du milieu en NaCl. 


1. Concentration des protéines 

Les filtrats de culture du champignon développé sur milieu Czapeck additionné de 

o ; 2 ; 4 ; 6 et 8g/l de NaCl subissent une précipitation à l’éthanol. Cette opération 

consiste à traiter un volume du filtrat avec deux volumes d’éthanol absolu. La 

précipitation dure deux heures et le précipité est récupéré après centrifugation à 

10000 rpm pendant 15 minutes. Le culot obtenu est rincé avec du tampon Tris- 

EDTA, pH 7.4 (Tris 10mM, EDTA 1mM). Il va servir au dosage des protéines et à la 

séparation par électrophorèse. 

2. Dosage des protéines 

Les protéines sont dosées par la technique de Bradford (1976). Cette méthode 

permet de doser de faibles quantités de protéines. Une gamme étalon (20 ; 40 ; 

60 ; 80 ; 100 et 120µg) est préparée à partir d’une solution d’albumine sérique 

bovine (BSA, 0.1mg/ml). Chaque dilution est préparée en duplicata. 

Dans un tube à essai contenant 200µl de protéine standard (BSA) ou 

d’échantillon , 1.8ml du réactif de Bradford au bleu de Coomassie sont ajoutés et 

l’ensemble est bien mélangé au vortex. La coloration apparaît en quelques 

secondes et reste stable pendant une heure. L’absorbance est lue à 595 nm après 

cinq minutes. La quantité de protéines présente dans l’échantillon est déterminée 

par extrapolation dans la courbe étalon et est exprimée en µg/ml.

133 

3. Analyse des protéines par électrophorèse 

La séparation des protéines fongiques est effectuée par électrophorèse sur gel 

dénaturant de polyacrylamide, en utilisant le système discontinu en présence du 

SDS (sodium dodecyl sulfate). Ce dernier déroule complètement les protéines en 

détruisant leurs structures secondaires et tertiaires. Les protéines se comportent 

comme des anions. Leur mobilité sous l’action d’un champs électrique est fonction 

de leur taille. 

3.1. Préparation des gels 

Nous avons utilisé un gel de séparation à 10% d’acrylamide et un gel de 

concentration à 5%. ( voir annexes). 

3.2. Préparation des échantillons 

Les échantillons de protéines sont traités avec un tampon de traitement des 

échantillons (annexes) puis chauffés à 95°C pendant cinq minutes. Après 

refroidissement, 20µl d’échantillons sont déposés dans les puits du gel. Les 

échantillons sont conservés en aliquots de 0.5ml et mis au congélateur. 

3.3. Migration 

Après avoir déposé les échantillons dans les puits, les deux chambres de la cuve à 

électrophorèse sont remplies de tampon d’électrophorèse (annexes) et la cuve est 

connectée au générateur. La migration est effectuée sous tension de 200V. Le front 

de migration est visualisé grâce au bromophénol ajouté à l’extrait. 


Après avoir retiré délicatement le gel, la coloration se fait selon les étapes 

suivantes : 

- Fixation : fixer 30 minutes dans la solution de fixation. Rincer cinq 

minutes dans la solution de décoloration (éthanol 250ml- acide acétique 20ml- eau 

distillée 730ml). On peut laisser le gel la nuit dans le fixateur et au frigo pour 

coloration le lendemain.

134 

- Coloration : le gel est trempé dans la solution de coloration (bleu de 

Coomassie R 250 (1.15g- éthanol 250ml- acide acétique 40ml- eau distillée 710ml). 

Laisser le gel 10 minutes à 60°C ou 1h à 1h.30 à température ambiante. 

- Rinçage : 5 minutes dans la solution de décoloration usée 

- Décoloration : 3 bains successifs de 2heures dans la solution de 

décoloration. La décoloration est arrêtée lorsque le fond du gel n’est pratiquement 

plus bleu. 

- Conservation : tremper dans la solution de conservation (éthanol 100mlacide 

acétique 40ml- glycérol 100ml- eau distillée 760ml). Laisser sécher à l’abri 

de la poussière. Pour conserver le gel pour une longue durée, le mettre entre deux 

feuilles en plastique à 4°C. 


Les poids moléculaires des différentes protéines sont déterminés à partir de la 

courbe log 10 PM (standard de PM) qui est une fonction de la mobilité 

électrophorétique. 

B. Résultats 

1. Effet de la salinité sur le taux des protéines secrétées dans les 

filtrats de culture par Verticillium. 

Les résultats du dosage des protéines extracellulaires libérées après trois semaines 

par l’isolat P80 dans le milieu de culture additionné de sel sont consignés sur le 

tableau 9. 

L’analyse des résultats montre que les filtrats bruts issus des cultures enrichies en 

sel (2 à 6g/l) renferment plus de protéines que le filtrat brut témoin sans sel. 

L’augmentation des quantités de protéines est faible en présence de 2 et 4g/l. Le 

taux de protéines le plus important est contenu dans le filtrat à 6g/l de NaCl et qui 

montre une augmentation de 102.10% par rapport au filtrat de contrôle. 

Cependant l’apport de 8g/l dans le milieu de culture provoque une baisse de la 

quantité de protéines extracellulaires par rapport aux autres concentrations de sel. 

Néanmoins, le taux de protéines se rapproche de celui du filtrat témoin sans sel.

135 

Les quantités de protéines présentes dans les précipités à l’éthanol sont nettement 

plus élevées que celles des filtrats bruts. Leur évolution en fonction de la salinité 

suit celle des filtrats bruts. Toutefois, les quantités de protéines des précipités à 2 ; 

4 et 6g/l, nettement plus élevées qu’en absence de sel, sont sensiblement les 

mêmes. Le taux de protéines baisse ensuite à la concentration de 8g/l pour 

rejoindre celui des précipités sans sel. 

Tableau 9. Dosage des protéines de l’isolat P80 de Verticillium (µg/ml) 

dans les filtrats de culture en fonction de la salinité du milieu. 

Quantité de protéines en µg/ml 

NaCl (g/l) 0 2 4 6 8 

Filtrat brut 95 100 105 192 92 

Précipité à l’éthanol 403 508 502 500 392 

2. Effet de la salinité sur l’évolution du pH des filtrats de culture 

Le pH initial des différents milieux de culture additionnés ou non de NaCl a été 

ajusté à 5 au moment de l’ensemencement du pathogène. Après trois semaines de 

culture, les valeurs du pH des filtrats de culture ont été notées et reportées sur le 

tableau 10. 

Il apparaît clairement que les valeurs du pH final montrent des modifications qui 

dépendent de la concentration saline du milieu. 

En absence de sel, le pH final du filtrat de culture du champignon a augmenté en 

tendant vers la neutralité. Cependant, en présence de 2 et 4g/l de sel, le pH s’élève 

et tend vers une légère alcalinité. Au delà de 4g/l de sel, la valeur du pH diminue 

par rapport aux autres filtrats. A 8g/l, le pH final est peu différent du pH initial et 

affiche une valeur inférieure à celle du filtrat témoin sans sel.

136 

Tableau 10. Effet de la salinité sur le pH final des milieux de culture de 

Verticillium après trois semaines d’incubation 

Valeurs du pH des filtrats de culture 

Concentration saline des milieux de culture en g/l de NaCl 

0 2 4 6 8 

pH initial 5 5 5 5 5 

pH final 6.5 7.6 7.8 6.2 5.3 

3. Effet de la salinité sur les profils protéiques de l’isolat P80 

Les protéines préparées à partir des précipités éthanoliques des filtrats de culture 

du champignon développé sur milieu enrichi en NaCl sont séparées par SDS- 

PAGE. 

Les différents extraits protéiques sont notés de F 0 à F 8 selon la concentration en sel 

du milieu de culture allant de 0 à 8g/l. 

3.1. Analyse des protéines sur gel de polyacrylamide 

Le gel coloré au bleu de Coomassie (Planche 9) montre que le profil de l’isolat P80 

varie en fonction de la concentration saline du milieu. 

En absence de sel (F 0), le profil de cet isolat contient des polypeptides dont les 

poids moléculaires (PM) varient de 40 à 130 Kda. On remarque en effet deux 

bandes de PM faible de 45 et 48 Kda et une bande de PM élevée correspondant à 

130 Kda. Les trois autres polypeptides sont plus abondants et présentent des PM 

de 63 ; 70 et 76 Kda. 

Le profil protéique des extraits issus du filtrat de culture additionné avec 2 g/l de 

sel (F 2 ) est sensiblement le même que celui du filtrat F 0 . Cependant, le filtrat F 4 

montre une absence du polypeptide 45 Kda. Cette observation est valable 

également pour F 6 et F 8. En revanche, chez ces derniers, apparaissent deux 

polypeptides qui n’ont pas été détectés sur les autres filtrats. Il s’agit d’un 

polypeptide de faible PM de 40Kda et un autre de PM élevé de 116 Kda.

137 

3.2. Comparaison de l’expression des protéines 

Les résultats de cette comparaison sont répertoriés sur le tableau 11. Ils montrent 

des différences dans l’expression des trois protéines majeures de l’isolat P80 qui 

correspondent aux bandes de PM de 63 ; 74 et 76Kda. 

Le polypeptide 63 Kda apparaît sensiblement avec la même importance sur les 

profils de tous les filtrats indépendamment de leur degré de salinité. Les 

polypeptides de PM à 74 et 76 Kda sont nettement plus abondants sur les profils 

des filtrats F 6 et F 8 par rapport à ceux exprimés sur les autres profils de plus faible 

concentration saline. Il en est de même pour le polypeptide de haut PM de 130 Kda 

qui est mieux exprimé chez F 6 et F 8. 

Comparaison des compositions polypeptidiques des filtrats de culture 

de l’isolat P80 de Verticillium sur gel de polyacrylamide à 10% en 

fonction de la salinité du milieu. 

Taille des 

Protéines extraites des filtrats de culture 

Polypeptides en Kda 

F0* F2 F4 F6 F8 

40 - - + + + 

45 + + + - - 

48 + + + + + 

63 +++ +++ +++ +++ +++ 

70 ++ ++ ++ +++ +++ 

76 ++ ++ ++ +++ +++ 

116 - - - ++ ++ 

130 + + + ++ ++ 

* 0 ; 2 ; 4 ; 6 ; 8 : concentration des milieux de culture en g/l de NaCl 

(-): absence (+): présence (++) : abondance moyenne (+++ ): grande abondance

138 

Planche 9. Visualisation des protéines extracellulaires de l’isolat P80 

de Verticillium sur gel de polyacrylamide (10%) colorée au bleu de 

Coomassie. 

De gauche à droite : 

S : protéines standard de P.M. 

F0 : protéines du filtrat de culture de Verticillium développé sur milieu 

Czapeck dépouvu de NaCl 

F2 ; F4 ; F6 et F8 : protéines des filtrats de culture de Verticillium 

développé sur milieux enrichis respectivement avec 2 ; 4 ; 6 et 8g/l de NaCl

139 


Cette étude biochimique nous a permis de constater l’effet de la salinité sur les 

quantités de protéines extracellulaires produites in vitro par l’isolat P80 de 

Verticillium dans le milieu de culture amendé de NaCl. Les taux des protéines 

précipitées ont connu une augmentation en fonction de la concentration saline 

avec un optimum pour les concentrations comprises entre 2 et 6g/l. 

L’excrétion des protéines par Verticillium est donc influencée par la composition 

saline du milieu de culture. Elle peut aussi dépendre de la nature de la substance 

carbonée ou de la présence de substances de croissance (Chaib, 1987). 

Les quantités de protéines extracellulaires sont corrélées avec la virulence du 

champignon. En effet, Chaib, (1987), a montré des différences dans les taux de 

protéines secrétées par des isolats de Verticillium albo-atrum selon leur pouvoir 

pathogène vis-à-vis de la tomate. Les souches pathogènes produisant 10 fois plus 

de protéines que les souches non pathogènes. Des résultats similaires ont été 

décrits par Saksirirat & Hoppe (1991). Ces auteurs ont rapporté des différences 

dans les niveaux des protéines synthétisées in vitro par Verticillium lecanii et 

Verticillium psalliotea. 

En se basant sur ces données, on peut supposer que l’augmentation de la quantité 

de protéines excrétées par Verticillium en présence des concentrations de sel 

favorables serait en rapport avec une plus grande virulence du champignon. 

Parallèlement aux changements des teneurs en protéines, une variation du pH 

final des filtrats de culture a été notée sensiblement aux mêmes concentrations 

salines. Le pH, proche de la neutralité en absence de sel, a varié dans le sens d’une 

légère alcalinité pour devenir assez acide en présence de 8g/l (Tableau 10). 

Les changements du pH indiquent une diversité de la production métabolique de 

Verticillium sous régime riche en NaCl. Cette suggestion a été confirmée par 

l’analyse électrophorétique des extraits protéiques des filtrats de culture à 

différentes concentrations de sel. L’effet du sel s’est manifesté sur les profils 

d’électrophorèse des protéines extracellulaires par des changements qui ont 

touché :

140 

- l’abondance des protéines majeures de l’isolat P80, de PM à 63 ; 73 et 76 

Kda, présentes sur tous les profils et qui se sont mieux exprimées aux 

concentrations élevées de l’expérimentation ; 

- l’apparition de novo de deux polypeptides de PM assez éloignés, l’un à 

40 Kda et l’autre à 116 Kda ; 

- la disparition de la protéine 45 Kda des profils correspondants aux 

concentrations de 4 ; 6 et 8g/l de NaCl. 

Les modifications touchant aussi bien la quantité que la qualité des protéines 

excrétées en cours de culture peuvent être rapprochées de nos observations 

relatives à l’augmentation de la production de toxines et d’enzymes cellulolytiques 

par Verticillium en présence de sel (Regragui et al., 2003). Il faut cependant être 

prudent avant d’établir ce rapprochement. Une étude détaillée des profils 

électrophorétiques des protéines toxiques purifiées s’avère nécessaire. De même, 

l’isolement de la carboxyméthylcellulase dont l’augmentation de l’activité a été 

rapportée précédemment, et la détermination de son PM est utile pour une 

meilleure interprétation de ces résultats. 

Les résultats de cette étude biochimique montrent que le facteur sel semble exercer 

une pression sur l’agent pathogène qui se manifeste par une action sur le 

métabolisme azoté du champignon, notamment la synthèse des protéines dont le 

profil est modifié avec la disparition d’une protéine et l’apparition de novo de deux 

autres. 

Le rôle joué par ces nouvelles molécules dans l’augmentation de la pathogénèse du 

champignon vis-à-vis de la tomate en conditions salines reste à déterminer. La 

purification des bandes nouvelles et l’étude de leur action sur la plante pourrait 

éclaircir ce point. 

Devant l’effet promoteur de la salinité sur les mécanismes d’action du champignon 

et ses conséquence sur le développement de la maladie, le choix d’une méthode de 

lutte adéquate aux conditions de l’environnement s’avère nécessaire.

141 

Chapitre 5 : Influence de la salinité sur l’antagonisme 

microbien vis-à-vis de Verticillium albo-atrum et sur la 

bioprotection des tomates contre la verticilliose 

Introduction 

Verticillium albo-atrum, forme à microsclérotes est le principal agent des 

flétrissements vasculaires de différentes cultures au Maroc, notamment les cultures 

d’intérêt économique comme la tomate, l’aubergine et l’olivier. 

La verticilliose cause chez la tomate de grandes pertes. Une fois les symptômes 

apparaissent sur la plante, il n’y a pas de traitement efficace pour contrôler l’agent 

pathogène. 

Plusieurs traitements préventifs sont préconisés pour lutter contre la maladie. 

La lutte chimique contre Verticillium a connu beaucoup de succès. Les fongicides à 

l’instar du benlate, du propiconazole et du paclobutrazol inhibent la croissance 

mycélienne du parasite et réduisent significativement la sévérité de la maladie en 

diminuant la population verticillienne à l’intérieur des tiges (Erwin, 1981 ; Al 

Figuigui, 1992). Néanmoins, les traitements chimiques ne constituent pas le remède 

idéal compte tenu des problèmes inhérents à l’environnement, à la toxicité des 

produits chimiques vis-à-vis de l’Homme et des animaux (Benyacoub, 1993) et, à la 

possibilité d’apparition de pathotypes résistants aux fongicides. 

La lutte génétique est l’une des méthodes les plus efficaces pour lutter contre la 

verticilliose. L’utilisation des variétés possédant le gène Ve de la résistance a pu 

réduire l’incidence de la maladie due à la race 1 de Verticillium. Cependant, 

l’apparition de la race 2 limite l’efficacité de cette méthode (Besri et al., 1984 ; 

Tjamos, 1984). 

Les rotations culturales avec des plantes non hôtes, essentiellement des céréales, ont 

été souvent utilisées. Leur rôle dans la diminution des propagules dans le sol a été 

rapporté par Pullman & Devay, (1981). Cependant, leur efficacité est très discutée en 

raison du mode de conservation du champignon dans le sol sous forme de 

microsclérotes. Ces derniers ont une longévité de plusieurs années et peuvent 

contaminer les plantes adventices non hôtes, ce qui contribue à l’augmentation de 

l’inoculum dans le sol.

142 

La solarization des sols est une méthode efficace dans la réduction de l’inoculum de 

Verticillium. Elle consiste à couvrir le sol avec des bâches en polyéthylène pendant la 

période la plus chaude de l’année, de juin à août au Maroc. Ainsi, les organes de 

conservation présents jusqu’à une profondeur de 30cm sont soumis à des 

températures pouvant atteindre 50°C. Les travaux de Tjamos & Mabrynaki (1990) sur 

la fusariose du melon et de Bourdos & Skoudridakis (1996) sur la verticilliose de la 

tomate démontrent l’efficacité de la méthode dans la lutte contre ces champignons 

vasculaires telluriques. 

La lutte biologique des plantes contre la verticilliose a retenu l’attention de plusieurs 

chercheurs durant les deux dernières décennies. Deux procédés de lutte ont été 

utilisés ; la prémunition et l’application d’organismes antagonistes à Verticillium. La 

prémunition correspond à l’état de protection que confère à la plante une souche 

hypovirulente dite souche prémunisante ou « inductrice » contre l’infection 

ultérieure par une seconde souche virulente dite souche « d’épreuve ». La résistance 

acquise par prémunition contre Verticillium a été obtenue sur plusieurs cultures 

susceptibles notamment le coton (Schnathorst & Mathre, 1966), la menthe (Mellouk 

& Horner, 1975), l’aubergine (Marois, 1982), la tomate, (Matta & Garibaldi, 1977 ; 

Regragui et al., 1989), le piment (Douira, 1989) et quelques plantes fourragères (El 

Aissami, 1999). Bien que dans le cas de la verticilliose, la prémunition a donné des 

résultats parfois spectaculaires, son utilisation dans la pratique agricole reste difficile. 

Le recours aux microorganismes antagonistes reste une voie plus prometteuse et qui 

connaît actuellement un grand développement. 

Plusieurs travaux ont été entrepris pour la sélection des antagonistes au Verticillium 

parmi la flore microbienne du sol afin de les utiliser comme agents potentiels du 

contrôle biologique contre la verticilliose. Des résultats positifs ont été obtenus, sur 

plusieurs binômes d’expérimentation, avec les champignons du genre Talaromyces, 

Trichoderma, Penicillium, Fusarium, Gliocladium, et les bactéries du genre Bacillus, 

Sinorhizobium et Serratia. Ces microorganismes se sont révélés être les plus 

performants à supprimer Verticillium (Matta & Garibaldi, 1977 ; Hall & Scheiber, 

1984 ; Millar et al., 1984 ; Henni, 1987 ; Kim et al., 1988 ; Berg et al., 1999 ; El 

Aissami, 1999 ; D’Ercole et al., 2000 ; Larena et al., 2003).

143 

Les divers antagonistes semblent agir pour certains par hyperparasitisme et/ou par 

compétition pour l’occupation des sites d’infection et pour d’autres par leur capacité à 

produire des antibiotiques. Leur rôle dans l’induction de la résistance systémique a 

été également mis en évidence (Howell et al., 2000). 

La condition sine qua non pour que les organismes bénéfiques puissent exercer leur 

pouvoir antagoniste attendu est leur adaptation rapide dans l’environnement dans 

lequel ils sont incorporés. En effet, certains facteurs de l’environnement peuvent 

inhiber le développement des organismes antagonistes et favoriser par conséquent la 

prolifération des agents pathogènes (Cook, 1973 ; Lewis & Papavizas, 1987). Dans ce 

sens, il a été établi que la suppression de plusieurs maladies par l’introduction 

d’agents bénéfiques, auteurs du contrôle biologique, est influencée par de nombreux 

facteurs abiotiques comme la température, l’humidité du sol et la contribution en 

général de l’environnement dans l’expression de la maladie et des facteurs biotiques 

comme la dose de l’agent appliqué, la densité de l’inoculum du pathogène et la 

présence des nématodes (Harman et al., 1981 ; Bea & Knudsen, 2000 ; Blanca et al., 

2001 ; Blanca et al., 2001 ; Larkin & Fravel, 2002). 

Il apparaît ainsi qu’il est essentiel de connaître comment le contrôle biologique peut 

être affecté par les changements des conditions de l’environnement avant qu’il ne soit 

appliqué dans la pratique agricole. En effet, aucun agent de la lutte biologique ne peut 

être performant sans que les conditions physiques et biologiques de l’environnement 

ne lui soient adéquates. Et dans la plupart des cas, ces conditions ne sont pas 

suffisamment définies. 

