Laboratoire de recherche en virologie mÃ©dicale - Institut Louis ...

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• Objectif L’objectif de ce programme était d’identifier, chez le moustique vecteur, des protéines capables de se lier au virus de la dengue et, par cette propriété, susceptibles de jouer un rôle dans la dissémination virale chez le vecteur et/ou sa transmission à l’hôte humain. • Etude La dissémination du virus de la dengue (DENV) dans les tissus du moustique et sa transmission à l’homme via la salive infectante sont deux événements clés du cycle de transmission. Afin d’identifier les protéines susceptibles d’être impliquées dans la dissémination virale chez le vecteur, nous avons recherché celles capables de se lier au DENV, dans des extraits de cellules C6/36 d’Aedes albopictus et de glandes salivaires (EGS) d’Ae. aegypti et d’Ae. polynesiensis. Ces protéines sont des « candidats » au rôle de récepteur au DENV; une cible de choix dans le cadre de stratégies de blocage de la transmission virale. De plus, les EGS contenant à la fois des protéines du tissu de la glande et des protéines salivaires, notre étude propose de premières pistes pour l’identification de complexes « DENV/protéine salivaire », susceptibles d’interagir avec la réponse immunitaire de l’hôte. • Etat d’avancement des travaux/Résultats En utilisant la technique du Virus Overlay Binding Assay (VOPBA), nous avons recherché, dans les trois types d’extraits, la présence de protéines capables de se lier aux souches de référence des quatre sérotypes de dengue ainsi qu’à un isolat clinique de DEN4 (provenant d’un patient ayant été infecté au cours de l’épidémie de DEN4 de 1979 en PF). Plusieurs protéines ont ainsi été détectées dans les extraits de cellules C6/36 (82, 70, 48, 46, 27 kDa) et les EGS d’Ae. aegypti (77, 67, 58, 54, 37 kDa). Dans les EGS d’Ae. polynesiensis (67, 56, 54, 50, 48 kDa) les expériences de VOPBA ont montré la présence de protéines capables de se lier aux souches de référence des virus DEN1 et DEN4 (pour des raisons de quantité de matériel biologique, seuls ces sérotypes ont pu être testés). Les résultats de ce travail ont fait l’objet d’une soutenance de thèse de Doctorat de l’Université de la Polynésie française, présentée par V.M. Cao-Lormeau, le 30 mars 2006: Virus de la Dengue et Moustiques vecteurs – Protéines se liant au virus de la Dengue dans les extraits de cellules cibles et de glandes salivaires de moustiques vecteurs. • Conclusions et perspectives Les résultats obtenus sur les extraits de cellules C6/36 complètent ceux précédemment publiés par d’autres équipes, dont certains récemment (Mercado-Curiel et al., 2006). Ils devraient contribuer à la caractérisation d’un récepteur aux quatre sérotypes de dengue sur le modèle cellulaire C6/36, puis l’extension de l’étude à des tissus du vecteur Ae. albopictus (estomac, glandes salivaires). Concernant la détection de protéines capables de se lier au DENV dans les extraits de glandes salivaires d’Ae. aegypti et Ae. polynesiensis, la perspective immédiate engendrée par ce travail est la caractérisation biochimique et fonctionnelle de ces protéines. - D’une part, l’identification de protéines issues du tissu de la glande salivaires (membrane basale ou cellules épithéliales) et capable de se lier au DENV est une première étape dans l’identification d’un récepteur au DENV, soit un élément clé dans le cadre de nouvelles approches anti-dengue (réduction de la compétence vectorielle, nouvelles stratégies vaccinales,…). - D’autre part, l’identification de protéines salivaires complexées au DENV et l’existence de tels complexes à la première étape de l’infection humaine contribuerait à la proposition de nouvelles hypothèses sur le jeu des interactions « virus/salive du vecteur/système immunitaire de l’hôte » et son impact sur l’infection. Institut Louis Malardé – Rapport annuel 2006 39
Les activités de santé publique 1- Comité dengue • Participants R. TEYSSOU, C. ROCHE, V.M. CAO-LORMEAU Participation aux réunions du Comité dengue (ILM, DS, CHSP) : réflexion sur les améliorations à apporter au système de réseau sentinelle pour la dengue (fiches de renseignements patients pour le diagnostic; coordination entre l’ILM et les autres laboratoires d’analyses pour la surveillance). 2- Surveillance de la dengue • Participants C. ROCHE, J. VIALLON, M. AUBRY, N. GUITARD (LABM), S. LASTERE (LABM) • Etude La surveillance de la dengue s’est poursuivie au LVM jusqu’à la prise de fonction au LABM du Dr Stéphane LASTERE. Le LVM a conservé la réalisation de l’épidémiologie moléculaire. Suite à la recrudescence des cas de dengue en fin d’année, le séquençage de 3 souches de D1 isolées en 2006 a été réalisé pour vérification du génotype en cause, 5 ans après l’épidémie. • Résultats Un arbre phylogénétique sur le gène E de la DEN-1 a été construit selon les modalités habituelles. Cet arbre montre que les 3 souches isolées en Polynésie française en 2006 (PF311006-242, PF201106-32, PF141006-206) appartiennent au génotype IV, tout comme la souche isolée en Polynésie française en 2001 (PF01). Elles ont cependant légèrement évolué par rapport à cette dernière. • Conclusions Ce résultat laisse supposer qu’il n’y a pas eu d’introduction d’un nouveau génotype durant les 5 dernières années. Cependant, il est nécessaire de faire cette étude sur de plus nombreuses souches, isolées de 2001 à 2006, pour pouvoir l’affirmer. Le laboratoire de recherche sur les micro-algues toxiques L’équipe • Mireille CHINAIN, chef de service • Taiana DARIUS, chargée de recherche • Philippe CRUCHET, technicien de recherche • Taina REVEL, technicien de recherche • André UNG, technicien de recherche • Mote TCHOU FOUC, plongeur, aide-technicien Les activités de recherche Les programmes de recherche du Laboratoire de recherche sur les micro-algues toxiques (LMT) ont trait aux efflorescences algales potentiellement dangereuses (ciguatéra) et à leurs conséquences sur la chaîne alimentaire. Ils se déclinent selon 2 principaux axes : l'étude de la micro-algue à l'origine de l'intoxication ciguatérique, le dinoflagellé Gambierdiscus, Institut Louis Malardé – Rapport annuel 2006 40
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