Laboratoire de recherche en virologie médicale - Institut Louis ...

• Objectif
L’objectif de ce programme était d’identifier, chez le moustique vecteur, des protéines
capables de se lier au virus de la dengue et, par cette propriété, susceptibles de jouer
un rôle dans la dissémination virale chez le vecteur et/ou sa transmission à l’hôte
humain.
• Etude
La dissémination du virus de la dengue (DENV) dans les tissus du moustique et sa
transmission à l’homme via la salive infectante sont deux événements clés du cycle de
transmission. Afin d’identifier les protéines susceptibles d’être impliquées dans la
dissémination virale chez le vecteur, nous avons recherché celles capables de se lier au
DENV, dans des extraits de cellules C6/36 d’Aedes albopictus et de glandes salivaires
(EGS) d’Ae. aegypti et d’Ae. polynesiensis. Ces protéines sont des « candidats » au rôle
de récepteur au DENV; une cible de choix dans le cadre de stratégies de blocage de la
transmission virale. De plus, les EGS contenant à la fois des protéines du tissu de la
glande et des protéines salivaires, notre étude propose de premières pistes pour
l’identification de complexes « DENV/protéine salivaire », susceptibles d’interagir avec
la réponse immunitaire de l’hôte.
• Etat d’avancement des travaux/Résultats
En utilisant la technique du Virus Overlay Binding Assay (VOPBA), nous avons recherché,
dans les trois types d’extraits, la présence de protéines capables de se lier aux souches
de référence des quatre sérotypes de dengue ainsi qu’à un isolat clinique de DEN4
(provenant d’un patient ayant été infecté au cours de l’épidémie de DEN4 de 1979 en
PF). Plusieurs protéines ont ainsi été détectées dans les extraits de cellules C6/36 (82,
70, 48, 46, 27 kDa) et les EGS d’Ae. aegypti (77, 67, 58, 54, 37 kDa). Dans les EGS
d’Ae. polynesiensis (67, 56, 54, 50, 48 kDa) les expériences de VOPBA ont montré la
présence de protéines capables de se lier aux souches de référence des virus DEN1 et
DEN4 (pour des raisons de quantité de matériel biologique, seuls ces sérotypes ont pu
être testés).
Les résultats de ce travail ont fait l’objet d’une soutenance de thèse de Doctorat de
l’Université de la Polynésie française, présentée par V.M. Cao-Lormeau, le 30 mars
2006: Virus de la Dengue et Moustiques vecteurs – Protéines se liant au virus de la
Dengue dans les extraits de cellules cibles et de glandes salivaires de moustiques
vecteurs.
• Conclusions et perspectives
Les résultats obtenus sur les extraits de cellules C6/36 complètent ceux précédemment
publiés par d’autres équipes, dont certains récemment (Mercado-Curiel et al., 2006). Ils
devraient contribuer à la caractérisation d’un récepteur aux quatre sérotypes de dengue
sur le modèle cellulaire C6/36, puis l’extension de l’étude à des tissus du vecteur Ae.
albopictus (estomac, glandes salivaires).
Concernant la détection de protéines capables de se lier au DENV dans les extraits de
glandes salivaires d’Ae. aegypti et Ae. polynesiensis, la perspective immédiate
engendrée par ce travail est la caractérisation biochimique et fonctionnelle de ces
protéines.
- D’une part, l’identification de protéines issues du tissu de la glande salivaires
(membrane basale ou cellules épithéliales) et capable de se lier au DENV est une
première étape dans l’identification d’un récepteur au DENV, soit un élément clé
dans le cadre de nouvelles approches anti-dengue (réduction de la compétence
vectorielle, nouvelles stratégies vaccinales,…).
- D’autre part, l’identification de protéines salivaires complexées au DENV et
l’existence de tels complexes à la première étape de l’infection humaine
contribuerait à la proposition de nouvelles hypothèses sur le jeu des interactions
« virus/salive du vecteur/système immunitaire de l’hôte » et son impact sur
l’infection.
Institut Louis Malardé – Rapport annuel 2006 39