A la lumière de cet aperçu bibliographique et compte tenu de nos résultats 

précédents, nous nous sommes demandés si la salinité des sols aurait des 

conséquences sur l’antagonisme microbien à l’encontre de Verticillium d’autant plus 

que la salinité semble propice au développement de ce parasite et à l’expression de 

son pouvoir pathogène. Pour réponde à cette question, ce travail a eu pour 

objectifs d’étudier successivement, l’effet de la salinité sur : 

- L’antagonisme in vitro de quelques microorganismes bénéfiques vis-à-vis 

de l’isolat P80 de Verticillium

144 

- L’efficacité des modes d’action de Trichoderma harzianum choisi pour son 

fort pouvoir antagoniste 

- la bioprotection des tomates contre la verticilliose par l’utilisation de 

Trichoderma harzianum. 

I. Effet de la salinité sur l’antagonisme in vitro de quelques 

microorganismes bénéfiques du sol vis-à-vis de Verticillium 

albo-atrum 

Introduction 

Durant ces dernières années, et dans le but de mettre au point un procédé de lutte 

contre la verticilliose d’une manière économique et sans inconvénients pour 

l’environnement, les phytopathologistes ont isolé de la rhizosphère un grand 

nombre de champignons et de bactéries antagonistes au Verticillium. 

Talaromyces flavus est parmi les microorganismes bénéfiques les plus utilisés 

dans la bioprotection des plantes contre Verticillium. Cet antagoniste réduit 

l’incidence de la maladie chez l’aubergine en affectant la survie ou la vigueur des 

microsclérotes (Marois et al ; 1982). Il semble agir en secrétant une enzyme, la 

glucose oxydase, qui serait responsable de l’inhibition de la germination des 

microsclérotes (Fravel, 1996). 

Les espèces de Trichoderma ont été également utilisées en tant qu’ antagonistes 

contre plusieurs pathogènes telluriques parmi eux Verticillium. Leur action sur ce 

champignon s’exerce aussi bien in vitro qu’in vivo (Henni, 1987 ; D’Ercole et al., 

2000). 

Les souches non pathogènes de Fusarium oxysporum ont été utilisées avec succès 

pour lutter contre les souches pathogènes du même champignon ou de 

Verticillium (Matta & Garibaldi, 1977 ; Wymore & Baker, 1982 ). Leur rôle dans 

l’induction de la résistance contre les souches pathogènes a été démontré par 

Fuchs et al., (1997).

145 

Parmi les bactéries isolées de la rhizosphère, les espèces du genre Bacillus et 

Rhizobium sp ont été sélectionnées pour leur pouvoir antagoniste envers 

Verticillium. L’évaluation in vitro de leur habilité à former des zones antagonistes 

autour des colonies du pathogène démontre que ces bactéries agissent par 

antibiose. Elles réussissent également à coloniser les tissus vasculaires de l’hôte en 

assurant sa protection (Hall et al., 1986 ; El Aissami, 1999). 

L’objectif de ce chapitre est d’examiner dans quelle mesure la salinité du milieu 

peut-elle influencer l’activité antagoniste de quelques microorganismes à 

l’encontre de Verticillium. Cette étude, menée in vitro, nous permettra de 

sélectionner l’organisme antagoniste le plus performant en condition saline. 


1. Choix des microorganismes antagonistes 

Les antagonistes testés correspondent aux microorganismes bénéfiques cités 

préférentiellement dans la bibliographie comme auxilliaires de la lutte biologique 

contre Verticillium. Ils regroupent quatre champignons saprophytes et une 

rhizobactérie. 

1.1. Penicillium sp 

La souche de Penicillium sp est issue de la mycothèque du laboratoire de 

Botanique de Rabat. Elle a été isolée du raisin de table par Benkhemmar et al., 

1993). 

1.2. Fusarium oxysporum 

La souche non pathogène de F. oxysporum utilisée nous a été fournie par le 

laboratoire de Biotechnologie et Pathologie de la Faculté des Sciences et 

Techniques de Tanger. Elle a été isolée d’un sol de la région de Marchouch. Testée 

dans notre laboratoire, cette souche ne montre aucun signe de pathogénie vis-à-vis 

de la tomate Marmande. En culture pure sur milieu PDA, la culture présente un 

mycélium ras avec des secteurs cotonneux, partiellement mauve.

146 

1.3. Talaromyces flavus 

Ce champignon antagoniste a été le plus utilisé dans le contrôle biologique contre 

Verticillium. La souche testée a été isolée des eaux brutes de la retenue du Barrage 

SMBA à Rabat dans le cadre du projet réalisé par l’équipe du laboratoire de 

Botanique sur les champignons aquatiques (Publication en cours). 

1.4. Trichoderma harzianum 

Trichoderma harzianum est un puissant antagoniste qui a été largement utilisé 

pour lutter contre plusieurs agents phytopathogènes. La souche testée nous a été 

fournie par le Laboratoire de Pathologie Végétale de l’Université Pierre et Marie 

Curie (Paris). 

1.5. Bacillus sp 

Au cours de nos expériences préliminaires sur la recherche d’antagonistes à 

Verticillium, plusieurs souches de rhizobactéries ont été testées. Nous avons 

retenu une seule souche qui a montré un développement favorable sur milieu PDA 

en présence de NaCl. Elle a été purifiée et identifiée comme appartenant au genre 

Bacillus sp. 

2. Protocole des cultures en confrontation 

Les essais de confrontation sont conduites en boîtes de Pétri sur milieu PDA 

enrichi en NaCl aux concentrations de 0 ; 2 ; 4 ; 6 ; 8 ; et 10g/l. L’isolat P80 de 

Verticillium et chacun des microorganismes antagonistes sont ensemencés en 

même temps dans la même boîte. Les deux explants sont séparés de 4 cm. 

L’incubation est faite à 24°C et à l’obscurité. 

3. Estimation de l’effet antagoniste 

L’activité antagoniste exercée par les différents champignons antagonistes testés 

est évaluée, après 7 ou 12 jours de culture, par le pourcentage d’inhibition de la 

croissance diamètrale (PICD) du pathogène confronté à l’antagoniste par rapport

147 

aux témoins non confrontés soumis à la même concentration saline. Le 

pourcentage d’inhibition est calculé selon la formule suivante : 

PICD = Dt – Dc x 100 

Dt 

Dt: diamètre moyen des colonies témoins non confrontées 

Dc : diamètre des colonies confrontées à l’antagoniste 

Dans le cas des confrontations avec la bactérie, l’effet antagoniste est évalué par le 

pourcentage d’inhibition de la croissance radiale (PICR) des colonies inspiré de la 

méthode décrite Michael & Nelson (1972). Il est calculée comme suit : 

PICR = Re – Rr x 100 

Re 

Re: rayon de la colonie le plus loin de la bactérie 

Rr : rayon de la colonie le plus rapproché de la bactérie 

Les résultats, moyennes de six répétitions par organismes antagonistes et par 

concentration saline, sont comparés par l’analyse des variances selon le test de 

Newman-Keuls. 

B. Résultats 

1. Effets de la salinité sur la compétitivité in vitro de quelques 

microorganismes fongiques avec Verticillium 

1.1. Confrontations Penicillium sp-Verticillium 

Les résultats illustrés sur la figure 34A et la planche 10 montrent que la 

confrontation des deux microorganismes dans la même boîte de Pétri contenant 

du milieu PDA dépourvu de sel, a entraîné une réduction de la croissance 

diamétrale de l’isolat P80 de Verticillium. Le pourcentage d’inhibition est de 

l’ordre de 40.73% par rapport aux témoins non confrontés. Cette action

148 

Figure 34. Effet de la salinité sur l’activité antagoniste de Penicillium 

sp., de Fusarium oxysporum et de Talaromyces flavus sur la 

croissance mycélienne de l’isolat P80 de Verticillium 

inhibition de la croissance 

mycélienne de 

Verticillium en % 

80 

70 

60 

50 

40 

30 

20 

A, Penicillium sp 

0 2 4 6 8 10 

concentration du milieu en NaCl (g/l) 

inhibition de la croissance 

mycélienne de 


45 

40 

35 

30 

25 

20 

15 

10 

B, Fusarium oxysporum 

0 2 4 6 8 10 

concentration du milieu de culture en NaCl (g/l) 

C, Talaromyces flavus 

Inhibition de la croissance 

radiale de Verticillium en % 

70 

60 

50 

40 

30 

20 

10 

0 2 4 6 8 10 

concentration du milieu de culture en NaCl (g/l)

149 

antagoniste de Penicillium est également observée en présence de toutes les 

concentrations salines de l’expérimentation. Sous 2 et 4g/l de NaCl, l’effet 

inhibiteur de la croissance augmente et atteint respectivement 50.42% et 52.86%. 

De 6 à 10g/l, l’inhibition de la croissance se stabilise pour atteindre des valeurs de 

l’ordre de 60% . 

1.2. Confrontation Fusarium oxysporum-Verticillium 

La culture en duel des deux champignons sur un même milieu nutritif enrichi en 

NaCl a entraîné après une semaine d’incubation une diminution de la croissance 

mycélienne des colonies de Verticillium par rapport aux colonies témoins non 

confrontées (figure 34B). L’inhibition de la croissance, relativement faible en absence 

de sel est de l’ordre de 26.34%. Elle augmente avec la salinité du milieu pour 

atteindre 36.22% et 41.75% respectivement en présence de 6 et 10g/l de NaCl. Sous 

cette dernière concentration saline, le thalle de Verticillium est presque entièrement 

envahi par le mycélium de Fusarium oxysporum (Planche 11). 

1.3. Confrontation Talaromyces flavus-Verticillium 

Après 12 jours d’incubation, les résultats de la confrontation de l’isolat P80 de 

Verticillium avec la souche de Talaromyces flavus dans le même milieu de culture 

ont été reportés sur la figure 34C. Ils montrent qu’en absence de sel, l’effet 

antagoniste de Talaromyces a provoqué une inhibition de la croissance mycélienne 

de 20.95%. Dès que le milieu de culture est additionné de sel, l’effet antagoniste 

augmente. A 2g/l, le pourcentage d’inhibition représente le double de celui exercé en 

absence de sel. L’action antagoniste sur la croissance est optimale à 4g/l et atteint 

57.77% puis décline sous les concentrations salines élevées de l’expérience. Toutefois, 

la réduction de la croissance de Verticillium sous ces concentrations est nettement 

plus importante que celle des témoins confrontés à Talaromyces sur milieu dépourvu 

de sel (planche 12). 

1.4. Confrontation Trichoderma-Verticillium 

La confrontation de la souche de Trichoderma avec Verticillium dans le même 

milieu nutritif a provoqué, après une semaine de culture, une importante

150 

Planche 10. Effet de la salinité sur les confrontations de l’isolat P80 de 

Verticillium albo-atrum et de Penicillium sp après 12 jours 


Culture de Verticillium seul 

[0 ; 4 ; 8] : concentrations du milieu de culture en NaCl (g/l) 

Cultures de Verticillium confronté avec Penicillium sp 

sur milieux enrichis avec 0 ; 2 ; 4 ; 6 ; 8 et 10g/l de NaCl.

151 

Planche 11. Effet de la salinité du milieu sur les confrontations de 

l’isolat P80 de Verticillium albo-atrum et d’une souche non pathogène 

de Fusarium oxysporum après 12 jours d’incubation 

- En haut : isolat de Verticillium cultivé seul en présence de 0 et 10g/l 

de NaCl 

- En bas : isolat de Verticillium confronté avec Fusarium oxysporum 

sur milieu enrichi avec 0 et 10g/l de NaCl

152 


Verticillium albo-atrum et d’une souche de Talaromyces flavus apès 

12 jours d’incubation 

A. Absence de NaCl dans le milieu de culture 

B. Présence de 4g/l de NaCl 

A gauche : culture de Verticillium seul 

A droite, culture de Verticillium confronté avec Talaromyces flavus

153 

inhibition de la croissance diamétrale du pathogène aussi bien en absence de sel 

qu’en présence des concentrations de 2 et 4 g/l de NaCl (Figure 35). Le 

pourcentage d’inhibition étant de l’ordre de 65.57% pour les confrontations 

témoins sans sel. Lorsque la concentration saline du milieu augmente au delà de 

6g/l, on note une diminution significative de l’action compétitive exercée par la 

présence de Trichoderma ; le pourcentage d’inhibition de la croissance, quoique 

plus faible que celui provoqué par les autres concentrations de sel, est encore très 

appréciable et atteint 47.83% à 10g/l. 

2. Effet de la salinité sur l’antagonisme de Bacillus sp avec 


La souche de Bacillus a été repiquée 4 jours avant Verticillium. Après l’exposition du 

champignon à l’action de la bactérie, une inhibition de la croissance radiale du 

champignon a été constatée. Elle s’est manifestée par la réduction du rayon de la 

colonie se trouvant du coté de la bactérie par rapport au rayon éloigné. L’estimation 

de cette inhibition en fonction de la salinité est reportée sur la figure 36. En absence 

de NaCl dans le milieu de culture, l’inhibition de la croissance radiale est de 22.53%. 

En présence de 2g/l de sel, le pourcentage d’inhibition de la croissance ne diffère pas 

de celui des témoins sans sel. Cependant, à partir de 4g/l de NaCl, l’effet antagoniste 

de Bacillus sp augmente et provoque à titre d’exemple une inhibition de la croissance 

de 31.33% et 41.80% respectivement sous les concentrations salines de 6 et 10g/l 

(planche13). 


A l’issue de cette étude in vitro, il ressort que les cinq microorganismes bénéfiques 

testés montrent tous une activité antagoniste vis-à-vis de l’isolat P80 de 

Verticillium. La confrontation de chacun d’eux avec cet isolat a provoqué une 

inhibition de la croissance mycélienne de cet agent pathogène. La réduction de la 

croissance reste un caractère fiable pour estimer l’antagonisme microbien envers 

les organismes fongiques (Hall & Schreiber, 1984, El Abyad et al., 1996). Les 

résultats obtenus correspondent aux diverses observations d’autres auteurs qui ont

154 

Figure 35. Influence de la salinité sur l'activité antagoniste 

de Trichoderma harzianum en confrontation directe avec 

l'isolat P80 de Verticillium 

Inhibition de la croissance mycélienne 

de Verticillium en % 

80 

70 

60 

50 

40 

30 

20 

0 2 4 6 8 10 

Concentrations du milieu de culture en NaCl (g/l) 

Figure 36. Influence de la salinité sur l'activité antagoniste 

de Bacillus sp. sur la croissance radiale de l'isolat P80 de 


Inhibition de la croissance radiale de 


60 

50 

40 

30 

20 

0 2 4 6 8 10 

Concentrations du milieu de culture en NaCl (g/l)

155 


Verticillium albo-atrum et d’une souche de Bacillus sp après 12 jours 


A. Cuture de Verticillium albo-atrum seul sur milieu sans sel 

B. Culture de Verticillium albo-atrum confronté avec Bacillus sp sur 

milieux enrichis avec 0 ; 2 ; 4 ; 6 ; 8 et 10g/l de NaCl.

156 

mis en évidence l’effet antagoniste positif de ces microorganismes bénéfiques dans 

la suppression du Verticillium, principalement avec Talaromyces flavus (Kim et 

al., 1988 ; Fravel, 1996 ), Trichoderma harzianum (Henni, 1987 ; D’Ercole et al., 

2000), Penicillium oxalicum (Larena et al., 2003) et Bacillus subtilis (Hall et al., 

1986). L’addition de chlorure de sodium dans le milieu de culture a entraîné une 

modification dans l’expression de l’action inhibitrice des différentes souches 

antagonistes utilisées. Ainsi, pour les souches de Fusarium oxysporum, 

Penicillium sp et Bacillus sp, le sel semble favoriser leur pouvoir antagoniste à 

l’encontre de Verticillium puisque les pourcentages d’inhibition de la croissance du 

pathogène ont montré une hausse progressive en fonction de la salinité. En 

revanche, l’action antagoniste de la souche de Talaromyces flavus augmente avec 

la salinité jusqu'à la concentration 4g/l pour laquelle son effet inhibiteur est 

optimal puis elle décline. L’action inhibitrice de la souche de Trichoderma 

harzianum , déjà très importante en absence de sel, n’a pas été stimulée par le sel 

comme c’est le cas pour les autres microorganismes antagonistes. Néanmoins, 

l’effet compétitif obtenu en absence de sel reste stable jusqu’à la concentration de 

6g/l pour laquelle le pourcentage d’inhibition baisse significativement. 

Ces résultats obtenus in vitro laissent prévoir une influence positive de la salinité 

sur l’antagonisme microbien vis-à-vis de Verticillium in vivo. 

D’autres facteurs abiotiques sont capables d’influencer l’efficacité des agents 

antagonistes protecteurs comme la température et l’humidité qui constituent 

plutôt des facteurs limitant l’expression de l’activité antagoniste. Blanca et al., 

(2001) ont montré en effet, que la suppression de la fusariose du pois-chiche par 

Pseudomonas fluorescens est observée seulement à 20°C et 30°C mais pas à 25°C, 

température optimale du développement de la maladie. De même, Köhl & 

Molhoeck, (2001) ont montré que le succès du contrôle biologique de Botrytis 

cinera par l’antagoniste Ulocladium atrum est conditionné par le potentiel 

hydrique ; l’effet compétitif de cet antagoniste avec Botrytis est maximal à –7PMa 

et diminue avec l’augmentation du potentiel hydrique. 

L’intérêt de ce travail est de montrer que la présence de sel, dans le milieu aux 

concentrations rappelant le degré de salinité des sols marocains, n’affecte pas

157 

l’activité des souches antagonistes de Verticillium. Les concentrations de 2 et 4g/l 

semblent même la stimuler. Cette action favorable du sel serait liée à la bonne 

tolérance à la salinité des microorganismes bénéfiques testés. Cette suggestion est 

réconfortée par les travaux récemment conduits par Rangarajan et al. (2003). Ces 

auteurs ont montré que l’action antagoniste de trois souches de Pseudomonas sp 

vis-à-vis de deux pathogènes du riz, Xanthomonas oryzae et Rhizoctonia solani, 

est très efficace en présence de NaCl dans les rhizières . 

Dans notre contexte expérimental, l’action antagoniste la plus importante à 

l’encontre de Verticillium correspond à celle exercée par Trichoderma harzianum. 

Ce dernier s’est montré très compétitif vis-à-vis de Verticillium. Il pourrait être 

utilisé comme agent de contrôle biologique capable de réduire la sévérité de la 

verticilliose aussi bien en absence qu’en présence des concentrations modérées de 

sel rappelant celles des sols salins marocains. Néanmoins, une bonne connaissance 

de l’influence de la salinité sur le développement de cet antagoniste et sur ses 

différents modes d’action est nécessaire pour définir une bonne stratégie de lutte. 

II. Influence de la salinité sur l’antagonisme in vitro de 

Trichoderma harzianum vis-à-vis de l’isolat P80 de 


Introduction 

Le champignon Trichoderma harzianum est un puissant antagoniste qui a été 

largement utilisé dans les programmes de lutte biologique contre les champignons 

phytopathogènes du sol. Effectivement, cet antagoniste s’est montré très efficace 

dans la lutte contre Rhizoctonia solani (Elad et al., 1981 et Camporota, 1985), 

Botrytis (Eden et al., 1996 ; Harman et al., 1996), Pythium (Lifshitz et al., 1986 ; 

Besnard & Davet, 1993 ; Howell, 2002), Fusarium (Datnoff et al., 1995 ; Haggag & 

Amin, 2001, Essalmani & Lahlou, 2002 ), Phytophthora nicotianae (Stefanova et 

al., 1999), et Verticillium (D’Ercole et al., 2000 ; Regragui & Lahlou, 2005) et 

autres. 

Les modes d’action antagoniste de Trichoderma harzianum sont bien connus; 

compétition, mycoparasitisme, production de métabolites antifongiques, (Denis &

158 

Webster 1971 a et b ; Claydon et al., 1987) et d’enzymes cellulolytiques et 

chinolytiques (Lorito et al., 1993). Par ailleurs, certaines souches de Trichoderma 

semblent exercer une action stimulatrice de la croissance des plantes en l’absence 

de tout agent pathogène (Windham et al., 1986 ; Ozbay & Newman, 2004). 

Cependant, Eastburn & Butler, (1991) ont montré que les capacités saprophytiques 

de Trichoderma harzianum peuvent être affectées par des facteurs de 

l’environnement comme la température, l’humidité et le pH du sol. A titre 

d’exemple, il a été établi que les températures froides (10°C) ou chaudes (37°C) 

suppriment l’efficacité de Trichoderma hamatum contre Pythium alors que le pH 

acide favorise l’activité antagoniste de Trichoderma sp dans la protection des 

semences contre R. solani (Harman et al., 1981). 

L’objectif de ce chapitre est d’examiner l’influence de la salinité du milieu sur les 

capacités antagonistes d’une souche de Trichoderma harzianum vis-à-vis de 

Verticillium de la tomate. Dans cette optique, nous proposons d’étudier in vitro la 

tolérance au sel de cet antagoniste et d’examiner l’impact de la salinité sur 

l’efficacité de ses différents modes d’action en vue de son utilisation in vivo dans le 

contrôle biologique de la verticilliose de la tomate dans des conditions salines de 

culture. 


1. Le matériel fongique 

1.1. Le pathogène 

Il s’agit de l’isolat P80 de Verticillium albo-atrum, race 2, sélectionné pour son 

fort pouvoir pathogène vis-à-vis de la tomate var Marmande (Lahlou & Boisson, 

1981). Les cultures sont conduites sur milieu PDA (Difco) enrichi en NaCl à 

différentes concentrations allant de 0 à 8g/l ou de 0 à 16g/l selon l’expérience. 

1.2. L’antagoniste 

L’origine et les caractéristiques de la souche de Trichoderma harzianum testée ont 

été décrites au chapitre précédent. Les cultures en boîtes de Pétri sont conduites

159 

sur milieu PDA et les cultures liquides sur milieu Malt à 2%. Les deux milieux sont 

enrichis des mêmes concentrations en sel pré-citées. 

