Laboratoire de recherche en virologie médicale - Institut Louis ...
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permettant la prév<strong>en</strong>tion <strong>de</strong> la ciguatéra; tests pouvant être utilisés au niveau <strong>de</strong>s<br />
algues, <strong>de</strong>s poissons ou chez l'homme", mars 2007)<br />
2- Développem<strong>en</strong>t et validation <strong>de</strong>s métho<strong>de</strong>s <strong>de</strong> détection <strong>de</strong>s CTXs<br />
Trois métho<strong>de</strong>s <strong>de</strong> détection in vitro pouvant, chacune, déboucher sur un test <strong>de</strong> très haute<br />
s<strong>en</strong>sibilité et facilem<strong>en</strong>t automatisable, ont été explorées :<br />
Test "interaction ligand-récepteur (ILR)"<br />
Il permet <strong>de</strong> doser les CTXs prés<strong>en</strong>tes dans les cellules <strong>de</strong> Gambierdiscus ou la chair <strong>de</strong>s<br />
poissons, par mesure <strong>de</strong> leur affinité vis-à-vis <strong>de</strong> récepteurs membranaires (Canal-Na + )<br />
isolés <strong>de</strong> cerveaux <strong>de</strong> rats. Utilisé <strong>en</strong> routine au laboratoire, sa validation à gran<strong>de</strong> échelle a<br />
débuté dès 2004 dans le cadre <strong>de</strong>s 2 essais-pilotes d'évaluation du risque ciguatérique à<br />
Tubuai et Nuku Hiva.<br />
En 2006, il a ess<strong>en</strong>tiellem<strong>en</strong>t servi à réaliser le criblage toxinique d'une tr<strong>en</strong>taine <strong>de</strong><br />
nouvelles souches <strong>de</strong> Gambierdiscus et <strong>de</strong> 61 échantillons pisciaires (45% carnivores vs. 55%<br />
d'herbivores) originaires <strong>de</strong> Moruroa. Nos résultats indiqu<strong>en</strong>t qu'<strong>en</strong>tre mars 2005 et mars<br />
2006, un fort pourc<strong>en</strong>tage <strong>de</strong>s poissons du lagon <strong>de</strong> Moruroa prés<strong>en</strong>tait <strong>en</strong>core une toxicité<br />
résiduelle (21% seulem<strong>en</strong>t <strong>de</strong> poissons testés atoxiques) alors même que la totalité <strong>de</strong>s<br />
souches <strong>de</strong> la micro-algue s'est avérée atoxique.<br />
En revanche, nous n'avons que peu progressé dans nos t<strong>en</strong>tatives <strong>de</strong> déterminer le seuil <strong>de</strong>s<br />
valeurs ILR à partir <strong>de</strong>squelles le poisson testé va effectivem<strong>en</strong>t provoquer <strong>de</strong>s symptômes<br />
d'intoxication chez l'homme. Une <strong>de</strong>s difficultés majeures r<strong>en</strong>contrées dans ce type d'étu<strong>de</strong><br />
est l'impossibilité, souv<strong>en</strong>t, <strong>de</strong> récupérer les restes <strong>de</strong>s poissons à l'origine d'intoxications<br />
chez les pati<strong>en</strong>ts, <strong>en</strong> vue d'analyses ultérieures. Un appel à pati<strong>en</strong>ts intoxiqués + relief <strong>de</strong>s<br />
repas par la voie <strong>de</strong>s médias, <strong>en</strong> collaboration avec la Direction <strong>de</strong> la Santé, est prévu <strong>en</strong><br />
2007.<br />
Le pot<strong>en</strong>tiel du test ILR pour la <strong>recherche</strong> <strong>de</strong> substances actives dans le traitem<strong>en</strong>t <strong>de</strong> la<br />
ciguatéra a égalem<strong>en</strong>t été abordé <strong>en</strong> 2006, <strong>en</strong> collaboration avec l'<strong>Institut</strong> pour la<br />
Recherche et le Développem<strong>en</strong>t (IRD) <strong>de</strong> Nouvelle-Calédonie. Des essais préliminaires<br />
réalisés sur les extraits d'une quinzaine <strong>de</strong> plantes issues <strong>de</strong> la pharmacopée traditionnelle<br />
calédoni<strong>en</strong>ne (dont Argusia arg<strong>en</strong>tea ou faux tabac) ont donné <strong>de</strong>s résultats <strong>en</strong>courageants<br />
pour au moins cinq d'<strong>en</strong>tre elles. Il convi<strong>en</strong>t maint<strong>en</strong>ant <strong>de</strong> les confirmer après<br />
fractionnem<strong>en</strong>t bioguidé <strong>de</strong>s extraits bruts d'intérêt.<br />
Test <strong>de</strong> cytotoxicité<br />
Il permet <strong>de</strong> doser les CTXs algales ou pisciaires, par mesure <strong>de</strong> leurs effets sur la viabilité<br />
<strong>de</strong> lignées cellulaires <strong>en</strong> culture : les Neuro-2A sur laquelle le test a été mis au point au<br />
laboratoire, et plus récemm<strong>en</strong>t les HEK-µ1, génétiquem<strong>en</strong>t modifiée pour exprimer<br />
préfér<strong>en</strong>tiellem<strong>en</strong>t un nombre élevé <strong>de</strong> canaux Na + . Ce volet n'a que peu avancé <strong>en</strong> 2006 <strong>en</strong><br />
raison notamm<strong>en</strong>t :<br />
• <strong>de</strong> difficultés croissantes à s'approvisionner <strong>en</strong> certains réactifs (e.g. vératridine et<br />
ouabaïne),<br />
• d'un vieillissem<strong>en</strong>t <strong>de</strong> la lignée Neuro-2A <strong>en</strong>tret<strong>en</strong>ue <strong>de</strong>puis plusieurs années à L’ILM et<br />
qui nécessite d'être r<strong>en</strong>ouvelée,<br />
• d'un r<strong>en</strong><strong>de</strong>m<strong>en</strong>t insuffisant <strong>de</strong>s cultures <strong>de</strong> la lignée HEK-µ1, qu'il est toutefois possible<br />
d'améliorer grâce à l'utilisation <strong>de</strong> fioles <strong>de</strong> cultures prés<strong>en</strong>tant une meilleure qualité<br />
d'adhésion.<br />
Immuno-détection <strong>de</strong>s CTXs<br />
Contrairem<strong>en</strong>t aux 2 tests précé<strong>de</strong>nts qui permett<strong>en</strong>t <strong>de</strong> distinguer les différ<strong>en</strong>tes CTXs <strong>en</strong><br />
fonction <strong>de</strong> leur toxicité, ce type <strong>de</strong> détection est basée sur une reconnaissance structurale<br />
<strong>de</strong>s CTXs, au moy<strong>en</strong> d'outils produits par immunochimie classique i.e. anticorps polyclonaux<br />
(Ac) ou monoclonaux (Acm), ou issus du génie génétique i.e. anticorps recombinants (AcR).<br />
L'état d'avancem<strong>en</strong>t <strong>de</strong> ces travaux est détaillé dans le 1 er rapport d'étape du contrat <strong>de</strong><br />
<strong>recherche</strong> ILM-IPNC portant sur la "Recherche et mise au point <strong>de</strong> tests <strong>de</strong> détection<br />
<strong>Institut</strong> <strong>Louis</strong> Malardé – Rapport annuel 2006 42