Laboratoire de recherche en virologie médicale - Institut Louis ...

permettant la prévention de la ciguatéra; tests pouvant être utilisés au niveau des
algues, des poissons ou chez l'homme", mars 2007)
2- Développement et validation des méthodes de détection des CTXs
Trois méthodes de détection in vitro pouvant, chacune, déboucher sur un test de très haute
sensibilité et facilement automatisable, ont été explorées :
Test "interaction ligand-récepteur (ILR)"
Il permet de doser les CTXs présentes dans les cellules de Gambierdiscus ou la chair des
poissons, par mesure de leur affinité vis-à-vis de récepteurs membranaires (Canal-Na + )
isolés de cerveaux de rats. Utilisé en routine au laboratoire, sa validation à grande échelle a
débuté dès 2004 dans le cadre des 2 essais-pilotes d'évaluation du risque ciguatérique à
Tubuai et Nuku Hiva.
En 2006, il a essentiellement servi à réaliser le criblage toxinique d'une trentaine de
nouvelles souches de Gambierdiscus et de 61 échantillons pisciaires (45% carnivores vs. 55%
d'herbivores) originaires de Moruroa. Nos résultats indiquent qu'entre mars 2005 et mars
2006, un fort pourcentage des poissons du lagon de Moruroa présentait encore une toxicité
résiduelle (21% seulement de poissons testés atoxiques) alors même que la totalité des
souches de la micro-algue s'est avérée atoxique.
En revanche, nous n'avons que peu progressé dans nos tentatives de déterminer le seuil des
valeurs ILR à partir desquelles le poisson testé va effectivement provoquer des symptômes
d'intoxication chez l'homme. Une des difficultés majeures rencontrées dans ce type d'étude
est l'impossibilité, souvent, de récupérer les restes des poissons à l'origine d'intoxications
chez les patients, en vue d'analyses ultérieures. Un appel à patients intoxiqués + relief des
repas par la voie des médias, en collaboration avec la Direction de la Santé, est prévu en
2007.
Le potentiel du test ILR pour la recherche de substances actives dans le traitement de la
ciguatéra a également été abordé en 2006, en collaboration avec l'Institut pour la
Recherche et le Développement (IRD) de Nouvelle-Calédonie. Des essais préliminaires
réalisés sur les extraits d'une quinzaine de plantes issues de la pharmacopée traditionnelle
calédonienne (dont Argusia argentea ou faux tabac) ont donné des résultats encourageants
pour au moins cinq d'entre elles. Il convient maintenant de les confirmer après
fractionnement bioguidé des extraits bruts d'intérêt.
Test de cytotoxicité
Il permet de doser les CTXs algales ou pisciaires, par mesure de leurs effets sur la viabilité
de lignées cellulaires en culture : les Neuro-2A sur laquelle le test a été mis au point au
laboratoire, et plus récemment les HEK-µ1, génétiquement modifiée pour exprimer
préférentiellement un nombre élevé de canaux Na + . Ce volet n'a que peu avancé en 2006 en
raison notamment :
• de difficultés croissantes à s'approvisionner en certains réactifs (e.g. vératridine et
ouabaïne),
• d'un vieillissement de la lignée Neuro-2A entretenue depuis plusieurs années à L’ILM et
qui nécessite d'être renouvelée,
• d'un rendement insuffisant des cultures de la lignée HEK-µ1, qu'il est toutefois possible
d'améliorer grâce à l'utilisation de fioles de cultures présentant une meilleure qualité
d'adhésion.
Immuno-détection des CTXs
Contrairement aux 2 tests précédents qui permettent de distinguer les différentes CTXs en
fonction de leur toxicité, ce type de détection est basée sur une reconnaissance structurale
des CTXs, au moyen d'outils produits par immunochimie classique i.e. anticorps polyclonaux
(Ac) ou monoclonaux (Acm), ou issus du génie génétique i.e. anticorps recombinants (AcR).
L'état d'avancement de ces travaux est détaillé dans le 1 er rapport d'étape du contrat de
recherche ILM-IPNC portant sur la "Recherche et mise au point de tests de détection
Institut Louis Malardé – Rapport annuel 2006 42