L’effet du sel sur le développement de T. harzianum est évalué par : 

- La croissance pondérale estimée par le poids sec du mycélium. Ce 

dernier est recueilli après filtration sur mousseline des cultures liquides 

âgées de deux semaines, puis lavé deux fois avant d’être mis à sécher à 

80°C pendant une nuit. 

- Le taux de sporulation déterminé après comptage des spores contenues 

dans les filtrats de cultures sur cellule de Malassez. 

Toutes les cultures sont incubées à l’obscurité et à 25 + 1°C. 

2. Mesure du phénomène d’antagonisme 

2.1. Capacité de colonisation 

Dans des boîtes de Pétri de 90 mm de diamètre contenant 25ml de milieu, on place 

deux explants séparés de 40 mm, provenant de cultures jeunes des deux 

champignons. La capacité de colonisation de Trichoderma est déterminée par le 

rapport C défini par Camporota (1985) comme suit : 

C = DT/DE x 100 

DT : distance en mm parcourue par le front de croissance de Trichoderma sur l’axe 

reliant les deux explants au bout de trois jours 

DE : distance séparant les deux explants. 

2.2. Antagonisme par antibiose 

2.2.1. Action des substances volatiles 

Des boîtes de Pétri contenant du milieu PDA additionné de sel à différentes 

concentrations sont ensemencées par une bouture de 3mm de diamètre provenant 

d’une culture jeune de Trichoderma harzianum. Après quatre jours d’incubation, 

le couvercle des boîtes est rapidement retiré et remplacé par un fond de boîte 

contenant du milieu PDA portant un explant d’une préculture de Verticillium. Les 

fonds sont rassemblés et entourés avec une bande de parafilm de manière à

160 

constituer une enceinte étanche. Le pathogène est ainsi exposé aux gaz émis par 

Trichoderma. Les cultures témoins ne sont pas confrontées à Trichoderma. 

L’action antagoniste des gaz est estimée par l’inhibition de la croissance diamétrale 

en % des thalles exposés par rapport aux témoins selon la formule suivante : 

I = Dt –Di x 100 

Dt 

où Dt est le diamètre moyen des cultures témoins non confrontés et Di le diamètre 

du thalle exposé aux gaz émis par Trichoderma. 

2.2.2. Action des substances non volatiles 

* Action sur la croissance mycélienne 

Des cultures de Trichoderma sont réalisées sur milieu enrichi en NaCl et recouvert 

24 heures au préalable d’une feuille de cellophane stérile. Après six jours de 

culture, le thalle de Trichoderma est récupéré en prélevant la cellophane sousjacente. 

Des explants d’une culture jeune de Verticillium sont alors déposés sur la 

surface des milieux ayant porté Trichoderma. L’effet antagoniste des substances 

non volatiles est estimé par l’inhibition de la croissance diamétrale des colonies du 

pathogène par rapport aux témoins non exposés. 

* Action sur la sclérogénèse 

L’abondance des microsclérotes est évaluée sur le revers des cultures par 

l’estimation du diamètre moyen de la zone pigmentée au bout de quatre semaines 

de culture. 

Les résultats de chaque test, moyennes de huit répétitions, sont comparés par 

l’analyse des variances au seuil de probabilité de 5% selon le test de Newman- 

Keuls.

161 

B. Résultats 

1. Influence de la salinité du milieu sur le développement de T. 

harzianum 

1.1. Morphologie des cultures 

Les cultures âgées de 7 jours conduites sur milieu sans sel montrent un thalle 

hyalin plus ou moins floconneux avec une zone sporogène de couleur verte, 

localisée vers la périphérie de la boîte de Pétri. 

Sur les milieux enrichis en sel, la zone verte sporogène devient moins dense en 

corrélation avec les concentrations croissantes de sel. A 8g/l, on note l’absence 

totale de la zone sporogène verte; les boîtes sont envahies par un mycélium 

blanchâtre (Planche 14). 

1.2. Poids sec du mycélium 

La croissance mycélienne des cultures de T. harzianum développées sur milieu 

enrichi en sel ne diffère pas de celle des témoins sans sel et ceci pour les 

concentrations comprises entre 2 et 6g/l (Figure 37). Une baisse légère mais 

significative du poids sec du mycélium est enregistrée à 8g/l. 

1.3. Taux de sporulation 

Les filtrats des cultures ayant servi pour l’estimation pondérale du mycélium de 

Trichoderma ont été utilisés pour calculer le taux de sporulation en fonction de la 

salinité du milieu. Les résultats (Figure 38) montrent que la densité en spores 

diminue progressivement avec l’augmentation de la salinité. La sporulation est très 

faible à 8g/l; elle est de l’ordre de 0.7 x10 6 spores ml. -1 soit une inhibition de 95 % 

par rapport aux cultures témoins sans sel. 

2. Influence de la salinité sur l’expression de l’activité antagoniste 

de T. harzianum vis-à-vis de Verticillium. 

2.1. Antagonisme par compétition

162 

Planche 14. Effet de la salinité sur la morphologie des cultures de 

Trichoderma harzianum après sept jours d’incubation 

[0 ; 8 ;] : concentration saline du milieu de culture en g/l de NaCl

163 

Figure 37. Effet de la salinité sur la croissance pondérale de 

Trichoderma harzianum après 15 jours de culture 

250 

Poids sec du mycélium 

deT.harzianum ( mg) 

200 

150 

100 

50 

0 

0 2 4 6 8 


Figure 38. Effet de la salinité sur l'intensité de la sporulation 

de T. harzianum après 15 jours de culture 

Densité de spores x10 6 spores ml/ de 

T. harzianum 

18 

16 

14 

12 

10 

8 

6 

4 

2 

0 

0 2 4 6 8 

Concentrations du milieu de culture en NaCl (g/l)

164 

La capacité de colonisation C, exprimée en %, est la résultante de la compétitivité 

entre Trichoderma et Verticillium pour l’occupation de l’espace. 

Après trois jours de culture, Trichoderma montre un fort pouvoir de colonisation 

de l’espace aussi bien en absence qu’ en présence de sel (Figure 39). Notons 

néanmoins une baisse significative du pourcentage de colonisation à partir de 6g/l 

de NaCl, mais les valeurs de C demeurent élevées, de l’ordre de 80%, témoignant 

d’une importante capacité de l’antagoniste à coloniser les thalles de Verticillium en 

présence des concentrations élevées de sel utilisées dans cet essai. 

Les confrontations ont été ensuite examinées pour une description morphologique 

des cultures alors âgées de 10 jours. En absence de sel, le thalle de Verticillium est 

entièrement envahi par le mycélium de Trichoderma. Les spores de couleur verte 

recouvrent la presque totalité de la boite de Pétri. En présence de sel, la coloration 

verte n’est visible que sur la moitié de la boite portant la bouture de Trichoderma. 

Ce recul de la zone sporogène, loin de la colonie du pathogène, est d’autant plus 

marqué que la concentration en sel augmente. Rappelons que, pour toutes les 

concentrations salines de l’expérience, la colonie de Verticillium est entièrement 

recouverte par le mycélium de l’antagoniste (planche 15). 

2.2. Antagonisme par antibiose 

Les modes d’action biochimique agissant par antibiose concernent l’aptitude de T. 

harzianum à produire des substances volatiles et des substances non volatiles 

diffusant dans le milieu de culture. La nature de ces substances a été déterminée 

par Denis & Webster, (1971 a et b). 

2.2.1. Action des substances volatiles 

La croissance de Verticillium soumis aux gaz libérés par T. harzianum est estimée 

après cinq jours de culture. Cette contrainte de temps est due à l’envahissement 

rapide du couvercle portant l’explant de Verticillium par le mycélium de 

l’antagoniste. 

En absence de sel, l’effet des substances volatiles se manifeste par une inhibition 

de la croissance du pathogène de 40 % par rapport aux témoins non exposés 

(Figure 40). Cette inhibition est maintenue en présence de faibles concentrations

165 

Figure 39. Influence de la salinité sur la capacité de 

colonisation de Trichoderma harzianum confronté à 

Verticillium au bout de trois jours. 

100 

Capacité de colonisation de T. 

harzianum C (%) 

95 

90 

85 

80 

75 

70 

0 2 4 6 8 


Figure 40. Influence de la salinité sur l'action antagoniste des 

substances volatiles de Trichoderma harzianum sur la 

croissance diamétrale de Verticillium 

60 

Inhibition de la croissance de 

Verticillium (%) 

50 

40 

30 

20 

10 

0 

0 2 4 6 8 

Concentrations du milieu de culture en NaCl ( g/l)

166 

Planche 15. Morphologie des confrontations de Verticillium avec 

Trichoderma harzianum en fonction de la salinité du milieu de culture 

après 10 jours d’incubation. 

N.B. Dans chaque boite, l’explant de gauche correspond à Trichoderma et l’explant 

de droite à celui de Verticillium. Les deux explants étant séparés par 4cm. 

[0 ; 2 ; 4 ; 6 ; 8 ] : concentrations salines du milieu de culture en g/l de NaCl

167 

de NaCl allant de 0 à 6g/l. Au delà, l’effet inhibiteur des substances volatiles 

diminue de manière significative. Il est de 24,4% à 8g/l. 

2.2.2. Action des substances non volatiles 

- Action sur la croissance mycélienne de Verticillium 

Les cultures du pathogène conduites sur milieu enrichi en sel, et ayant porté 

auparavant une culture de Trichoderma, montrent une réduction importante de 

leur croissance par rapport à leurs témoins respectifs, de même salinité, 

développés sur milieu sans Trichoderma, et ceci pour toutes les concentrations en 

sel de l’expérience (figure 41). En absence de sel, l’inhibition de la croissance du 

pathogène est de l’ordre de 62%. La présence de sel entraîne une baisse 

progressive de l’activité inhibitrice exercée par les métabolites de Trichoderma. 

Cependant, l’action antagoniste sur la croissance du pathogène, très significative, 

est de 37 % à 8g/l et elle persiste pour les concentrations élevées de NaCl allant 

jusqu’à 16g/l (planche 16). 

- Action sur la sclérogénèse 

Les microsclérotes apparaissent sur les cultures témoins dès la deuxième semaine 

de culture pour toutes les concentrations de l’expérience. Par contre, on remarque 

l’absence des organes de conservation sur les thalles développés en présence des 

métabolites de Trichoderma. 

Après quatre semaines, la sclérogénèse s’accentue sur les cultures témoins à toutes 

les concentrations de sel et apparaît tardivement sur les cultures soumises aux 

métabolites de Trichoderma avec une moindre importance. Ainsi, en absence de 

sel, l’action antagoniste des substances non volatiles de Trichoderma entraîne un 

retard dans l’apparition des microsclérotes et une réduction de leur abondance 

(figure 42). En présence de sel, l’action inhibitrice des métabolites libérées par 

Trichoderma sur la sclérogénèse du pathogène diminue avec l’augmentation de la 

salinité et disparaît complètement pour les concentrations supérieures à 8g/l. On 

remarque même, pour ces concentrations, une augmentation significative de 

l’abondance des microsclérotes par rapport aux témoins de même salinité 

développés en absence des substances antagonistes de Trichoderma.

168 

Figure 41. Effet de la salinité sur l'action antagoniste des 

substances non volatiles de Trichoderma harzianum sur 

la croissance diamétrale de Verticillium 

80 

Inhibition de la croissance de 

Verticillium (%) 

70 

60 

50 

40 

30 

20 

10 

0 

0 2 4 6 8 12 16 

Concentrations du milieu de culture en NaCl ( g/l) 

Figure 42. Influence de la salinité sur l'action antagoniste 

des substances non volatiles de Trichoderma harzianum 

sur l'abondance des microsclérotes de Verticillium 

Diametètre de la zone pigmentée des 

colonies de Verticillium ( mm) 

70 

60 

50 

40 

30 

20 

10 

0 

Absence de Trichoderma 

Presence de Trichoderma 

0 4 8 12 16 

Concentrations en NaCl (g/l)

169 

Planche 16. Effet antifongique des substances non volatiles de 

Trichoderma harzianum excrétées dans le milieu de culture sur la 

croissance diamètrale de Verticillium albo-atrum après 20 jours 

d’incubation (Technique de la cellophane). 

1. En absence de sel 

A gauche : culture de Verticillium témoin 

A droite : culture de Verticillium sur milieu contenant les substances non 

volatiles de Trichoderma harzianum 

2. En présence de sel 

Cultures de Verticillium sur milieux contenant les substances non volatiles de 

Trichoderma harzianum 

[0 ; 4 ; 8 ; 12 ; 16] : concentrations salines du milieu de culture en g/l de NaCl

170 


Les résultats présentés dans cette étude montrent que l’apport de sel dans le milieu 

de culture modifie l’aspect cultural de T. harzianum et affecte légèrement ses 

capacités antagonistes vis-à-vis d’un isolat P80 de Verticillium d’origine tomate. 

En absence de sel, l’antagonisme de T. harzianum s’est traduit par une inhibition 

de la croissance mycélienne de Verticillium et une réduction de l’intensité de la 

sclérogénèse via la production de métabolites antifongiques volatiles et non 

volatiles produits par la souche de Trichoderma harzianum testée. Nos résultats 

sont de même nature que d’autres travaux qui ont mis en évidence l’antagonisme 

de Trichoderma spp vis-à-vis des champignons vasculaires, notamment Fusarium 

sp (Datnoff et al., 1995 ; Essalmani & Lahlou, 2002) et Verticillium (Henni, 1987 ; 

D’Ercole et al., 2000). 

En effet, cet antagoniste potentiel est capable de produire des substances volatiles 

ayant un effet soit fongistatique tel que l’acétaldéhyde (Denis & Webster, 1971b) 

soit fongicide comme les alkyles pyrones (Claydon et al., 1987 ; Graeme-Cook et 

al., 1991). De même, ce champignon produit des antibiotiques tels que la 

dermadine, la penicilline, la trichothicine et les trichorzianines (Vial, 1989) et des 

enzymes, cellulases et chinases, qui dégradent les parois cellulaires des agents 

pathogènes (Lorito et al., 1993). 

La salinité du milieu a eu des impacts différents sur les modes d’action de T. 

harzianum. Ainsi, la compétition pour l’espace est peu affectée par l’apport de sel ; 

l’antagoniste envahit en moins de 4 jours la colonie de Verticillium par rapport à 

celle observée sur les confrontations témoins sans sel. L’altération de la 

sporulation du coté de l’adversaire serait due d’une part à l’effet de la salinité sur le 

champignon antagoniste et d’autre part, à l’opposition que manifeste Verticillium 

à la colonisation par Trichoderma. 

L’influence de la salinité sur l’action antagoniste des substances volatiles de T. 

harzianum ne se fait sentir que pour les concentrations en sel supérieures à 6g/l 

pour lesquelles l’effet antagoniste sur la croissance du pathogène diminue. On peut 

penser qu’un seuil de salinité est nécessaire pour perturber les mécanismes de la

171 

libération des substances volatiles par Trichoderma et/ou diminuer leur efficacité 

sur Verticillium. 

Quant aux métabolites antifongiques non volatiles émis par T. harzianum, l’apport 

de sel entraîne une diminution progressive de leur action inhibitrice sur la 

croissance du pathogène. Toutefois, leur niveau antagoniste est tout de même non 

négligeable aux fortes concentrations de NaCl. 

En revanche, l’action inhibitrice des substances non volatiles sur la sclérogénèse 

diminue avec la salinité et tend à disparaître pour les concentrations dépassant 

8g/l. Ce résultat laisse supposer que le sel ralentit le métabolisme de la libération 

des substances antifongiques, toutefois les quantités produites s’avèreraient 

suffisantes pour assurer une inhibition appréciable de la croissance du pathogène. 

L’inhibition de la sclérogénèse semble exiger des quantités plus importantes en ces 

substances antifongiques pour réduire la formation des microsclérotes, ce qui 

expliquerait l’absence de l’action inhibitrice de Trichoderma sur la sclérogénèse 

pour les concentrations en sel supérieures à 8g/l. 

La salinité peut ainsi constituer un facteur environnemental qui risque de modérer 

certaines capacités antagonistes de T. harzianum. Il faudrait en tenir compte dans 

les programmes de lutte biologique contre les champignons phytopathogènes. 

Les résultats de l’antagonisme in vitro de T. harzianum obtenus aux 

concentrations modérées de sel à l’encontre de Verticillium constituent une 

première étape d’un programme de lutte biologique qui vise à long terme de lutter 

contre la verticilliose de la tomate par l’intermédiaire de Trichoderma. On notera 

de plus que les concentrations de sel favorables à l’expression maximale du 

phénomène antagoniste se rapprochent des taux de salinité des sols du littoral 

atlantique marocain (0,2 à 5g/l) où sévit la verticilliose (Besri, 1981). La recherche 

de nouvelles souches de Trichoderma plus tolérantes au sel, permettra de 

sélectionner des souches plus performantes pouvant être utilisées comme agent de 

contrôle biologique dans les régions où la salinité des sols constitue un facteur 

aggravant les maladies fongiques telles que les trachéomycoses. Une étude de 

l’adaptation des ces souches antagonistes aux sols salins et de leur interaction avec

172 

les autres microorganismes du sol est nécessaire avant leur introduction dans 

notre environnement. 

III. Influence de la salinité sur l’expression de l’antagonisme 

in vivo de Trichoderma harzianum vis-à-vis de Verticillium 

albo-atrum de la tomate 

Introduction 

L’utilisation des microorganismes bénéfiques sous formes de « biopesticides » non 

polluants pour l’environnement constitue une bonne alternative à l’utilisation des 

pesticides chimiques pour résoudre les problèmes phytosanitaires. 

Le microorganisme bénéfique clé des programmes de lutte biologique contre les 

agents phytopathogènes est Trichoderma harzianum. Son utilisation avec succès 

sur plusieurs pathotypes certifie qu’il possède un pouvoir antagoniste à large 

spectre d’action. Ce champignon saprophyte du sol semble agir directement sur la 

population pathogène de la rhizosphère en libérant des antibiotiques qui affectent 

sa croissance et des enzymes extracellulaires capables de détériorer la paroi du 

pathogène, ce qui diminue les chances d’infection. 

Outre ses activités antifongiques, Trichoderma harzianum est capable d’induire, 

même à distance du pathogène, la résistance des plantes aux maladies. En effet, 

des études récentes ont montré que l’application de Trichoderma harzianum sur 

les racines ou dans le sol peut induire la résistance des plantes aux agents 

pathogènes qui leur sont spécifiques (De Meyer et al, 1998 ; Howell et al., 2000; 

Essalmani, 2004). 

Il apparaît ainsi que Trichoderma harzianum possède des potentialités très 

importantes pour lutter contre les maladies des plantes en diminuant le taux des 

pathogènes dans le sol et en renforçant les stratégies de défense propres à la 

plante. 

Une des plus importantes caractéristiques nécessaires à l’efficacité des agents du 

contrôle biologique est leur capacité à survivre dans des environnements autres

173 

que ceux d’origine et à coloniser les racines des plantes pendant une certaine 

période pour contrôler les agents pathogènes. Si les recherches abordant 

l’influence de quelques facteurs de l’environnement sur l’aptitude de Trichoderma 

harzianum à supprimer les agents phytopathogènes sont nombreuses, peu de 

travaux ont abordé le problème de la salinité des sols comme une contrainte 

possible à l’application des agents du contrôle biologique. Cette lacune est 

amplifiée par le fait que la salinité constitue un facteur qui aggrave certaines 

maladies d’origine fongique comme les pourritures dues à Phytophthora sp et les 

trachéomycoses dues à Fusarium oxysporum et Verticillium albo-atrum. 

Dans une étude précédente, nous avons montré in vitro que Trichoderma 

harzianum possède une activité antagoniste élevée vis-à-vis du Verticillium de la 

tomate. Celle ci étant très faiblement diminuée par NaCl aux doses usuelles des 

sols salins marocains (Regragui & Lahlou, 2005). Or, le succès du phénomène 

d’antagonisme bien manifesté in vitro peut ou non être obtenu in vivo. En fonction 

de toutes ces données et dans l’objectif d’établir une stratégie de lutte biologique 

contre la verticilliose de la tomate en présence de NaCl, on s’est proposé de tester, 

dans un premier temps, l’antagonisme in vivo de Trichoderma à l’encontre de 

Verticillium en présence de la plante hôte et dans un deuxième temps, de vérifier si 

la salinité des eaux d’arrosage pourrait affecter les capacités de l’antagoniste à 

induire la résistance des tomates stressées. 


1. Protocole de bioprotection des plantes 

1.1. Préinoculation avec Trichoderma 

Les plantes de tomate (Marmande Claudia) ayant atteint le stade premières vraies 

feuilles sont arrachées de la pépinière. Les racines légèrement blessées sont 

trempées pendant trente minutes dans une suspension de spores de l’antagoniste. 

Celle ci est obtenue après grattage de la surface des cultures mycéliennes d’une 

souche de Trichoderma développée sur milieu PDA et âgées de 15 jours. Le 

mycélium recueilli est mélangé avec de l’eau stérile. Après agitation le mélange est

174 

filtrée sur papier Watman n°1. La densité de la suspension est ajustée à 2.10 6 

spores/ml après estimation de la densité initiale sur cellule de Malassez puis 

dilution. Les plantes sont ensuite repiquées en pots de 450ml et arrosées chacune 

au niveau du collet avec 3ml de la même suspension. Des lots témoins subissent le 

même traitement, mais de l’eau stérile remplace la suspension de spores. 

1.2. Inoculation avec la souche pathogène 

Après un temps variable, les plantes pré-inoculées sont délicatement déterrées de 

leur pot et trempées pendant 15 minutes dans l’inoculum pathogène préparé à 

partir de la souche P80 de Verticillium (Cf chapitre 2). Des plantes pré-inoculées 

témoins reçoivent de l’eau stérile. Des plantes témoins non traitées par 

l’antagoniste sont trempées dans l’inoculum pathogène. Les plantes sont repiquées 

dans leur pot et arrosées selon le traitement avec 3ml de l’inoculum agressive ou 

d’eau stérile. Toutes les plantes sont arrosées tous les deux jours avec la solution 

nutritive complète. Les conditions de cultures et le nombre de répétitions ont été 

décrites précédemment. 

2. Evaluation des manifestations de la maladie 

La verticilliose se traduit par des manifestations diverses qui touchent la 

croissance des plantes et les altérations foliaires. 

2.1. Croissance des plantes 

Elle est appréciée par la mesure de la longueur de l’épicotyle après six semaines 

d’observation. 

2.2. Altérations foliaires 

La verticilliose se manifeste par d’importants dégâts foliaires. L’indice d’altération 

foliaires exprime leur intensité (Beye & Lafay, 1985). Il est calculé comme suit : 

Au moment du relevé, une note est attribuée à chaque feuille ; 

0 : feuille saine 

1 : feuille flétrie sans chlorose 

2 : plages légèrement chlorotiques sur un ou plusieurs folioles

175 

3 : plages chlorotiques sur toute la surface d’un ou plusieurs folioles ou plages 

chlorotiques à centre nécrosé. 

4 : nécrose totale ou feuille morte. 

Un indice est établi pour chaque plante 

IAF = somme des notes x 100 

Maximum possible 

Le maximum est égal à 4 fois le nombre total des feuilles bien développées portées 

par la plante. 

2.3. Ré-isolement du champignon 

Le champignon pathogène est recherché dans l’hypocotyle et dans l’apex de la tige 

1 ; 2 ; 4 ; 7 et 14 jours après inoculation. Il n’est pas recherché dans la racine en 

raison du traitement préalable de celles ci par Trichoderma et dont les spores 

adhérentes aux parois corticales peuvent germer au cours de l’opération de réisolement. 

La technique de ré-isolement a été déjà décrite. 

B. Résultats 

1. Recherches des conditions optimales pour l’expression de 

l’antagonisme in vivo de Trichoderma harzianum vis-à-vis de 

Verticillium albo-atrum. 

1.1. Effet de l’inoculation simultanée par le mélange de 

spores des deux champignons 

Les plantules de tomate âgées de trois semaines sont inoculées avec le mélange 

constitué de 50ml d’une suspension de spores à 2.10 6 spores/ml préparée à partir 

de la souche de Trichoderma harzianum et de 50ml d’une suspension de spores à 

10 6 spores/ml issue de l’isolat pathogène de Verticillium. Des plantules de contrôle 

sont inoculées pour certains avec l’inoculum bénéfique et pour d’autres avec 

l’inoculum agressif. Des plantules témoins reçoivent uniquement de l’eau stérile.

176 


La croissance des axes aériens a été estimée six semaines après inoculation. Les 

résultats sont reportés sur la figure 43 A. 

Les plantes inoculées avec les spores de Trichoderma montrent une croissance 

semblable à celles des témoins blancs. L’inoculation des plantes avec l’isolat 

agressif a provoqué une réduction de la taille par rapport aux témoins sains 

d’environ 60.86%. Les plantes inoculées avec le mélange des spores des deux 

champignons antagoniste et challenger dans les proportions 1/1 ont manifesté un 

déficit de la croissance aussi important que celui des plantes malades de contrôle 

inoculées avec l’isolat agressif seul. 

1.1.2. Effet sur les symptômes foliaires 

En fin de la période d’observation, les altérations foliaires ont été également 

appréciées. Leur variation en fonction des différents traitements va dans le même 

sens que la réduction de la taille (figure 43B). En effet, l’inoculation des plantes par 

le mélange des spores des deux champignons a fait apparaître des altérations 

foliaires de même importance que celles induites par l’inoculation avec l’isolat 

pathogène seul. 

1.1.3. Discussion et conclusion 

Il apparaît ainsi que l’inoculation des plantes de tomate par le mélange 

Trichoderma-Verticillium, dans la proportion 1/1, ne leur confère aucune 

protection. Bien que renfermant la même densité en spores des deux 

microorganismes, le mélange a provoqué les mêmes symptômes caractéristiques 

de la verticilliose que ceux induits par les spores du champignon pathogène seul. 

L’échec de l’antagoniste à protéger la plante contre l’invasion par Verticillium peut 

être dû à une sélection exercée par l’hôte pour favoriser l’installation rapide du 

pathogène. En effet, au contact des racines de la plante favorable, les spores de 

Verticillium germent en moins de 24heures et traversent les tissus corticaux, puis 

atteignent l’endoderme pour se localiser dans les vaisseaux du xylème (Lahlou, 

1983). Une fois à l’intérieur de la plante, les microconidies de Verticillium formées 

à partir des filaments mycéliens sont transportées par la sève ascendante assurant

177 

Figure 43 A. Effet de l'inoculation des tomates par le 

mélange de spores de T. harzianum (Th) et de V. alboatrum 

(P80) sur la croissance des plantes 

30 

Longueur des épicotyles en cm 

25 

20 

15 

10 

5 

0 

Te Th Th+P80 P80 

Traitements des plantes 

Figure 43 B. Effet de l'inoculation des tomates par le 

mélange de spores de T. harzianum (Th) et de V. alboatrum 

(P80) sur l'intensité des altérations foliaires 

7 

6 


5 

4 

3 

2 

1 

0 

Te Th Th+P80 P80 

Traitements des plantes

178 

une colonisation totale de la plante et induisant l’apparition des symptômes de 

flétrissement. 

Bien que la vitesse de germination des spores de Trichoderma soit également très 

rapide, ce champignon arrive à coloniser les racines sans jamais atteindre les tissus 

conducteurs. L’observation en microscopie électronique des coupes de racines 

traitées avec Trichoderma harzianum a mis en évidence la pénétration de cet 

antagoniste dans la racine tout en restant confiné dans l’épiderme et le cortex 

(Yédida et al., 1999). 

La confrontation simultanée des deux microorganismes « in vitro » s’est traduite 

par une inhibition de la croissance du pathogène grâce à la grande capacité de 

colonisation de l’espace de l’antagoniste et au phénomène d’antibiose (Regragui & 

Lahlou, 2005). Ce résultat in vitro ne s’est pas concrétisé in vivo en présence de la 

plante hôte dans nos conditions expérimentales. Trichoderma semble avoir 

d’autres exigences pour exercer son antagonisme notamment une période 

suffisante pour induire la résistance des plantes à l’attaque par le pathogène d’où la 

nécessité de décaler la pré-inoculation par l’agent bénéfique et l’infection agressive 

pour viser une meilleure bioprotection. 

1.2. Effet du délai de pré-inoculation par Trichoderma sur 

l’expression de la bioprotection 

Nous avons fait varier la durée de la période séparant la pré-inoculation avec les 

spores de Trichoderma et l’inoculation du pathogène. Ces délais sont de 0 ; 1 ; 2 et 

4 jours. Les manifestations de la maladie ont été estimées 7 semaines après 

inoculation. 


Les résultats des différents traitements sont reportés sur le graphique 44. 

L’analyse des résultas permet de distinguer trois groupes de plantes : 

• Le premier est constitué par les plantes inoculées avec la souche 

pathogène immédiatement après le contact des racines avec les spores 

de l’antagoniste. Ces plantes ont montré une réduction de la croissance

179 

de leur axe aérien aussi marquée que celle des plantes malades de 

contrôle. 

• Le second groupe correspond aux plantes prétraitées avec Trichoderma 

1 jour et 4 jours avant l’inoculation agressive. Ces plantes ont manifesté 

une réduction de la taille de moindre importance par rapport aux 

plantes du premier groupe. 

• Le troisième groupe étant constitué par les plantes pré-inoculées 2 jours 

avant l’infection par Verticillium. Ces plantes ont montré une croissance 

semblable à celle des témoins sains ou des plantes traitées avec 

Trichoderma seul. 

1.1.2. Effet sur les symptômes foliaires 

La pré-inoculation avec les spores de Trichoderma deux jours avant la surinfection 

agressive a protégé les plantes des symptômes foliaires caractéristiques de 

l’infection avec Verticillium (figure 45). Les plantes de ce traitement ont montré 

l’indice d’altération foliaire le plus faible par rapport aux plantes des autres 

traitements. Les plantes pré-inoculées 1 et 4 jours avant l’inoculation par le 

pathogène affichent des indices d’altération foliaire significativement plus élevés 

que ceux des plantes du délai de 2 jours et plus faibles que ceux des plantes 

malades témoins. 

1.1.3. Effet sur la colonisation des tiges par le 

pathogène 

Nous avons réservé des plantes pré-inoculées avec Trichoderma pour tester l’effet 

des primo-infections sur le pouvoir parasitaire de l’isolat P80 de Verticillium vis-àvis 

des tomates différemment traitées. Des plantes n’ayant reçu que l’isolat 

pathogène seul servent de témoins en guise de comparaison. Les résultats des réisolements 

du parasite de la tige des plantes sont reportés sur le tableau 12. 

L’isolat P80 inoculé seul atteint l’hypocotyle deux jours après l’inoculation et 

colonise la totalité des jeunes plantules en moins de 7 jours. Par contre il n’atteint 

l’hypocotyle des plantes prétraitées avec Trichoderma 0 ; 1 et 4 jours avant 

l’infection agressive qu’une semaine plus loin. Cependant une différence existe 

entre les plantes de ces trois délais de pré-inoculation, c’est le ré-isolement du

180 

Figure 44. Influence du délai de pré-inoculation avec 

Trichoderma harzianum sur la croissance des plantes de 

tomate inoculées après avec l'isolat P80 de Verticillium 

30 


25 

20 

15 

10 

5 

0 

Trichoderma 

0 

1 

2 

4 

Délai de préinoculation en jours 

P80 

Figure 45. Influence du délai de pré-inoculation avec 

Trichoderma harzianum s ur les symptômes foliaires des 

plantes de tomate inoculées après avec l'isolat P80 de 



10 

9 

8 

7 

6 

5 

4 

3 

2 

1 

0 

Trichoderma 

0 

1 

2 

4 

Délai de préinoculation en jours 

P80

181 

parasite de l’épicotyle 14 jours après l’inoculation et qui est positif chez les plantes 

des délais de 0 et 1 jour et négatif pour le délai de 4 jours. 

Chez les plantes pré-inoculées 2jours avant l’inoculation d’attaque, le parasite n’a 

été ré-isolé que de l’hypocotyle de quelques plantes (1/5) sans jamais atteindre 

l’épicotyle à la même période d’observation. 

Tableau 12. Effet du délai de pré-inoculation sur la colonisation des 

tiges par l’isolat P80 de Verticillium des plantes de tomates 

différemment traitées 

Ré-isolement de l’isolat P80 de Verticillium 

Délai de pré-inoculation 

Temps après 

inoculation en P80 seul 0 jour 1 jour 2 jours 4 jours 

jours 

1 - - - - - 

2 RH - - - - 

4 RH - - - - 

7 RHE RH RH - RH 

14 RHE RHE RHE RH RH 

- : ré-isolement négatif 

RH : ré-isolement positif au niveau de l’hypocotyle 

RHE : ré-isolement positif au niveau de l’hypocotyle et de l’épicotyle 


La protection des tomates contre l’action agressive de l’isolat P80 de Verticillium a 

été obtenue à la suite du traitement préalable des racines par une suspension de 

spores de l’antagoniste Trichoderma harzianum. Le succès d’une telle protection 

dépend du moment de l’application de l’organisme bénéfique. Ainsi, un délai est 

nécessaire entre le traitement protecteur et la survenue de l’infection ultérieure. La 

durée de cet intervalle de temps dépend de la nature du couple Verticillium-plante

182 

hôte et du type d’agent protecteur. Ce délai peut être très court pour la protection 

de la luzerne par Gliocladium roseum et du coton par Talaromyces flavus (Millar 

et al ; 1984 ; Murray et al., 1997). Par contre la protection de l’érable par Bacillus 

subtilis exige un délai de trois jours ( Hall et al., 1986) alors que l’application de 

Trichoderma doit avoir lieu sept jours avant l’infection agressive des aubergines 

(Henni, 1987). 

Dans nos conditions expérimentales, le délai de 2 jours a conféré aux plantes une 

protection positive et durable. Des délais plus courts ou plus long n’occasionnent 

qu’une protection partielle. Ce résultat concorde avec nos travaux sur la protection 

des tomates contre Verticillium par prémunition grâce à des primo-infections avec 

des souches avirulentes du même champignon 2jours avant la surinfection 

agressive (Regragui et al., 1989). Des résultats similaires ont été obtenus par 

Wymore & Baker, (1983) dans des tentatives de lutte biologique contre la fusariose 

de la tomate et par El Aissami, (1999) pour la bioprotection des luzernes contre la 

verticilliose avec une rhizobactérie. 

La recherche du parasite dans les plantes pré-inoculées avec Trichoderma a 

montré clairement que le champignon pathogène réussit à coloniser la totalité de 

la plante s’il est inoculé seul ou après un délai de 0 et 1 jour de la primo-infection. 

En revanche, il reste localisé dans l’hypocotyle des plantes pré-inoculées 2 et 4 

jours avant l’arrivée de l’inoculum pathogène sans atteindre le sommet de 

l’épicotyle comme c’est le cas des autres traitements. 

L’application de Trichoderma sur les racines des tomates n’empêche pas la 

pénétration du parasite mais semble contribuer à retarder sa prolifération à 

l’intérieur des tissus par des mécanismes autres que l’action directe avec le 

pathogène. 

La protection très positive induite par la présence de Trichoderma sur les racines 

de tomate pendant 48 heures semble être due à une stimulation des mécanismes 

de défense de la plante hôte. Leur efficacité exigerait un délai entre leur mise en 

route et l’arrivée de l’agent pathogène. Dans une étude récente, Howell et al., 

(2000) ont montré que le traitement des semences de coton avec Trichoderma 

virens 2 jours avant l’infection avec Rhizoctonia solani réduit la gravité de la

183 

maladie. Ces auteurs ont souligné que l’induction de la résistance du coton 

observée n’est pas due seulement au mycoparasitisme et au phénomène 

d’antibiose exercés normalement par le champignon antagoniste, mais plutôt à une 

stimulation des réactions de défense des plantes comme la synthèse de 

terpénoïdes. Ces phytoalexines ont été extraites des racines de coton traitées par T. 

virens et ont montré une action toxique envers Rhizoctonia solani. Les mêmes 

auteurs ont montré que le traitement avec T. virens stimule également l’activité 

des peroxydases, enzymes impliquées dans les processus de défenses des plantes. 

Martinez et al. (1999) ont rapporté à leur tour que les cellulases produites par T. 

harzianum déclenche chez les plantes de melon une résistance systémique ayant 

pour conséquence une augmentation des activités des peroxydases et des 

chitinases. Essalmani (2004) suggère que la bioprotection de la lentille contre la 

fusariose par le moyen de T. harzianum est basée aussi bien sur l’antibiose que sur 

l’induction de la résistance. 

L’induction de la résistance des plantes par Trichoderma harzianum représente 

une nouvelle voie très prometteuse pour lutter efficacement contre les maladies 

des plantes cultivées et qui permettra de réduire considérablement les doses 

massives de pesticides couramment utilisées et qui polluent notre environnement. 

Peu de travaux traitent de l’induction de la résistance des tomates contre la 

verticilliose par le moyen de Trichoderma d’où l’intérêt de ce travail. 

Cette étude, conduite en chambre de culture, n’est qu’une étape préliminaire pour 

la mise en évidence de la possibilité de l’induction de la résistance au Verticillium 

chez la tomate par une souche de T. harzianum. Elle doit être développée pour une 

éventuelle application au champ avec l’incorporation de souches de Trichoderma 

capables de coloniser le sol naturellement infesté mais aussi les racines des plantes 

susceptibles. Néanmoins, une bonne connaissance de l’organisme antagoniste et 

de ses interactions avec la microflore autochtone est nécessaire avant 

l’introduction de ce champignon dans notre environnement. 

Il faut rappeler que la verticilliose de la tomate est très fréquente le long du littoral 

atlantique marocain où les sols sont soumis à l’action des embruns et où les eaux 

d’irrigation, chargées de chlorure de sodium, ont un taux de salinité important

184 

(Besri, 1981). Aussi, avant d’envisager une stratégie de lutte biologique contre cette 

maladie, il faudrait s’assurer de la capacité de l’agent bioprotecteur à supprimer la 

maladie dans les conditions salines des sols marocains. Pour ce faire, la suite du 

travail vise à tester, en chambre de culture, les capacités de Trichoderma 

harzianum à induire la résistance des tomates soumises au stress salin. 

2. Impact de la salinité sur le succès de la bioprotection des tomates 

contre la verticilliose par Trichoderma harzianum 

2.1. Réponses des plantes prétraitées avec Trichoderma à la 

surinfection par Verticillium en fonction de la salinité du 

milieu 

Les plantes observées ont été pré-inoculées par trempage de leurs racines dans une 

suspension de spores de Trichoderma 48 heures avant l’infection par Verticillium. 

Ces conditions ont permis d’avoir une protection positive des tomates contre 

l’action agressive de l’agent pathogène. Les plantes ainsi traitées et les témoins non 

pré-inoculées ou les témoins pré-inoculés et non infectés sont répartis en quatre 

lots et sont arrosés régulièrement durant six semaines avec la solution nutritive 

complète enrichie en NaCl aux concentrations de 0 ; 30 ; 60 et 90mM. Chaque lot 

constitué de 4 séries de 15 plantes reçoit un des traitement salin prévus. L’effet de 

la salinité sur l’expression de la bioprotection assurée par Trichoderma est évalué 

par la croissance des plantes et le pouvoir parasitaire de l’agent pathogène. Nous 

n’avons pas estimé la maladie dans cet essai par les altérations foliaires en raison 

du jaunissement induit par la présence de sel. 

Des résultats reportés sur le graphique 46, il ressort que l’effet de sel se manifeste 

par une réduction de la croissance aussi bien des plantes saines que des plantes 

protégées ou les plantes malades de contrôle par rapport aux plantes non soumises 

au régime salin. 

L’effet bénéfique de la pré-inoculation avec Trichoderma s’est bien exprimé chez les 

plantes arrosées avec la solution nutritive normale sans NaCl. En effet, la taille des 

plantes protégées est significativement similaire à celle des plantes témoins saines

185 

Figure 46. Influence de la salinité sur l'expression de la 

bioprotection des tomates contre la verticilliose par 

Trichoderma harzianum estimée par la taille des plantes 


25 

20 

15 

10 

5 

Témoins sains 

Trichoderma 

Trichoderma + P80 

P80 seul 

0 

0 30 60 90 

Concentration des solutions d'arrosage en NaCl en mM

186 

ou inoculées avec Trichoderma seul et s’écarte nettement de celle des plantes 

infectées avec l’agent pathogène. 

En présence de sel, trois constations sont à signaler : 

- En présence des faibles concentrations de sel dans la solution 

d’arrosage, soit 30mM de NaCl, la taille des plantes est certes plus faible 

que celle des plantes développées sans sel, cependant, la protection 

conférée par le traitement avec Trichoderma est bien exprimée 

puisqu’on ne remarque pas de différence significative entre la hauteur 

des tiges des plantes saines et des plantes protégées. 

- En présence des concentrations modérées de sel (60mM de NaCl), on 

remarque chez les plantes pré-traitées avec Trichoderma avant 

l’infection agressive, une réduction de la taille par rapport à celle des 

plantes témoins saines ou inoculées par Trichoderma seul. Toutefois, il 

faut noter que ces plantes montrent tout de même, une protection 

partielle puisque leur taille est toujours significativement plus élevée 

que celle des plantes malades de contrôle. 

- En présence des fortes concentrations de sel, (90mM), toutes les plantes 

répondent à ce régime salin par un rabougrissement très prononcé par 

rapport aux autres régimes moins concentrés. L’évolution de la taille des 

plantes différemment pré-inoculées suit le même schéma que celui 

observé à 60mM. La pré-inoculation avec l’agent protecteur a assuré aux 

plantes ainsi traitées une légère protection contre Verticillium. En effet, 

la taille de ces plantes est intermédiaire entre celle des plantes saines et 

des plantes malades témoins. 


Les résultats obtenus montrent que la pré-inoculation des plantes avec les spores 

de Trichoderma harzianum a conféré aux plantes une protection positive contre 

l’isolat pathogène de Verticillium aussi bien en absence de sel qu’en présence de 

faibles concentrations de NaCl de la solution d’arrosage. Sous les concentrations 

modérées ou élevées de nos conditions expérimentales, la protection conférée aux

187 

plantes, quoique significative, n’est que partielle par rapport à la protection totale 

assurée en conditions normales de culture. 

Il est connu que l’efficacité de Trichoderma à protéger les plantes contre les maladies 

est sous la dépendance des facteurs de l’environnement (Harman et al., 1981 ; Bea & 

Knudsen, 2000 ; Blanca et al., 2001 ; Larkin & Fravel, 2002). 

Les facteurs qui ont le plus retenus l’attention des chercheurs sont surtout la 

température, l’humidité du sol, le pH et les nématodes. L’originalité de ce travail 

est de montrer que la salinité des eaux d’arrosage aux concentrations de 60 et 

90mM de NaCl affecte partiellement les capacités de Trichoderma à supprimer la 

verticilliose chez la tomate. 

Deux hypothèses peuvent être avancées pour expliquer la protection partielle des 

tomates conférée par Trichoderma en présence de sel: 

- La première hypothèse concerne l’action antagoniste directe de 

Trichoderma à l’encontre de Verticillium. Nos essais in vitro ont bien 

démontré que l’efficacité des différents modes d’action de Trichoderma 

n’est diminuée que par les concentrations salines supérieures à 6g/l, 

concentrations dépassant les doses de salinité des solutions d’arrosage 

utilisées. La faible action de Trichoderma in vivo semble ainsi être liée à 

l’intervention de facteurs autres que l’interaction directe des deux 

microorganismes. 

- La seconde hypothèse se rapporte au rôle joué par la plante hôte dans 

l’expression de la bioprotection. Il a été établi que Trichoderma est 

capable d’induire la résistance des plantes en activant ses réponses de 

défense. En plus des barrières physiques que l’hôte développe pour 

s’opposer à l’invasion par le pathogène, la plante synthétise des 

substances ayant pour rôle d’inhiber ou même éliminer l’agent 

pathogène. Ces réactions de défense dépendant de l’état physiologique 

de la plante ne seraient pas optimales en présence d’un certain degré de 

salinité dans le milieu. 

Nous avons montré précédemment que la salinité entraîne des perturbations 

physiologiques et métaboliques chez la tomate et que certains paramètres

188 

physiologiques liés à la salinité peuvent être modifiés par l’addition de l’infection 

avec Verticillium. Ces modifications touchent entre autres l’activité de certaines 

enzymes comme la nitrate réductase impliquée dans la synthèse des protéines et 

les peroxydases qui interviennent dans les processus de résistance des plantes aux 

stress abiotiques et biotiques. En fait, nos résultats ont démontré que la 

combinaison salinité-Verticillium entraîne une importante chute de l’activité de 

ces deux enzymes. Ces données laissent supposer que la diminution de l’effet 

protecteur de Trichoderma chez les tomates infectées par Verticillium, en 

présence de sel, serait liée à une synthèse insuffisante des protéines PR 

(pathogenesis-Related) dont la peroxydase. Ne possédant pas le pool suffisant de 

protéines nécessaires à la défense contre les outils pathogéniques de Verticillium, 

les plantes n’ont exprimé qu’une protection partielle. 

Il apparaît ainsi que l’arrosage des plantes avec des solutions salines assez 

concentrées affaiblit les mécanismes de défenses des plantes et qui pourraient se 

traduire par une synthèse insuffisante des protéines PR et des substances 

antifongiques comme les phytoalexines (Howell et al., 2000). Les travaux de 

Sulistyowati & Keane, (1992) ayant mis en évidence une diminution de la synthèse 

de phytoalexines dans les rhizomes du Citrus soumis à la salinité viennent appuyer 

cette hypothèse. 

Il ressort de cette étude que la bioprotection des tomates contre la verticilliose par 

Trichoderma peut être appliquée efficacement si les eaux d’arrosage renferment 

des taux de salinité de l’ordre de 30mM de NaCl soit une salinité de 1.74g/l. Cette 

concentration se rapproche des concentrations salines des eaux utilisées pour 

l’irrigation dans les régions du littoral atlantique marocain et qui appartiennent 

aux classes C3 (0.48g/l – 1.44g/l) et C4 (1.4g/l – 3.2) définies par Richard (1969). 

Ce résultat, obtenu en serre de culture, ouvre une voie encourageante pour 

l’établissement d’une stratégie de lutte biologique contre la verticilliose dans les 

conditions salines des sols du littoral atlantique où la verticilliose est fréquente.

189 

Conclusion générale 

La salinité des sols constitue un problème majeur dans les zones où les cultures 

irriguées sont pratiquées. Elle est souvent associée à l’augmentation de la sévérité 

des maladies causées par les champignons phytopathogènes du sol. Les études 

menées pour expliquer les mécanismes par lesquels intervient la salinité dans 

l’augmentation de la sensibilité des plantes aux maladies ont surtout mis l’accent 

sur une plus grande prédisposition des plantes à l’infection fongique et une 

meilleure tolérance au sel de l’agent pathogène. La physiologie de l’interaction 

salinité-infection a été peu étudiée dans le cadre de la verticilliose de la tomate. 

C’est pour contribuer à développer cet aspect que nous avons mené cette étude. 

Elle a débuté par l’évaluation du niveau de tolérance au sel de la plante hôte et de 

l’agent pathogène et s’est poursuivie par l’étude de l’interaction salinité- 

Verticillium sur la relation hôte-parasite, jusqu’à l’étude des modifications 

physiologiques et biochimiques induites par cette interaction chez les plantes 

doublement stressées et l’évaluation de l’impact de la salinité sur les composantes 

biochimiques de l’agressivité du champignon. 

Dans un premier temps, nous avons montré que le chlorure de sodium, aux 

concentrations voisines de celles des sols du littoral atlantique, affecte la 

germination des graines des variétés de tomate Marmande Claudia et VR. et 

réprime le développement végétatif des plantules d’environ 50%. Ces deux variétés 

présentent une même et moyenne tolérance à la salinité et constituent ainsi un 

matériel de choix pour l’étude des effets de l’interaction salinité-Verticillium 

d’autant plus qu’elles présentent une forte sensibilité à la verticilliose. 

Le comportement de l’isolat P80 de Verticillium d’origine tomate, vis-à-vis de la 

salinité, a été étudié in vitro. Plusieurs paramètres de la biologie du champignon 

ont été examinés. Nous avons mis en évidence un effet stimulateur du sel sur la 

croissance mycélienne et la reproduction de cet isolat, notamment son aptitude à

190 

la sporulation et le pouvoir germinatif de ses conidies. Par ailleurs, ce champignon 

tolère pour sa croissance des concentrations fort élevées de NaCl de l’ordre de 

60g/l. 

La capacité du champignon à former les organes de conservation n’est pas stimulée 

par la salinité. L’abondance des microsclérotes est optimale pour les 

concentrations salines inférieures à 5g/l puis décline. Néanmoins, cette fonction 

reste encore appréciable aux très fortes concentrations de NaCl sur les cultures 

âgées. 

En associant la température comme autre facteur de l’environnement à la salinité, 

il s’est avéré que la présence de sel permet au champignon de mieux résister à une 

température de 36°C, température sous laquelle la croissance mycélienne est 

fortement inhibée dans un milieu dépourvu de sel. La salinité pourrait favoriser 

l’adaptation du parasite à des climats chauds et arides. 

Pour tenter d’expliquer l’effet du sel sur le développement in vivo du parasite, les 

plantes de tomate ont été exposées à la salinité des eaux d’arrosage et à l’infection 

par Verticillium. L’effet de cette combinaison s’est manifesté par une action 

dépressive de la croissance des plantes. Le rabougrissement exagéré de celles- ci 

est le reflet de l’effet additif des deux stress, abiotique et biotique, sur le 

développement de l’axe aérien des tomates hôtes sans qu’un effet synergique ne 

soit apparent. En revanche, l’interaction salinité-Verticillium a perturbé le 

développement de l’appareil foliaire en retardant le déploiement des feuilles par 

les tomates sachant que l’émission des feuilles n’est pas altérée par l’infection seule 

ou par la salinité seule. Cette perturbation du développement pourrait être 

expliquée par une plus grande sensibilité des plantes à la maladie. 

L’étude du pouvoir parasitaire du Verticillium en présence de sel a apporté une 

confirmation expérimentale à cette hypothèse. En effet, une plus grande 

colonisation des tomates par le pathogène a été mise en évidence en conditions 

salines de culture. 

L’effet stimulateur de la salinité sur la reproduction de Verticillium obtenu in vitro 

s’est donc concrétisé in vivo. La composition chimique de la sève qui est le reflet de

191 

celle du milieu nutritif pourrait constituer un milieu favorable à la sporulation du 

champignon installé dans les racines et permettrait un meilleur envahissement des 

tissus par le parasite. La stimulation de la colonisation qui en découlerait serait en 

rapport avec une plus grande sensibilité de la plante à l’agent pathogène et une 

meilleure expression du pouvoir pathogène du parasite. 

Le rapport entre la sensibilité des plantes au Verticillium et l’importance de la 

colonisation a été établi par Brand et al. (1984) sur la menthe et par Garas et al. 

(1986) sur le coton. 

Le pouvoir pathogène de Verticillium est sujet à une grande variabilité qui peut 

être expliquée par les variations des composantes de l’agressivité. Ces variations 

peuvent être spontanées ou être amorcées par des facteurs de l’environnement du 

pathogène. La salinité aurait-elle un effet sur l’expression du pouvoir pathogène du 

parasite ? 

La réponse à cette question a été recherchée à travers les résultats d’essais 

expérimentaux distincts associant le facteur sel à des facteurs susceptibles de 

provoquer des variations du pouvoir pathogène, parmi eux la densité de l’inoculum 

et le contact avec un hôte inhabituel. 

L’analyse des résultats a permis de montrer que l’augmentation des concentrations 

salines du milieu nutritif prédispose les plantes de tomate à l’attaque par un 

inoculum de faible densité de spores alors qu’un taux d’inoculum suffisant est 

nécessaire à la manifestation de la maladie. Ce constat peut être expliqué par nos 

résultats sur l’effet stimulateur du sel sur le pouvoir germinatif des conidies de 

Verticillium. Cette action du sel peut s’exercer au contact de la plante hôte et 

multiplier les points d’attaque permettant ainsi le succès de l’infection et 

l’apparition de la maladie. 

Des tests de pathogénécité d’un isolat de Verticillium peu virulent sur tomate, 

conduits en présence de sel, ont montré que la salinité favorise l’attaque des 

plantes par cet isolat initialement non pathogène. Cette cassure de la résistance 

des tomates à cet isolat peut être expliquée par une action directe des ions Na + sur 

la saturation en ions Ca ++ des constituants des parois cellulaires racinaires suite à 

un antagonisme avec les ions Ca ++ (Standaert, 1975). Celles ci seraient plus

192 

facilement dégradables par les enzymes fongiques. D’autre part, le facteur sel 

pourrait agir en inhibant les mécanismes de défense élaborés par la plante pour 

faire échouer l’attaque par le parasite. 

L’impact de la salinité s’est également manifesté sur la spécificité parasitaire de 

Verticillium. Cette notion est en effet sujette à des variations. Ce travail a montré 

qu’un isolat d’origine tomate, non pathogène sur luzerne, peut acquérir de 

nouvelles capacités pathogènes vis-à-vis de ce nouvel hôte dès le premier contact si 

le milieu nutritif est enrichi en sel. Une telle variation du pouvoir pathogène n’est 

possible, dans les conditions normales de culture qu’après un contact prolongé de 

l’isolat initial avec l’hôte inhabituel (El Aissami & Lahlou, 1999). La résistance des 

luzernes semble ainsi être brisée par la salinité. Celle ci constitue donc un danger 

dans les sols où la maladie de certains cultivars n’est pas connue et qui hébergent 

des génotypes de Verticillium, vu le risque de l’adaptation rapide de ces derniers à 

des plantes non spécifiques. 

Les causes du changement de la sensibilité des plantes au Verticillium sous stress 

salin ont été recherchées d’une part au niveau de la physiologie nouvelle de la 

plante hôte doublement stressée et d’autre part, au niveau des mécanismes 

d’action du pathogène. 

Les réactions physiologiques et biochimiques de la tomate face au stress salin 

touchent plusieurs composantes notamment la balance minérale, les taux des 

composés osmorégulateurs ; les sucres solubles totaux et la proline, et certaines 

activités enzymatiques comme l’activité nitrate réductase et l’activité 

peroxydasique. L’analyse de ces composantes permet de comprendre le 

comportement du végétal dans les conditions salines et définir les critères 

physiologiques de la tolérance au sel. 

L’addition de l’infection au facteur salinité perturbe les caractéristiques 

physiologiques et biochimiques liées au stress salin. Ces perturbations se 

manifestent par :

193 

1. Une altération de la nutrition minérale. 

Les plantes de tomate réagissent à la salinité par un déficit en ions K + compensé 

par une accumulation en ions Na + dans les feuilles. Une réaction analogue est 

constatée à la suite de l’infection par Verticillium. La modification des teneurs en 

ces ions monovalents est fort accentuée par le cumul des deux stress 

particulièrement aux concentrations modérées de sel. L’excès de l’accumulation 

des ions Na + dans les feuilles peut créer un état de toxicité qui nuirait à la 

croissance de la plante. Néanmoins, aux fortes concentrations de NaCl, l’effet 

additif des deux contraintes sur l’accumulation de ces ions n’est pas observé. 

D’autres facteurs doivent intervenir pour ralentir le transport des ions sodium vers 

les feuilles. 

- 2. Une chute des teneurs en sucres solubles totaux. 

La salinité induit une baisse des teneurs en sucres solubles foliaires 

particulièrement aux fortes concentrations de sel. Associée à la salinité, l’infection 

semble accentuer l’effet néfaste du sel sur ces composés organiques ; les teneurs en 

sucres solubles baissent au delà des valeurs normales enregistrées chez les plantes 

saines soumises au stress salin. Ce résultat traduit une moindre tolérance des 

tomates infectées à la salinité. En effet, les teneurs en sucres solubles totaux sont 

de bons indicateurs de tolérance à la salinité chez plusieurs espèces (Rathert, 

1984 ; Misra & Dwivedi, 1995). 

- 3. Une augmentation des teneurs en proline. 

Les teneurs en proline foliaires augmentent avec l’augmentation de la salinité du 

milieu nutritif mais aussi avec l’infection verticillienne. Cette augmentation serait 

le reflet du degré du déficit hydrique conséquent à l’augmentation du potentiel 

osmotique du milieu nutritif et à l’obstruction des vaisseaux du xylème par la 

présence du champignon. L’accumulation de cet acide aminé est en effet 

considérée comme un indicateur quantitatif des stress qui affectent le statut 

hydrique des plantes (Grote & Claussen, 2001). Le déficit hydrique peut à lui seul 

expliquer la gravité des symptômes de rabougrissement des plantes doublement 

stressées.

194 

- 4. Une dépression de l’activité nitrate réductase 

Cette enzyme limitante du processus de l’assimilation de l’azote, est légèrement 

affectée, dans nos conditions expérimentales par l’infection ou par les 

concentrations modérées de NaCl. Seules les fortes concentrations inhibent 

l’activité de l’enzyme. L’inhibition de l’enzyme par la combinaison des deux stress 

ne peut être écartée comme une cause possible de l’altération sévère de la 

croissance des plantes vue l’importance de cette enzyme dans la synthèse des 

acides aminés et des protéines. 

- 5. Une baisse de l’activité peroxydasique . 

L’activité de la peroxydase des racines est stimulée par la salinité ou par l’infection 

avec Verticillium. Les niveaux d’activité étant plus élevés dans le cas de l’infection. 

L’interaction salinité-Verticillium se manifeste par un effet tout à fait inverse Les 

niveaux d’activité de la peroxydase sont souvent corrélés à la résistance des plantes 

aux infections (Pegg, 1981 ; Hammerschmidt et al., 1982). La baisse de l’activité 

peroxydasique à la suite de l’interaction salinité-infection suppose une action sur 

les mécanismes de défense des plantes qui pourrait se traduire par une baisse des 

teneurs en produits phénoliques ; facteurs importants dans la résistance des 

plantes contre les champignons vasculaires (Pegg, 1981 ; Candela et al., 1995). 

Une grande analogie existe donc entre les effets physiologiques de la salinité et 

ceux de l’infection avec Verticillium chez la tomate. Certains paramètres 

physiologiques modifiés sont corrélés avec la notion de résistance/sensibilité à la 

salinité. Ces modifications, accentuées ou déprimées par l’interaction salinité- 

Verticillium seraient à l’origine des changements dans l’expression des symptômes 

communs aux deux stress tel le déficit de la croissance. Ces changements peuvent 

correspondre à une moindre tolérance de la plante à la salinité et/ou à la 

verticilliose. 

Les symptômes de la maladie sont en fait le reflet de l’action des métabolites 

toxiques libérés par le parasite dans les tissus infectés. En effet, les mécanismes 

physiologiques qui déterminent l’agressivité du Verticillium intéressent la

195 

production de toxines (Meyer et al., 1994 ; Nachmiais et al., 1982-1985) et 

d’enzymes (Russel,1975 ; Balandina et al., 1976 ; El Aissami & Lahlou, 1998). 

Aussi, une influence du sel sur les mécanismes d’action du Verticillium est une 

éventualité qui ne peut être écartée. Cette suggestion a été vérifiée par des tests in 

vitro visant à montrer l’influence du sel sur les composantes du pouvoir pathogène 

de l’isolat de Verticillium. 

L’évaluation de l’effet du sel sur le pouvoir toxinogène du Verticillium, à l’aide de 

biotests, a montré une augmentation de la phytotoxicité des filtrats de culture avec 

l’élévation des concentrations en sel du milieu de culture. Cette modification de la 

phytotoxicité in vitro laissent supposer une action positive de la salinité de la sève 

des plantes soumises au stress salin sur les capacités toxinogènes de Verticillium 

in vivo en touchant entre autres la qualité et/ou la quantité de toxines produites à 

l’intérieur des vaisseaux de la plante hôte favorisant ainsi l’apparition des 

symptômes (Keen et al., 1972 ; Chaib, 1987). 

Nos résultats ont également montré une stimulation de l’activité 

carboxyméthylcellulase en fonction de la salinité croissante du milieu CMC 

approprié à la production de l’enzyme (Regragui et al., 2003). La production des 

polysaccharidases par Verticillium peut varier avec la nature de la source de 

carbone (Gupta & Heale, 1971 ; Bakhali, 1995). Cette étude a mis en évidence, pour 

la première fois, l’effet du chlorure de sodium sur l’activité cellulolytique de 

Verticillium rejoingnant les travaux de El Abyad et al. (1992) sur l’impact de la 

salinité du milieu sur les activités enzymatiques de Sclerotium. rolfsii et de 

Rhizoctonia. Solani. 

En revanche, le sel semble avoir un effet négatif sur l’activité des phénoloxydases, 

produites par le champignon, principalement les laccases. En effet, l’activité de ces 

enzymes diminue dès que le milieu s’enrichit en NaCl. Ces enzymes ne sont pas 

liées directement à la pathogénèse du champignon mais peuventt intervenir dans 

sa phase saprophytique en dehors de la plante hôte ; le champignon vit, en effet, 

sur les débris végétaux qu’il dégrade en tant que saprophyte (Lahlou, 1983). 

La modification des activités enzymatiques serait associée à une action plus 

profonde du sel sur la synthèse des protéines extracellulaires par Verticillium.

196 

L’analyse biochimique des filtrats de culture a révélé une augmentation de la 

quantité de protéines excrétées dans les milieux de culture lorsque ces derniers 

sont amendés avec NaCl (2-6g/l). Cette hausse des taux de protéines a été 

accompagnée d’une variation du pH final des filtrats qui est passé de la neutralité à 

une légère alcalinité aux concentrations inductrices. Les variations du pH 

traduisent une diversité dans la production métabolique du parasite soumis au 

régime salin. 

L’analyse électrophorétique des protéines, excrétées dans les filtrats de culture, a 

permis de rendre compte de cette diversité. Elle a mis en évidence d’une part, une 

action positive du sel sur l’expression des protéines majeures de PM 63 ; 73 et 76 

Kda et d’autre part, l’absence de la protéine 45 Kda à partir de 4g/l et la synthèse 

de novo de deux nouvelles protéines. 

Les changements dans la quantité et la qualité des protéines secrétées seraient 

corrélés à une plus grande virulence de l’agent pathogène en présence de sel. Cette 

suggestion va dans le sens des observations d’autres travaux ayant mis en rapport 

la quantité de protéines excrétées et la pathogénécité des isolats de Verticillium 

(Chaib, 1987 ; Saksirirat & Hoppe, 1991 ; Nachmias et al., 1992). 

Dans l’objectif de lutter efficacement contre la verticilliose par un moyen non 

polluant et sans inconvénients pour l’environnement, la bioprotection des tomates 

contre la verticilliose a été tentée en conditions salines de culture. 

Une étude préliminaire conduite in vitro a mis en évidence que l’antagonisme 

microbien de plusieurs microorganismes bénéfiques du sol (Penicillium sp, 

Talaromyces flavus, Trichoderma harzianum, Fusarium oxysporum non 

pathogène et Bacillus sp) vis-à-vis du Verticillium est stimulé par la salinité du 

milieu de culture. L’action favorable du sel serait due à la bonne tolérance à la 

salinité de ces différents antagonistes. Parmi ces derniers, Trichoderma 

harzianum a été retenu pour des essais in vivo en raison de son action antagoniste 

très performante à l’égard de l’isolat P80 de Verticillium.

197 

L’analyse des effets du sel sur l’efficacité des différents modes d’action de T. 

harzianum in vitro a montré que l’action antagoniste, exercée par compétition et 

par antibiose, n’est affaiblit que par des concentrations de NaCl élevées dépassant 

celles des sols salins marocains. 

L’antagonisme de T. harzianum, bien exprimé in vitro, a été testé in vivo au 

contact de la plante hôte. Dans les conditions normales de culture, le traitement 

préalable des racines de tomate par les spores de l’antagoniste a conféré aux 

plantes une protection positive qui s’est exprimée par la réduction de l’action 

dépressive du parasite sur la croissance des plantes. 

Le succès de cette protection dépend du délai séparant la pré-inoculation de 

l’inoculation agressive. Un délai de 48heures a assuré une protection positive des 

tomates contre la verticilliose. Cet intervalle de temps semble nécessaire pour le 

déclenchement des réponses de défense de la plante à la suite de la primoinfection. 

Les mécanismes de défense des plantes sont complexes et font appel à des 

mécanismes cellulaires, biochimiques et moléculaires. Plusieurs travaux ont mis 

en évidence la synthèse des protéines PR (Pathogenesis related) et des 

phytoalexines. Howell et al. (2000) ont pu isolé des terpénoides des racines de 

coton inoculées avec Trichoderma virens. Ces molécules possèdent des propriétés 

antifongiques contre R. solani. D’autres phytoalexines extraites des feuilles de 

luzerne à la suite d’inoculation incompatible inhibent la germination des spores de 

V. albo-atrum et freine la progression du champignon dans la totalité de la plante 

(Flood & Milton, 1982). Ce dernier point vient réconforter notre résultat 

concernant le retard de la colonisation des tiges par l’agent pathogène chez les 

plantes de tomate protégées par T. harzianum. 

En fait, la présence de l’antagoniste sur les racines de tomate 48 heures avant 

l’infection par le pathogène ne s’oppose pas à l’invasion de la racine par le parasite, 

mais semble retarder l’avancée mycélienne dans la totalité des tissus du xylème 

grâce à des mécanismes qui reste à élucider.

198 

Dans la nature, l’efficacité de cet antagoniste dépend des facteurs de 

l’environnement. Aussi, sa capacité à induire la résistance des tomates à 

Verticillium a été examinée en conditions salines de culture. Les résultats de cette 

étude a dévoilé que la bioprotection des tomates arrosées avec des solutions salines 

à 30mM de NaCl est aussi satisfaisante que celle conférée en absence de sel. Des 

concentrations salines plus élevées ne permettent qu’une protection partielle alors 

qu’elles ne semblent pas réduire l’action antagoniste de T. harzianum in vitro. 

Cette constatation souligne le rôle joué par la plante dans l’expression de la 

bioprotection. Le degré de protection acquise dépendrait donc de l’efficacité des 

mécanismes de défense mis en jeu avant le processus de la pathogénèse. La 

performance de ces derniers serait affaiblie en présence d’un certain degré de 

salinité. 

Il faut toutefois signaler que les concentrations salines favorables à l’expression de 

l’antagonisme in vivo de T. harzianum s’alignent avec les taux de salinité des eaux 

d’irrigation utilisées dans les régions du littoral atlantique. 

Grâce aux résultats obtenus, le contrôle biologique de Verticillium par T. 

harzianum peut être suggéré pour éliminer la maladie dans les sols salins comme 

alternative à l’utilisation des traitements chimiques actuellement fort contestés. 

Certes, la protection conférée aux plantes a été obtenue dans des conditions 

contrôlées de culture et d’inoculation. L’agent inducteur de la résistance a été 

effectivement appliqué directement sur les racines pour assurer une colonisation 

efficace de celles-ci par le microorganisme bénéfique. Pour compléter cette étude, 

des essais au champ sont nécessaires pour tester la capacité de Trichoderma 

harzianum à coloniser les sols salins et à empêcher la réussite de l’infection avec 

Verticillium en agissant par antagonisme ou par induction de la résistance. 

L’étude préalable de son interaction avec les autres microorganismes du sol est 

primordiale avant son incorporation dans notre environnement. 

En perspective, les résultats de cette étude ouvrent des voies de recherche 

intéressantes.

199 

Nos tests se sont limités à l’analyse des paramètres physiologiques liés à la 

combinaison salinité-Verticillium. D’autres études doivent se pencher sur la 

caractérisation biochimique des protéines extracellulaires synthétisées de novo par 

le champignon sous régime salin et leur effet sur la plante. 

Les recherches sur la bioprotection des tomates pourront se poursuivre par l’étude 

de l’impact de la salinité sur les mécanismes de défense, physiques et 

biochimiques, impliqués dans l’induction de la résistance au Verticillium par T. 

harzianum. 

Elles porteront d’une part, sur les modifications structurales des cellules 

provoquées par le traitement avec les spores de T. harzianum et d’autre part, sur la 

caractérisation biochimique des molécules défensives et l’évaluation de leur 

pouvoir antifongique. 

Il se trouve par ailleurs que certaines souches de Trichoderma sp semblent exercer 

une action stimulatrice de la croissance des plantes. La recherche de souches de 

Trichoderma sp à la fois tolérantes au sel, stimulatrices de la croissance et 

antagonistes à Verticillium pourrait ouvrir de nouveaux horizons visant 

l’amélioration et la protection des plantes dans les zones où le problème de la 

salinité est posé.

200 

Références bibliographiques 

AFAILAL A., 1987. Manifestation de la verticilliose sur les tomates sensibles et résistantes : effets 

de la salinité sur le développement des deux races de Verticillium dahliae (Kleb) et sur la réaction 

des plantes à l’agent pathogène. Thèse de doctorat de 3 ème cycle, Université Mohamed V, 127p 

AGRIOS N.G., 1988. Plant disease epidemiology. In Plant Pathology, Academic Press, INC. 3th 

edition, 156-179. 

AL FIGUIGUI J., 1992. Influence de quelques produits chimiques sur le développement de la 

verticolliose de la tomate due à Verticillium dahliae Kleb races 1 et 2. D.E.S de 3 ème cycle, 

Université Mohammed V, 117p 

AMOR, H.,1991. Etude de la résistance à la salinité in vitro et in vivo chez Lycopersicon 

esculentum et quelques espèces sauvages de tomates. D.E.S de 3 ème cycle, Université Mohammed V, 

99p 

ANDER, P. and ERIKSSON, K.-E.L., 1976. The importance of phenol oxidase activity in lignin 

degradation by the white rot fungus Sporotrichum pulverulentum. Archives of Microbiolgy 109 : 1- 

8 

ANDREEVA V.A., 1991. Involvement of peroxydase in the protective plant mechanism. 

Biochemical, Molecular and Physiological Aspects of plant peroxydases. Editors J. 

LOBARZEWSKI, H. GREPPIN, C. PENEL, Th. CASPAR, University of Geneva, Switzerland. 

ARAHOU M., 1986.Contribution à l’étude de l’interaction kinétine-NaCl sur certains aspects 

physiologiques chez la tomate: Lycopersicon esculentum (Mill). D.E.S., Université Mohammed V, 

107p 

ASHWORTH L.J., HUTSMAN Jc. O.C., HARPER D.M., STOMBERG L.K. and BASSETT 

D.M., 1979. Verticillium wilt disease of tomato : influence of inoculum density and root extension 

upon disease severity. Phytopathology , 69:490-492. 

ASPINALL D. and PALEG L.G., 1981. Proline accumulation. Physiologicals aspects. In: Paleg 

LG and Aspinall D (ed) Physiology and Biochemistry of Drought Resistance in Plants, Academic 

Press, New York, pp 205-241. 

AYRES G.P., 1984. The interaction between environmental stress injury and biotic disease 

physiology. Annu. Rev. Phytopathol. 22 : 53-57 

BABAS, M., 1985. Tolérance à la salinité de Lycopersicon esculentum. Comparaison de la réponse 

de 2 variétés de tomate « Carmello » et « Vémone » à NaCl. Mémoire de fin d’étude. Institut 

Agronomique et Vétérinaire Hassan II. Rabat. 40p. 

BAE Y.S. and KNUDSEN G.R., 2001. Influence of a fungus-feeding nematode on growth and 

biocontrol efficacy of Trichoderma harzianum. Phytopathology, 91: 301-306. 

BAHKALI A.H., 1995. Production of cellulase, xylanase and polygalacturonase by Verticillium 

tricorpus on different substrates. Bioresource Technology 51(2-3): 171-174. 

BALANDINA I.D., SHVETSOVA L.P. and MIRYAKUBOVA M., 1976. Role of certain enzymes 

of Verticillium dahliae in pathogenesis of Verticillium wilt of cotton. Fiziol. Rast., 23:155-159. 

BATEMAN D.F., 1969. Some characteristics of the cellulase system produced by Sclerotium 

rolsfii Sacc. Phytopathology 59: 37-42.

201 

BAZZIGALUPI O., DEROCHE M.E., LESCURE J.C., BACHELIER, et TARDIF S., 1992. 

Activité nitrate réductase in vitro de jeunes plantules de blé (Triticum aestivum L) cultivées dans 

les conditions de détermination de la faculté germinative et après amélioration de la nutrition et de 

l’éclairement. Agronomie, 12 : 711-721. 

BEEVERS L. and HAGEMAN R.H., 1969. Nitrate reduction in high plants. Ann. Rev. Pl. Phy., 20: 

495-522 

BENKHEMMAR O., 1993. Améloiration de la conservation frigorifique du raisin de table 

marocain. Thèse de Doctorat es-sciences, Université Mohamed V.130p. 

BENYAHYIA H.,1998. Effet de la salinité sur la pourriture racinaire des agrumes due au 

Phyhophthora parasitica Ducan. D.E.S, Université Cadi Ayyad, 148p 

BENYACOUB M., 1993. Etude in vitro de l’antagonisme du Stachybotris elegans vis-à-vis du 

Rhizoctonia solani (GA3). Diplôme du grade Maître Es Sciences, Université Laval, 118p 

BERG G., FRANKOWSKI J. and BAHL H., 1999. Biocontrol of Verticillium wilt in oilseed rape 

by chitinolytic Serratia plymuthica. Proceeding of 10 th International Rapseed Congress, Canberra, 

Australia. 

BERNSTEIN L., 1975. Effects salinity and sodicity on plant growth. Ann. Rev. Phytopath. 3: 295- 

312. 

BESNARD O. & DAVET P., 1993. Mise en évidence de souhes de Trichoderma spp à la fois 

antagonistes de Pythium ultimum et stimulatrices de la croissance des plantes. Agronomie, 13 : 

413-421. 

BESRI M., 1977. Etude de quelques aspects de l’écologie de Fusarium oxysporum f.s.p. lycopersici 

et de Verticillium dahliae Kleb. le long du littoral atlantique marocain. Thèse de Doctorat essciences. 

Université de Nancy, 199 p 

BESRI M., 1981. Qualité des sols et des eaux d’irrigation et manifestation des trachéomycoses de 

la tomate au Maroc. Phytopathologia mediterranea, Vol 20, n°2/3:107-111 

BESRI M., ZROURI M. et BEYE I., 1984. Appartenance raciale et pathogénie comparée de 

quelques isolats de Verticillium dahliae (Kleb) obtenus à partir de tomates. Phytopathology Z, 109 : 

289-294. 

BESRI M., 1990. Effects of salinity on the development of tomato Verticillium wilt in Morocco. 

(abstract) Proceeding of the fifth International Symposium on Verticillium Wilt, 25-30 June 1990, 

St Petersburg, Russia 

BESRI M., 1991. Verticillium wilt of tomato grown under plastic tunnel in Morocco. Acta 

Horticulturae (ISHS) 287: 355-360 

BESRI, M. and AFAILAL, A., 1993. Effect of water salt content on the development of 

Verticillium wilt on resistant tomato cultivars. Proceedings of the 6 th International Congress of 

Plant Pathology, July 28-August 6, Montréal, Canada. 

BEY I., 1982. Etude du comportement de deux hybrides de tomate de tomate (H 204 et Vémone) 

cultivés sous tunnel plastique vis-à-vis de Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici et de Verticillium 

dahliae le long du littoral atlantique. Mémoire de 2 ème cycle. IAV Hassan II. 47p.

202 

BEYE I. et LAFAY J.P., 1985. Etude des critères de sélection pour une résistance générale à la 

verticilliose chez la tomate. Agronomie, 5(4) : 305-311. 

BIROUK A., BOUIZGAREN A. et BAYA B., 1997. Luzerne (Medicago sativa L.) production et 

utilisation des cultures fourragères au Maroc. JARITZ G. & BOUNEJMATE M. éd. 389p INRA 

Rabat. 

BLAKER N.S. and Mac DONALD J.D.,1986. The role of salinity on the development of 

Phytophthora root rot of Citrus. Phytopathology, Vol 76, n° 10: 970-975 

BLANCA B.B., NAVAS-CORTES J.A., HERVAS A. and JEMENEZ-DIAZ R.M., 2001. 

Influence of temperature and inoculum density of Fusarium oxysporum f. sp. Ciceris on 

suppression of Fusarium wilt of chikpea by rhizosphere bacteria. Phytopathology, 91: 807-816. 

BOISSON C. et LAHLOU H., 1980. Etude du polymorphisme intraclonal chez Verticillium alboatrum, 

forme à microsclérotes. I. La morphogénèse des thalles à partir des microconidies et ses 

variations. Can. J. Bot., 58, 2407-2419. 

BOISSON C. et LAHLOU H., 1982. Etude du polymorphisme intraclonal chez Verticilliumalboatrum, 

forme à microsclérotes. II. Influence de l’âge des thalles sur leur descendance par 

microconidies. Can. J. Bot., 60, 19-25. 

BOLLAG J.M. and LEONOWICZ A., 1984. Comparative studies of extracelllar fungal laccases. 

Applied and Environmental Microbiology 48, 849-854 

BOTELLA M.A., CRUZ C., MARTINS-LOUCCAO M. A. and CERDA A., 1993 a. Nitrate 

reductase activity in weat seedling as affected by NO3/NH4 ratio and salinity. Plant Physiol., 142: 

531-536 

BOTELLA M.A., QUESADA M.A., HASEGAWA P.M., VALPUESTA V., 1993 b. Nucleotide 

sequences of two peroxidase genes from tomato (Lycoperscon esculentum). Plant Physiol. 103: 

665-666. 

BOULE I., 1989. Verticilliose de la betterave: mise au point d’une méthode d’estimation du 

potentiel infectieux d’un sol naturellement infecté par Verticillium dahliae. DEA de 

phytopathologie, Université Paris IX, Paris VI, INA de Paris grignon 

BOURBOS V.A. and SKOUDRIDAKIS M.T., 1996. Solarization for the control of Verticillium 

wilt of greenhouse tomato. Phytoparasitica 24(4): 277-280 

BOZOUK S., 1981. Effects of kinetine and salinity on germination of tomato barley and cotton 

seeds. Annals of Botany 48 : 81-84, in Abstract 8632, 51 (11). 

BRADFORD M.M., 1976. A rapid sensitive method for the quantification of microgram quantities 

of protein utilising the principle of protein dye binding. Annual. Biochem. 72: 248-254. 

BRAND W.H., LACY M.L. and HORNER C.E., 1984. Distribution of Verticillium in stems of 

resistant and susceptible species of mint. Phytopathology, 74:587-591. 

CAMPOROTA, P., 1985. In vitro Antagonism of Trichoderma spp. against Rhizoctonia solani 

Kühn. Agronomie, 5(7) : 613-620. 

CANDELA M.E., ALCAZAR M.D., EPSIN A., ALMELA L., 1995. Soluble phenolic acids in 

Capsicum annuum stems infected with Phytophthora capsici. Plant Pathology, 44(1): 116-123.

203 

CARRASCO A., BOUDET A.M., MARIGO G., 1978. Enhanced resistance of tomato plants to 

Fusarium by controlled stimulation of their naturel phenolic production. Physiological Plant 

Pathology, 12: 225-232. 

CHAIB N., 1987. Contribution à l’étude des relations entre les variations morphologiques et le 

pouvoir pathogène du Verticillium albo-atrum R. et B., forme à microsclérotes. Analyse des 

substances phytotoxiques. Diplôme de Spécialité de 3 ème cycle, Université Mohammed V .Rabat 

158p. 

CHANDLER D., HEALE J.B., GILLESPIE A.T., 1994. Effect of osmotic potential on germination 

of conidia and colony growth of Verticillium lecanii. Mycological research. 98 (part 4): 384-388 

CLAYDON, MN., M. ALLAN, J.R. HANSON and A.G. AVENT, 1987. Antifungal alkyl pyrones 

of Trichoderma harzianum. Transactions of the British Mycological Society, 88: 505-513. 

CLERIVET A., ALAMI I; BRETON F; GARCIA D; and SANIER C., 1996. Phenolic compounds 

and plant resistance to pathogenic microorganisms. Acta Botanica Gallica. 143(6): 531-538 ( 

English abstract) 

COLMER T.D., EPSTEIN E. and DVORAK J., 1995. Differential solute regulation in leaf blad of 

various age in salt sensitive wheat and a salt tolerant wheat x Lophopyrum elogatum (Host) A. 

Löve amphiploid. Plant Physiol., 108: 1715-1724. 

COOK R.J., 973. Influence of low plant and soil water potentials on diseases caused by soilborne 

fungi. Phytopathology, 63: 451-458 

COOPER R.M. and WOOD R.K.S., 1975. Regulation of synthesis of cell wall degrading enzymes 

by Verticillium albo-atrum and Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici. Physiological Plant 

Pathology 5: 135-156. 

COOPER R. M., RANKING B. & WOOD R.K.S., 1978. Cell wall degrading enzymes of vascular 

wilt fungi. II. Properties and modes of actions of polysaccharidases of Verticillium and Fusarium 

oxysporum f. sp. Lycopersici. Physiological Plant Pathology 13:101-134 

COOPER R.M. and WOOD R.K.S., 1980. Cell wall degrading enzymes of vascular fungi. III. 

Possible involvement of endopectin lyase in Verticillium wilt of tomato. Physiological Plant 

Pathology 16:285-300. 

CORDEN M.E., 1965. Influence of calcium nutrition on Fusarium wilt of tomato and 

polygalacturonase activity. Phytopathology 55: 222-224. 

CRAWFORD D.L., BARDER M.J., POMETTO III A.L. and CRAWFORD R.L., 1982. Chemistry 

of softwood lignin biodegradation by Streptomyces viridosporum. Archives of Microbiology 131, 

140-145 

CRONSHAW D.K. and PEGG G.F., 1976. Ethylene as toxin synergist in Verticillium wilt of 

tomato. Physiol. Plant Pathol. 9: 33-34 

CRUZ V. and CUARTERO J., 1990. Evaluation of characters for Ascertaining Salt Stress 

Reponses in Lycopersicon Species. J. Amer. Soc. Horst. Sci. 115(6): 1000-1003 

CRUZ R.T., JORDAN W.R. and DREW M.C., 1992. Structural changes and associated reduction 

of hydraulique conductance in root of Sorghum bicolor L. following exposure to water deficit. 

Plant Physiol 99: 203-212

204 

DATNOFF, LE., S. NEMEC and K. PERNEZNY, 1995. Biological Control of Fusarium Crown 

and Root Rot of Tomato in Florida using Trichoderma harzianum and Glomus intraradices. 

Biological Control , 5: 427-431. 

DAVET P., MESSIAEN C .M. et RIEUF P., 1966. Influence de la nutrition minérale sur la 

sensibilité aux maladies vasculaires chez la tomate. Phytopathologia Mediter., 5 : 152-153. 

DAWSON JH., 1988. Probing structure-fonction relations in heme-containing oxygenases and 

peroxidases. Science 240: 433-439 

DELAUNEY AJ. And VERMA DPS., 1993. Proline biosynthesis and osmoregulation in plants. 

Plant Journal, 4: 215-223.(abstract). 

DE MEYER G., BIGIRIMANA J., ELAD Y. and HOFFE M., 1998. Induced systemic resistance in 

Trichoderma harzianum T39 biocontrol of Botrytis cinerea. Eur. J. Plant pathol., 104: 279-286. 

DENNIS, C. & WEBSTER, J., (1971) a. Antagonistic properties of species-group of Trichoderma. 

I. Production of non volatile antibiotics. Transactions of the British Mycological Society, 57, 25-39. 

DENNIS, C., & WEBSTER, J., (1971) b. Antagonistic properties of species-group of Trichoderma. 

II. Production of volatile antibiotics. Transactions of the British Mycological Society, 57, 41-48. 

D’ERCOLE, N., P. NIPOTI, L. DI PILLO and F. GAVINA, 2000. In vitro and in vivo Tests of 

Trichoderma spp. As a Biocontrol Agent of Verticillium dahliae kleb. In Eggplants. In : Advances 

in Verticillium Research and Disease Management, APS Press, pp: 260-263. 

DIMOND A.E., 1967. The dynamic role of molecular constituents in plant parasite interactions. 

Miroch. C.J., URITANI I., Ed. Page 372. 

DOUIRA A., 1989. Contribution à l’étude de la variabilité de la spécificité parasitaire chez 

Verticillium albo-atrum R & B. DES de 3è cycle. Université Mohamed V, Rabat, 124p. 

DOUIRA A. et LAHLOU H., 1989. Variabilité de la spécificité parasitaire chez Verticillium alboatrum 

R. et B., forme à microsclérotes. Cryptogamie , Mycologie, 10 (1): 19-32. 

DUCAN D.R. and HIMELICK E.B., 1986. Conidial production of Verticillium dahliae as 

influenced by negative pressure potential. Can. J. Bot. 66: 67-71 

DUKE S.H., DUKE SO, 1984. Light control of extractable nitrate activity in higher plants. Physiol. 

Plant.,62: 485-493. 

DUCZEK L.J., 1993. The effect of soil salinity on common root rot of spring wheat and barley. 

Can. J. Plant. Sci. 73 : 323-330 

DURRAND and COOPER R.M., 1988. The role of pectinases in vascular wilt disease as 

determined by defined mutants of Verticillium albo-atrum. Physiological and Molecular Plant 

Pathology 32: 363-371. 

EASTBURN, DB., E.E. BUTLER, 1991. Effects of soil moisture and temperature on the 

saprophytic ability of Trichoderma harzianum. Mycologia, 83(3): 257-263. 

EDEN, MA., R.A. HILL and A. STEWART, 1996. Biological control of Botrytis stem infection of 

green house tomatoes. Plant Pathology , 45: 276-284.

205 

EL-ABYAD M.S., AMIRA M., ABU-TALEB and MARY S. KHALIL., 1992. Impact of salinity 

stress on soil-borne fungi of sugarbeet. III. Plant cell wall-degrading enzymes by Rhizoctonia 

solani Kühn and Sclerotium rolfsii Sacc. in vitro and in vivo. Plant and Soil 143: 75-83. 

EL-ABYAD M.S., EL SAYED M.A., EL SHANSHOURI A.R. and SABBAGH S.M., 1996. 

Antimicrobial activities of Streptomyces pulcher, S. canescens and S citreofluorescens against 

fungal and bacterial pathogens of tomato in vitro. Folia Microbiol., 41(4):321-328. 

EL AISSAMI A., 1990. Contribution à l’étude de la verticilliose de la luzerne : variabilité de la 

spécificité parasitaire et analyse de quelques mécanismes d’action du parasite. Diplôme de 

spécialité de 3 ème cycle, Université Mohammed V, Rabat, 187p. 

EL AISSAMI, 1999. Impact de l’adaptation de Verticillium albo-atrum d’origine tomate à la 

luzerne sur les mécanismes d’action du parasite et bioprotection des plantes fourragères contre la 

verticilliose. Thèse de Doctorat Es-Sciences. Université Mohammed V, Rabat, 254p. 

EL AISSAMI A., BRHADA F. et LAHLOU H., 1998. Effet de l’adaptation progressive à la 

luzerne d’un isolat de Verticillium dahliae (d’origine tomate) sur la synthèse in vitro de ses 

enzymes pectocellulytiques. Cryptogamie, Mycol. 19 (3) 227-234. 

EL AISSAMI A. et LAHLOU H., 1999. Adaptation progressive à la luzerne d’un isolat de 

Verticillium dahliae originaire de la tomate. Bulletin OEPP/EPPO 29 : 191-195. 

EL GUILLI M., BESRI M., BENYAHYA H. et JRIFI A., 2000. Effet de la salinité de l’eau 

d’irrigation sur la sévérité de la gommose du tronc d’agrumes due à Phytophthora citrophthora, 

Fruits, 55, 181-186. 

ELAD, Y., Y. HADAR, E. HADAR, I. CHET and Y. HENIS, 1981. Biological Control of 

Rhizoctonia solani by Trichoderma harzianum in Carnation. Plant Disease , 65: 675-677. 

EL MAHJOUB M., BOUZAIDI A. JOUHRI A. HAMROUNI A. et EL BEJI, 1979. Influence de la 

salinité des eaux d’irrigation sur la sensibilité du Tournesol au Macrophomina phaseoli(Maubl.) 

Aschby. Ann. Phytopathol.,11(1): 61-67 

ERIKSSON, K.-E.L., BLANCHETTE, R.A. and ANDER P., 1990. Microbial and enzymatic 

degradation of wood components. Berlin, Heidelberg, New York, London, Paris, Tokyo, Hong 

Kong, Springers-verlag. 

ERWIN D.C., 1981. Chemical control in; Fungal disease of Plants. (Ed. M.E. Mace, AA. Bell and 

C.H. Beckman), pp563-594. Academic Press, NY 

ESSALMANI H. and H. LAHLOU, 2002. In vitro study of antagonistic activity of microorganisms 

against Fusarium oxysporum f.sp. lentis. Cryptogamie-Mycologie, 23(2): 221-234. 

ESSALMANI H., 2004. Contribution à la lutte biologique contre la fusariose vasculaire (Fusarium 

oxysporum f.sp. lentis) de la lentille au Maroc. Thèse de Doctorat d’Etat, Université Mohamed V, 

156p. 

FLOOD J. and MILTON J.M., 1982. Studies on the incompatible and compatible interactions 

between Lucerne leaves and Verticillium albo-atrum. Physiological Plant Pathology, 21: 97-104. 

FLOWERS T.J., TROKE P.F. and YEO A.R., 1977. The mechanism of salt tolerance in 

halophytes. Annu. Rev. Plant Physiol. 28: 89-121.

206 

FORDYCE C. and GREEN R.J., 1963. Alteration of pathogenecity of Verticillium albo-atrum var. 

menthae. Phytopathology, 53: 701-704. 

FRANK J.A., WEBB R.E. and WILSON R.D., 1975. The effect of inoculum levels of field 

evaluation of potatoes for Verticillium wilt resistance . Phytopathology, 65: 225-228. 

FRAVEL D.R., 1996. In vitro analysis of the role of glucose oxidase from Talaromyces flavus in 

biocontrol of the plant pathogen Verticillium dahliae. Applied & Environmental Microbiology. 

62(9): 3183-3186. 

FUCHS J.G., MOENNE-LOCCOZ Y. and DEFAGO G., 1997. Nonpathogenic Fusarium 

oxysporum Strain F 0 47 Induces Resistance to Fusarium Wilt of Tomato. Plant Disease, 81: 492- 

496. 

GARAS N.A., WILHEMS S. and SAGEN J.E., 1986. Relationship of cultivar resistance to 

distribution of Verticillium dahliae in inoculated cotton plants and to growth of single conidia on 

excised stem segments. Phytopathology, 76: 1005-1010. 

GARBER R.H. and PRESLEY J.T., 1971. Relation of air temperature to development of 

Verticillium wilt in the field. Phytopathology, 61: 204-207. 

GOICOECHEA N., AGUIRREOLEA J., CENOZ S. and GARCIA-MINA J.M., 2000. Verticillium 

dahliae modifies the concentration of proline, soluble sugars, starch, soluble protein and abscisic 

acid in pepper plants. European journal of Plant Pathology 106: 19-25. 

GOJAN A., SOUSSANA J.F., PASSAMA L. et ROBIN P., 1983. Validité d’une mesure in situ 

pour l’estimation de la réduction de nitrate par des plantes entières de maïs (Zea mays L.). C.R. 

Acad. Sc. Paris, 297, série III. 617-620. 

GOUR HAR N. and DUBE H.C., 1985. Effects of ouabain and phytotoxic metabolites from 

Verticillium dahliae on the cell membranes of cotton plants. Physiological Plant Pathology 27: 

109-118 

GRAEME-COOK, K.A. and J.L. FAULL, 1991. Effect of ultraviolet induced mutants of 

Trichoderma harzianum with altered antibiotic production on selected pathogens in vitro. Can. J. 

Microbiol., 37: 659-644. 

GREEN R.J., 1981. An overview. In Fungal wilt diseases of plants. Ed. MACE M.E., BELL A.A. 

and BECKMANN C.H., Academic Press, pp: 1-24. 

GROCAN R.G., IOANNOU N., SCHNEIDER R.W., SALL M.A. and KIMBLE K.A., 1979. 

Verticillium wilt on resistant tomato cultivars in California: virulence of isolates from plants and 

soil and relation ship of inoculum density to disease incidence. Phytopathology, 69: 1176-1180. 

GROTE D. and CLAUSSEN W., 2001. Severity of root rot en tomato plants caused by 

Phytophthora nicotianae under nutrient and light stress conditions. Plant Pathology, 50 (6): 702- 

707. 

GUERRIER G., 1983. Capacité germinative des semences en fonction des doses graduelles en 

NaCl. Importance des transferts sur milieux sodés ou témoins. Can. J. Bot., 62:1791-1798 

GUERRIER G., LAHLOU H. et BOISSON C., 1985. Modifications de l’accumulation en K + , Na + 

et Ca ++ chez des jeunes plantes de tomate infectées par différentes souches de Verticillium alboatrum. 

Plant and Soil 84 : 11-22.

207 

GUPTA D.B. and HEALE J.B., 1971. Induction of cellulase (Cx) in Verticillium albo-atrum. 

Journal of General Microbiology 63: 163-173 

HAGEMAN R.H. and FLESHER D., 1960. NR activity in corn seedlings as affected by light and 

nitrate content of nutrient media. Plant Physiol.35: 700-708. 

HAGGAG W.M. and A.W. AMIN, 2001. Efficiency of Trichoderma Species in Control of 

Fusarium-Rot, Root Knot and Reniform Nematode Disease Complex on Sunflower. Pakistan 

Journal of Biological Sciences, 4(6): 679-683. 

HALL T.J. and SCHREIBER L.R., 1984. Effect of Bacillus on Verticillium wilt in Silver Maple. 

Phytopathology, 74(7): 805. 

HALL T.J., SCHREIBER L.R. and LEBEN, 1986. Effect of xylem-colonizing Bacillus sp on 

Verticillium wilt in Maples. Plant Diseases, 70(7): 521-524.. 

HAMMERSCHMIDT R., NUKLES E.M. and KUC J., 1982. Association of enhanced peroxydase 

activity with induced systemic resistance to Colletotrichum lagenarium. Physiol. Plant Path 20: 

73-82 

HAMZA, M., 1980. Réponses des plantes à la salinité. Physiol. Veg. 18: 69-81. 

HANDA S., HANDA A.K., HASEGAWA P.M. and BRESSAN R.A., 1986. Proline accumulation 

and the adaptation of cultured plant cells to water stress. Plant Physiol. 80: 938-945. 

HANSON A.D., NELSON C.E. and EVERSON E.H., 1977. Evaluation of free proline 

accumulation as an index of drought resistance using two contrasting barley cultivars. Crop Sci., 

17: 720-726. 

HARKIN J.M. and OBST J.R., 1973. Syringaldazine, an effective reagent for detecting laccase and 

peroxydase in fungi. Experientia 29, 381-387 

HARKIN J.M, LARSEN, M.J. and OBST J.R., 1974. Use of syringaldazine for detection of laccase 

in sporophores of wood-rotting fungi. Mycologia LXVI. 

HARMAN G.E., CHET I. and BAKER R., 1981. Factors affecting Trichoderma hamatum applied 

to seeds as biological agent. Phytopathology 71:569-572. 

HARMAN GE., B. LATORRE, E. AGOSIN, R. SAN MARTIN, D.G. RIEGEL, P.A. NIELSON, 

A. TRONSOMO and R.C. PEARSON, 1996. Biological and integrated control of Botrytis bunch 

rot of grape using Trichoderma spp. Biological Control, 7(3): 259-266. 

HENNI, J.E., 1987. Evaluation de l’efficacité de certains champignons antagonistes vis-à-vis de 

Verticillium dahliae. Cryptogamie, Mycologie 8(3) :203-207. 

HEWITT E.J. and CUTTING C.V., 1979. Nitrogen assimilation of plants. Acad Press, Londres. 

HOWELL A.B., FRANCOIS L., ERWIN D.C., 1994. Interactive effect of salinity and Verticillium 

albo-atrum on Verticillium wilt disease severity and yield of two alfafa cultivars. Field crops 

Research 37: 347-251 

HOWELL C.R., HANSON L.E., STIPANOVIC R.D., and PUCKHABER L.S., 2000. Induction of 

terpenoid synthesis in cotton roots and control of Rhizoctonia solani by seed treatment with 

Trichoderma virens. Phytopathology, 90: 248-252.

208 

HOWELL C.R., 2002. Cotton seedling preemergence damping-off incited by Rhizopus orysae and 

Pythium spp. and its biological control with Trichoderma spp. Phytopathology, 92: 177-180 

HUBERT D.M., 1978. Disturbed mineral nutrition. Plant Disease vol III: 163-181 

HUBERT D.M., 1980. The role of mineral nutrition in defense. Plant Disease Vol V: 381-406. 

HURKMAN W.J., TAO H.P.and TANAKA C.K., 1991. Gemin like peptides increase in barley 

root during salt stress. Plant Physiol.97: 366-374. 

IAONNOU N., SCHNEIDER R.W., GROGAN R.G., and DUNIWAY J.M., 1977. Effect of water 

potential and temperature on growth, sporulation and production of microsclerotia by Verticillium 

dahliae. Phytopathology 67: 637-644 

IRIGOYEN J, EMERICH DW, SANCHEZ-DIAZ M, 1992. Water stress induced changes in 

concentrations of proline and total soluble sugars in nodulated alfafa (Medicago sativa) plants. 

Physiol. Plantarum., 84: 55-60. 

JOHNSON L.B. and LEE R.F., 1978. Peroxidase changes in weat isolines with compatible and 

incompatible leaf rust infections. Physiological Plant pathology, 13: 173-181. 

KÄÄRIK A., 1965. The identification of mycelia of wood-decay fungi by their oxidation reactions 

with phenolic compounds. Studia Forestalia Suecia 31, 1-61 

KATERJI N., VAN HOORN JW., HAMDY A and MASTRORILLI M., 1998. Responses of 

tomatoes, a crop of indeterminate growth, to soil salinity. Agric. Water manage. 38(1):59-68. 

KEEN N.T. and LONG M., 1972. Isolation of protein-lipo-polysaccharide complex from 

Verticillium albo-atrum. Physiological Plant Pathology 2: 307-315. 

KEEN N.T., LONG M. and ERWIN D.C., 1972. Possible involvement of a pathogen produced 

protein-lipo-polysaccharide complex in Verticillium wilt of cotton. Physiological Plant Pathology 

2: 317-331. 

KIM K.K., FRAVEL D.R. and PAPAVIZAS G.C., 1988. Identification of a metabolite produced 

by Talaromyces flavus as glucose oxidase and its role in biocontrol of Verticillium dahliae. 

Phytopathology, 78:488-492. 

KIRK T.K. and SHIMADA, M., 1985. Lignin biodegradation: the microorganisms involved and 

the physiology and biochemistry of degradation by white-rot fungi. In: Biosynthesis and 

Biodegradation of wood components, ed. HIGUCHI, T., pp.579-605, San Diego, Calif. Academic 

Press. 

KÖHL J. and MOLHOECK W.M.L., 2001. Effect of water potential on conidial germination and 

antagonism of Ulocladium atrum against Botrytis cinerea. Phytopathology 91: 485-491. 

LAHLOU H, 1983. Variabilité intraclonale de la morphologie et du pouvoir pathogène de 

Verticillium albo-atrum R & B, forme à microsclérotes. Thèse de Doctorat Es-Sciences, Université 

Mohamed V, Rabat, 229p 

LAHLOU H. & BOISSON C., 1981. Pathogenecity variation in one tomato isolate of Verticillium 

albo-atrum (microsclerotia form) C.R. du 3 ème Symposium International sur les Verticillium. BARI.

209 

LARENA P., SABUQUILLO P., MELGAREJO P. and DE CAL A., 2003. Biocontrol of Fusarium 

and Verticillium wilt of tomato by Penicillium oxalicum under green and field conditions. Journal 

of Phytopathology, 150(9): 507-512. 

LARKIN R.P., and FRAVEL D.R., 2002. Effect of Varying Environmental Conditions on 

Biological Control of Fusarium wilt of tomato by Nonpathogenic Fusarium spp. Phytopathology 

92: 1160-1166. 

LEMRARI M., 1992. Toxinogénèse de Penicillium italicum et Penicillium digitatum isolés des 

fruits de cinq variétés d’agrumes. Diplôme d’Etudes Supérieures de 3 ème cycle. Université 

Mohamed, Rabat, 139p. 

LEWIS J.A. and PAPAVIZAS G.C., 1987. Applications of Trichoderma and Gliocladium in 

alginate pellets for control of Rhizoctonia damping-off. Plant Pathol. 36: 438-446. 

LIFSHITZ, R., WINDHAM M.T. & BAKER, R., (1986). Mechanism of Biological Control of 

Preemergence Damping-off of Pea by Seed Treatment with Trichoderma spp. Phytopathology, 76, 

720-725. 

LORITO, M., G.E. HARMAN, C.K. HAYES, R.M. BROADWAY, A. TRONSMO, S.L. WOO 

and A. DI PIETRO, 1993. Chinolytic enzymes produced by Trichoderma harzianum: antifungal 

activity of purified endochinase and chetobiosidase. Phytopathology, 83(3): 302-307. 

LOUVET J. et ALABOUVETTE C., 1988. Les conditions de développement du parasitisme 

racinaire. Phytoma 402 : 32-34. 

MAC DONALD, J.D., 1984. Salinity effects on the susceptibility of Chrysanthemeum roots to 

Phytophthora Cryptogea. Phytopathology 74: 621-624 

MAGNE C. and LARHER F., 1992. High sugar content of extracts interferes with colorimetric 

determination of amino acids free proline. Annal. Biochem., 200: 115-118. 

MANN, B., 1962. Role of pectic enzymes in Fusarium-wilt syndrome. Transactions of the British 

Mycological Society 45: 169-178. 

MANSOORI B., MILTON J.M. and SMITH C.J., 1995. Isolation and partial purification of 

phytotoxin related to pathogenic Verticillium species. J. Phytopathology 143: 33-36. 

MARAITRE H. 1973. Changes in polyphenoloxydases and peroxydases in muskmelon (Cucumis 

melo L.) infected by Fusarium oxysporum f.sp.melonis. Physiol. Plant. Path. 3: 29-49 

MAROIS J.J., JOHNSTON S.A., DUNN M.T. and PAPAVIZAS G.C., 1982. Biological control of 

Verticillium wilt of Eggplant in field. Plant Diseases, 66, (12): 1166-1168. 

MARTINEZ C., BESNARD O. & BACCOU J.C., 1999. Stimulation des défenses naturelles des 

plantes. Phytoma, 521 :16-19. 

MATTA A. and GARIBALDI A., 1977. Control of Verticillium of tomato by preinoculation with 

avirulent fungi. Netherlands J. Pl. pathol. 83(Suppl. 1): 457-462. 

MAXWELL DP and BATEMAN DF, 1967. Changes in the activities of some oxidases in extracts 

of Rhizoctonia-infected bean hypocotyls in relation to lesion maturation. Phytopathology 57: 132- 

136 (Abstract).

210 

MELLOUK H.A. and HORNER C.E., 1975. Cross protection in mints by Verticillium nigrescens 

against V. dahliae. Phytopathology, 65: 767-769. 

MESSIAEN C.M. et LAFON R., 1971. Les maladies des plantes maraîchères. INRA, Paris, 441p. 

MEYER R., SLATER V. and DUBERY I.A., 1994. A phytotoxic protein-lipopolysaccharide 

complex produced by Verticillium dahliae. Phytochemistry 35(6): 1449-1453 

MICKAEL A.H. and NELSON P.E., 1972. Antagonistic effect of soil bacteria on Fusarium 

roseum from carnation. Phytopathology, 42:315 

MILLAR R.L., KALB D.W. and KEINATH A.P., 1984. Biological and chemical control of 

Verticillium wilt of alfafa. Phytopathology, 74(7):805. 

MISRA N. and DWIVEDI U.N., 1990.Nitrogen assimilation in germating phaseolus aureus seeds 

under saline stress. J. Plant Physiol., 135: 719-724 

MISRA N. and DWIVEDI U.N., 1995. Carbohydrate metabolism during seed germination and 

growth in green gram under saline stress. J. Plant Physiol., 33(1): 33-38. 

MITCHELL J.P., SHENNAN C. and GRATTAN S.R., 1991. Development changes in tomato fruit 

composition in response to water deficit and salinity. Physiologia Plantarum 83: 177-185. 

MICHAIL S.H. and CARR A.J.H., 1966. Use of culture filtrate as rapid technique for screening 

Lucerne to Verticillium albo-atrum. Trans. Br. Mycol. Soc., 49: 133-138. 

MOREAU C., 1974. “Les moisissures toxiques dans l’alimentation” Masson et cie, 2ème édition 

471 p. 

MUSSEL H.W., 1973. Endopolygalacturonase ; evidence for involvement in Verticillium wilt of 

cotton. Phytopathology 63: 62-70. 

MUNNS R. and WEIR R., 1981. Contribution of sugars to osmotic adjustment in elongating and 

expanded zones of wheat leaves during moderate water deficits at low light levels. Aust. J. Plant 

Physiol., 8: 93-105 

MURRAY F.R., LEWELLYN W.J., PEACOCK W.J. and DENIS E.S., 1997. Isolation of the 

glucose oxidase gene from Talaromyces flavus and characterisation of its role in the biocontrol of 

Verticillium dahliae. Curr genet, 32:367-375. 

NACHMIAS A., BUCHNER V. and KRIKUN J., 1982. Comparaison of proteinlipopolysaccharide 

complexes produced by phytopathogenic and non phytopathogenic strains of 

Verticillium dahliae Kleb. from potato. Physiological. Plant Pathology 20: 213-221. 

NACHMIAS A., BUCHNER V., and BURSTEIN V., 1985. Biological and immunochemical 

characterization of low molecular weight phytotoxin isolated from protein-lipopolysaccharide 

complex produced by potato isolate of Verticillium dahliae Kleb. Physiological. Plant Pathology 

26: 43-55. 

NACHMIAS A.., KAUFMAN Z., LIVESCU L., TSROR L., MEIRI A.. and CALIGARI 

P.D.S.,1993. Effects of salinity and its interaction with disease incidence on potatoes grown in hot 

climates. Phytoparasitica 21(3); 245-255 

NORMANLY J., SLOVIN J.P. and COHEN J.D., 1995. Rethinking auxin biosynthesis and 

metabolism. Plant Physiol. 107:323-329

211 

ÖNCEL I., ÜSTÜN A.S. and KELES Y., 1996. Proline accumulation in peppers (Capsicum 

annuum L.) resistant and susceptible to root rot (Phytophthora capsici Leon.) Turkhish Journal of 

Botany, 20: 489-495 

ORENSTEIN J., NACHMIAS A., COLON L.T. and HOOGENDORN J., 1994. The effect of 

Verticillium dahliae phytotoxin on germination of potato pollen. Israel Journal of plant Sciences. 

42(1): 29-36 

OZBAY, N. and S.E. NEWMAN, 2004. Effect of Trichoderma strains to colonize Tomato Roots 

and improve Transplant growth. Pakistan Journal of Biological Sciences, 7(2): 253-257. 

PACE G.M., VOLK R.J.and JACKSON W.A., 1990. Nitrate reductase in response to CO 2 limited 

photosynthesis. Relationship to carbohydrate supply and nitrate reductase activity in maize 

seedlings. Plant Physiol., 92: 286-292. 

PAGE M.S., GRAY F.A., LEGG D.E. and KEARL W.G., 1992.Economic impact and management 

of Verticillium wilt on irrigated alfalfa hay production in Wyoming. Plant Disease, 76: 504-508. 

PAYEN J., BASILICO J.C., TABBACHE S. et HASSAN M., 1983. Méthodes biologiques rapides 

de détection des moisissures toxinogènes. Microbiol. Alim. Nutri. 1: 211-219 

PEGG. G.F.,1965. Phytotoxin production by Verticillium albo-atrum. Nature, Lond., 208 :1228- 

1237. 

PEGG G.F., 1981. Biochemistry and physiology of pathogenesis. In Fungal Wilt Diseases of 

Plants. Eds. M E Mace, A A Bell and C H Beckman. pp 193-253. Academic Press, New York. 

PEREZ-ALFOCEA F, ESTAN M.T., CARO M., GUERRIER G, 1993. Osmotic adjustment in 

Lycopersicon esculentum and L. pennellii under NaCl and polyethylene glycol 6000 iso-osmotic 

stresses. Plant Physiology, 87: 493-498 

PEREZ-ALFOCEA F., BALIBREA M.E., CRUZ A.S. and ESTAN M.T., 1996. Agronomical and 

physiological characterization of salinity tolerance in commercial tomato hybrid. Plant & Soil. 

180(2): 251-257. 

POLLOCK C.J. and DRYSDALE R.B., 1976. The role of phenolic compound in the resistance of 

tomato cultivars to Verticillium albo-atrum. Phytopathol. Z. 86 : 56-66 

P.N.T.T.A., 1999. Bulletin Mensuel d’information et de liaison du Programme National de transfert 

de technologie en agriculture. N° 57, juin 1999. 

PULLMAN G.S. and DEVAY J.E., 1981. Effect of soil flooding and paddy rice culture on the 

survival of verticillium dahliae and incidence of Verticillium wilt in cotton. Phytopathology, 71: 

1285-1289. 

PULLMAN G.S. and DEVAY J.E., 1982. Epidemiology of Verticillium wilt of cotton : A 

relaionship between inoculum density and disease progression. Phytopathology, 72: 549-554. 

QADER F., 1997. Contribution à l’étude de quelques effets physiologiques et biochimiques à la 

salinité du milieu en relation avec le pouvoir pathogène de Septoria tritici chez des cultivars de blé 

tendre. D.E.S., Université Mohamed Premier, Oujda, 142p. 

QUIROGA M. GUERRERO C. BOTELLA M.A. and VALPUESTA V., 2000. A tomato 

Peroxidase Involved in the Synthesis of Lignin and Suberin. Plant Physiol. 122(4): 1119-1128

212 

RAHOUTI M., 1995. Contribution à l’étude des activités métaboliques de Micromycètes vis-à-vis 

de certains composés phénoliques dérivés de la lignine. Thèse de Dotorat d’Etat es-sciences. 

Université Hassan II. 176p 

RAHOUTI M., BENOIT-GUYOD J.-L., SEIGLE-MURANDI F. and GUIRAUD P., 1995. 

Sensitivity and Specificity of phenoloxidase reactions of 1059 strains and species of Miromycetes 

cultivated on malt/agar medium. World Journal of Microbiology & Biotechnology 11, 497-501 

RANGARAJAN S., LILLY M.S., PREETI V. and SUDHA N., 2003. Biological suppression of 

rice diseases by Pseudomonas spp. Under saline soil conditions. Plant and Soil, 251:73-82. 

RATHERT G., 1984. Sucrose and starch content of plant parts as possible indicators for salt 

tolerance. Aust. J. Plant Physiol. 5: 491-495. 

REGRAGUI A., LAHLOU H. et ZAID H., 1989. La prémunition de la tomate contre la 

verticilliose causée par Verticillium albo-atrum, forme à microsclérotes. Conséquences 

physiologiques du phénomène. Cryptogamie, Mycol. 10 (3) : 243-256 

REGRAGUI A. ZAID H. and LAHLOU H., 1990.Verticillium albo-atrum effect on nitrate 

reductase activity in young tomato plants. 8 th congress of the Mediterranean phytopathological 

union, Agadir (Morocco) October 28 th . 

REGRAGUI A., RAHOUTI M. et LAHLOU H., 2003. Effet du stress salin sur Verticillium alboatrum: 

pathogénécité et production d’enzymes cellulolytiques in vitro. Cryptogamie, Mycol. 24 

(2) : 167-174. 

REGRAGUI A. and LAHLOU H., 2005. Effect of Salinity on in vitro Trichoderma harzianum 

Antagonism against Verticillium dahliae. Pakistan Journal of Biological Sciences 8 (6):872-876 

REUVENI R. and BOTHMA G.C., 1985. The relationship between peroxydase activity and 

resistance of Spaerotheca fulginea in melons. Phytopathol Z. 114: 260-267 

REUVENI R. and FERREIRA J.F., 1985. The relationship between peroxydase activity and the 

resistance of tomatoes (Lycopersicon esculentum) to Verticillium dahliae. Phytopath. Z. 112: 193- 

197 

REUVENI R., SHIMONI M., KARCHI Z. and KUC J., 1992. Peroxydase Activity as Biochemical 

Marker for Resistance of Muskemelon (Cucumis melo) to Pseudoperonospora cubensis. 

Phytopathology 82: 749-753 

RICHARDS L., 1969. Diagnosis and improvement of saline and alkali soils. United States 

Department of Agriculture. Agricutural handbook n°60:160pp 

RHODES D., 1987. Metabolic responses to stress. In: The biochemistry of plants, 12, Physiology of 

metabolism, Davis D.D, ed., Acad. Press., pp:201-241. 

ROBERTS E., KUTCHAN T., KALLATTUKUDY P.E., 1988. Cloning and sequencing of cDNA 

for highly anionic peroxidase from potato: the induction of its mRNA in suberizing potato tubers 

and tomato fruits. Plant Mol Biol, 11: 15-26 

ROBIN P., CONJERO G., TRANCHANT J.P., PASSAMA L. et SALSAC L., 1983a. Mesure de la 

réduction du nitrate dans les feuilles intactes ; Physiol. Veg., 21 : 123-128. 

ROBIN P., CONJERO G., PASSAMA L. et SALSAC L., 1983b. Evaluation de la fraction 

métabolisable du nitrate par la mesure « in situ » de sa réduction. Physiol. Veg., 21 : 115-122.

213 

RUSH D.W. and EPSTEIN E., 1981. Comparative studies on sodium, potassium and chloride 

relations of a wild halophytic and a domestic salt-sensitive tomato species. Plant Physiol., 68: 

1308-1313. 

RUSSEL S., 1975. The role of cellulase produced by Verticillium albo-atrum in Verticillium wilt of 

tomatoes. Phytopath. Z. 82: 35-48. 

S.A.M., 2002. Situation de l’Agriculture Marocaine 2002. Direction de la Production végétale. 

Ministère de l’agriculture, du développement rural et des eaux et forêts. p 71-75 

SAMANE S., TANTAOUI A. and ESSADAOUI M., 1991. Mycoflora of Moroccan « Greek 

style » black olives. II. Toxicogenesis, Microbial. Alim. Nutr. 9: 335-352. 

SCHRADER L.E., RITENOUR G.L. EILRICH G.L. and HAGEMAN R.H., 1968. 

Some characteristics of N.R from higher plants. Plant Physiol, 43: 930-940 

SCHRADER L.E., CATALDO D.A., PETERSON D.M. et VOGELLANG R.D., 1974. Nitrate 

reductase and glucose 6 phosphate deshydrogenase activities as influenced by leaf age and addition 

of protein to extraction media. Plant Physiol. 32: 337-341 

SCHWAB K.B. and GAFF D.F., 1986. Sugar and ion content in leaf tissue of several drought 

tolerant plants under water stress. J. Plant Physiolo., 125: 257-265 

SEBTI S., 1982. Essai d’analyse des composantes du pouvoir pathogène de Verticillium alboatrum 

R. & B. Thèse de Doctorat de 3eme cycle Univ..Paris sud. Orsay.130p. 

SCHACHTMAN D.P. and MUNNS R., 1992. Sodium accumulation in leaves of Triticum species 

that differ in salt tolerance. Aust. J. plant Physiol. 19: 331-340. 

SCHNATHORST W.C. and MATHRE D.E., 1966. Host range and differentiation of severe form 

of Verticillium albo-atrum in cotton. Phytopathology, 56: 1156-1161 

SHALHEVET.J. and YARON B., 1973. Effect of soil and water salinity on tomato growth. Plant 

and soil 39, 285-292 

SHANNON, M.C., 1984. Breeding selection and the genetic of salt tolerance implant. Eds: Rich. 

R.D.C. Staples et Garyh. 

SIVARAMAKRISHNAN S., PATELL V.Z., FLOWERS T.J. and PEACOCK J.M., 1988. Proline 

accumulation and nitrate reductase activity in contrasting sorghum lines during mid-season drought 

stress. Plant Physiol., 74: 418-426 

SMITH C.A. and MAC HARDY W.E., 1982. The significance of tomatine in host response of 

susceptible and resistant tomato isoline infected with to races of Fusarium oxysporum f.sp. 

lycopersici. Phytopathology, 72: 415-419. 

SLAMA F., 1986. Intervention des racines dans la sensibilité ou la tolérance à NaCl des plantes 

cultivées. Agronomie, 6 : 651-658. 

SLAMA F., 1991. Transport de Na + dans les feuilles et sensibilité des plantes à NaCl. I. Evaluation 

d’un effet piège au niveau des tiges. Agronomie, 11, 275-281 

SNAPP S.S. and SHENNAN C., 1994. Salinity Effects on Root Grown and Senescence in Tomato 

and the Consequence for Severity of Phytophthora Root Rot Infection. J. Amer. Soc. Hort. Sci.,119 

(3): 458-463

214 

SCHNATHORST W.C. and MATHRE D.E., 1966. Cross protection in cotton with strains of 

Verticillium albo-atrum. Phytopathology, 56: 1204-1209. 

SOLIMAN M.F. and KOSTANDI S.F., 1998. Effect of Saline Environment on Yield and Smut 

Disease Severity of Different Corn Genotypes (Zea mays L.). J. Phytopathology, 146:185-189. 

SOLTANI A., HAJJI M. et GRIGNON C., 1990. Recherche des facteurs limitant la nutrition 

minérale de l’orge en milieu salé. Agronomie, 10 : 857-866. 

SOMMERS L.E., HARRIS R.F., DALTON F.N., and GARDNER W.R., 1970. Water potential 

relations of three root-infecting Phytophthora species. Phytopathology 60: 932-934. 

SRIVASTA H.S., 1980. Regulation of nitrate reductase activity in higher plants. Photochemistry, 

19: 725-733. 

STANDAERT, J.Y., 1975. Influence de la force ionique et du rapport Na/Ca du milieu sur la 

sensibilité de la tomate à la fusariose vasculaire. Thèse de Docteur en Sciences Agronomiques, 

Université Catholique de Louvain, 77p 

STANDAERT J.Y., MARAITE H. MYTTENAERE C. et MEYER J.A., 1978. Etude de 

l’influence de la concentration saline et du rapport Na/Ca du milieu nutritif sur la sensibilité de la 

tomate à la fusariose vasculaire. Plant and soil 50: 269-286. 

STEFANOVA, M., A. LEIVA, L. LARRINAGA and M.F. COURRONE, 1999. Metabolic activity 

of Trichoderma spp. isolates for control of soilborne phytopathogenic fungi. Rev. Fac. Agro. (Luz) 

, 16 : 509-516. 

SUBBARO K.V. and. MICHAILIDES T.J., 1993 a. Virulence of Fusarium species causing fig 

endosepsis in cultivated and wild caprifig Phythopathology 83: 527-533 

SUBBARO K.V., MICHAILIDES T.J. and MORGAN D.P., 1993 b. Effects of Osmotic Potential 

and Temperature on Growth of Two Pathogens of Figs and a Biological Control Agent. 

Phytopathology 83: 1454-1459 

SULISTYOWATI L. and KEANE P.J., 1992. Effect of soil salinity and water content on stem rot 

caused by Phytophthora citrophthora and accumulation of phytoalexin in Citrus roostocks. 

Phytopathology 82: 771-777. 

SWIECKI T.J. and Mac DONALD J.D., 1991. Soil Salinity Enhances Phytophthora Root Rot of 

Tomato but Hinders Asexual Reproduction by Phytophthora parasitica 

J. Amer. Soc. Hort. Sci. 116 (3) :471-477 

TAL M., DEHAN K. and HEIKIN H., 1978. Salt tolerance in the wild relative of cultivated 

tomato. Responses of callus Tissue of Lycopersicon esculentum, L. peruvianum and Solanum 

pennellii to high salinity. Z. pflanZenphysiol. 86: 231-240 (Abstract). 

TAD M. and SHANNON M.C., 1983. Salt tolerance in the wild relatives of the cultivated tomato 

responses of Lycopersicon esculentum, L. perivianum pennellii to high salinity. Z. pflan Zenphysio. 

86: 231-240 (Abstract). 

TJAMOS E.C., 1984. Race 2 and defoliating strain of Verticillium dahliae in Greece and other 

mediterranean countries. Phytopathologia Mediterranean. 23, 216. 

TJAMOS E.C. and MABRYNAKI N., 1990. Control of fungal wilt disease of melon by application 

of soil solarization in the field. 8 th Congress of the Mediterranean Phytopathological Union, pp423.

215 

TROLL W. and LINDSLEY J., 1955. A photometric method for determination of proline. J. Biol. 

Bioch., 215: 655-660. 

TZENG D.D. and DE VAY J.E., 1985. Physiological responses of Gossypium hirsutum L. to 

infection by defoliating and non defoliating pathotypes of Verticillium dahliae Kleb. Physiol. Plant 

pathol., 26: 57-72. 

ULLAH S.M., GERZABEK M.H. and SONJA G., 1994. Effect of seawater and soil salinity on ion 

uptake, yield and quality of tomato (Fruit). Bodenkultur., 45(3): 227-237. 

VASILIEV A.O., KAPKOV D.V., KANDROR K.V. and STEPPANOV A.S., 1992. Expression 

and regulation of casein kinase 2 during heat shock in Verticillium dahliae. Molecular reproduction 

and development 31: 42-47 

VIAL, L., (1989). Critères de qualité de la production d’un biopesticide à base de Trichoderma 

harzianum RIFAI. Mémoire. Ecole Nationale des Ingénieurs des Travaux Agricoles, Bordeaux. 

VISSER S. and HATTING M.J., 1980. Criteria for quantal host response of tomato plants to 

infection by Verticillium dahliae. Plant disease, 64: 207-208. 

VOETBERG G.S. and SHARP R.E., 1991. Growth of the maize primary root at low water 

potentials. III. Role of increased proline deposition in osmotic adjustment. Plant physiol., 96: 1125- 

1130. 

WETTEN R.W., MAC KAY J.J. and SEDEROFF R.R., 1998. Recent advances understanding 

lignin biosynthesis. Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Boil. 49:585-609 (abstract). 

WHITNEY P.J., HEALE J.B. and VAUGHAN J.G.,1972. Protein changes in vascular wilt diseases 

of Lucerne caused by Verticillium albo-atrum R & B. Journal of experimental botany 23 (75): 400- 

414. 

WINDHAM, MT., Y.ELAD, R.A. BAKER, 1986. Mechanism for increased plant growth induced 

by Trichoderma spp. Phytopathology, 76 (5): 518-521 

WILLIAM R., 1993. Manipulating the environment to prevent infection. In: Managing diseases in 

greenhouse crops .Eds by the American Phytopathological Society 151-175 

WYMORE L.A. and BAKER R., 1982. Factors affecting cross protection in control of Fusarium 

wilt of tomato. Plant Disease, 66(10): 908-910. 

WOOD R.K.S.; 1960. Pectic and cellulytic enzymes in plant diseases 

(2-3). Abstract. Annu. Rev. Physiol. 11: 299-322.

216 

ANNEXES 

ANNEXE 1 : Milieux de culture et solution d’arrosage 

- Milieu PDA : 

*PDA (Difco) 

40g 

*Gélose 

5g 

*Eau distillée 

1L 

Autoclaver à 110°c pendant 30 minutes 

- Milieu Malt 

*Extrait de malt 20g 

*Gélose 

20g 


1L 

Autoclaver à 110°c pendant 30 minutes 

- Milieu Czapeck liquide 

*NaNO3 

2g 

*KH2 PO4 

1g 

*MgSO4 7H2O 0.5g 

*KCL 0.5g 

*FeSO4 7H2O 0.01g 

*Saccharose 

30g 


1L 

Autoclaver à 120°C pendant 30 minutes 

-Solution nutritive d’arrosage 

*Ca(NO3)2 4H2O 0.935g 

*Mg SO4 7H2O 0.544g 

*KH2PO4 0.181g 

*K2H PO4 0.058g 

*KNO3 0.353g 

*NH4 NO 0.023g 

*(NH4)2 SO4 0.086g 

*Oligo-élément (a) 

0.05ml 

*Complexe ferrique(b) 0.5ml 


1000ml 

(a) ZnSO4 7H2o : 100mg - MmnCl2 4H2O:100mg - H3BO3 :100mg 

FeCl3 6H2O :50mg – CuSO4 5H2O64mg – KI:10mg 

NH4 MoO4 :10mg – Eau distillée qsp :1000ml 

(b) Dissoudre 21g de complexon II (EDTA) dans 286ml de KOH N et 

ajouter 24.9mg FeSO4 7H2O. Ajuster à environ 950ml avec de l’eau distillée 

puis agiter le tout à l’air pendant une nuit.Ajuster le pH à 5.5 avec de la 

potasse. Compléter à 1000ml.

217 

ANNEXE 2 : Electrophorèse SDS-PAGE 

A. Solutions stocks 

Utiliser de l’eau bidistillée fraiche. Toutes les solutions doivent être filtrées sur 

papier Wattman n°1 après dissolution. Les pH des solutions doivent être vérifiés 

avant chaque utilisation 

1. Solution d’acrylamide-bis : protogel 

*Acrylamide 

30g 

*Bis-acrylamide 0.8g 

*H2O 

1000ml 

Conserver à l’obscurité à 4°C (1 à 2 mois) 

2. Tampon pour gel de séparation (resolving gel buffer) 

*Tris-Cl (1.5M) 36.3g 

*H2O qsp 

200ml 

Ajuster le pH à 8.8 avec HCl. A conserver deux mois à 4°C 

3. Tampon pour gel de concentration (Staking gel buffer) 

*Tris-Cl 1M 

6g 

*H2O qsp 

50ml 

Ajuster le pH à 6.8 avec HCl 

4. Solution de SDS à 10% (Sodium dodecyl sulfate) 

*SDS 

10g 

*H2O 

100ml 

Conserver à la température ambiante plusieurs semaines. 

5. tampon de migration x 5 

*Tris-base 15.1g 

*Glycine 

94g 

*SDS 

50ml de la solution SDS à 10%. A ajouter 

au dernier moment. 

6. Solution de persulfate d’ammonium à 10% 

A préparer au dernier moment 

*Persulfate 

100mg 

*H2O 

1ml

218 

B. Préparation des gels 

1. Gel de séparation à 10% d’acrylamide 

Mélanger dans une fiole à vide de 500ml : 

Protogel 

16.7ml 

Tris-Cl 1.5M 

12.5ml 

SDS 

0.5ml 

H2O 

19.5ml 

Ajouter goutte à goutte 

Persulfate d’ammonium 500µl 

TEMMED 20µl 

Dégazer sous vide jusqu’à disparition complète des bulles. Couler immédiatement 

le gel avec une pipette de 5ml. Mettre un mince filet d’eau à la surface du gel pour 

éviter toute évaporation 

2. Gel de concentration (Staking) à 5% 

Mélanger dans une fiole à vide de 250ml 

Protogel 

1.7ml 

Tris-HCl 1M 1.25ml 

SDS 

0.1ml 

H2O 

6.8ml 

Mélanger et dégazer sous vide comme précédemment. Pendant ce temps, éliminer 

l’eau à la surface du gel de séparation. Rincer trois fois avec le tampon Tris-HCl 1M 

dilué au ¼. Eliminer le maximum de tampon avec du papier Joseph. 

Après dégazage, ajouter 

Persulfate d’ammonium 100µl 

TEMED 10µl 

Couler sur le gel précédent avec une pipette de 1ml. S’assurer de la polymérisation 

du gel dans le liquide qui reste dans la fiole. 

Placer le peigne entre les deux plaques de verre pour former les puits. Après 

polymération du gel, le peigne est enlevé et les puits sont rincés. 

C. Préparation des extraits avant dépôt 

1. Solution de traitement des échantillons 

*Tampon TrisHCl 0.5M 1.25ml

219 

*SDS à 10% 

2ml 

*Glycérol 

1ml 

*mercaptoéthanol 

0.5ml 

*Bleu de bromophénol à 1% 0.20ml 

2. traitement des échantillons 

Mélanger l’échantillon à analyser volume à volume (ex 50µl + 50) dans la solution 

de traitement. 

Chauffer 5 minutes à 100°C en faisant un trou dans l’eppendorf. Les échantillons 

peuvent être conservés à –20°C et réchauffés avant utilisation. 

D. Courbe étalon des protéines standards 

Log PM 

2,4 

2,3 

2,2 

2,1 

2 

1,9 

1,8 

1,7 

1,6 

1,5 

1,4 

0,02 0,14 0,28 0,35 0,79 

mobilité relative 

Les zymogrammes sont établis après chaque révélation. Le rapport frontal est 

calculé par la suite comme suit : 

RF= distance parcourue par la bande 

Distance parcourue par le front de migration 

Les PM des différentes bandes sont déterminés par extrapolation de la courbe 

étalon des protéines standards.

Verticillium - Toubkal

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