Laboratoire de recherche en virologie médicale - Institut Louis ...

• Etude
Comme dans plus d’une centaine de pays des régions tropicales et intertropicales du
globe, la dengue constitue un problème de santé publique majeur en PF. Plusieurs
facteurs, propres à la situation géographique particulière de la PF, contribuent à
l’émergence régulière d’épidémies de dengue: (i) l’augmentation du pool d’individus
réceptifs, par les naissances et les mouvements de population ; (ii) les échanges
internationaux entre le Pays et des régions où ces virus circulent ou co-circulent,
contribuant à l’introduction d’un sérotype contre lequel une grande partie de la
population n’est pas immunisée.
Ces échanges internationaux constituent également un facteur de risque pour
l’introduction d’arbovirus, pour lesquels les espèces de moustiques (ou autres insectes)
établies en PF sont des vecteurs potentiels, et vis-à-vis desquels la population ne
possède aucune immunité protectrice. La récente épidémie de Chikungunya sur l’île de
la Réunion, due à des cas importés des Comores, illustre la menace que constituent les
arbovirus circulant dans des régions du monde avec lesquels un pays auparavant
indemne multiplie ses échanges.
Le présent programme de recherche, prévu sur une période de deux ans (2007/2008) et
qui a récemment reçu un accord d’aide de financement par le Ministère de l’Outre-Mer,
se décline en trois volets:
1. Elaboration d’un protocole pour la détection du virus de la dengue par RT-PCR
TR à la fois dans le sérum de patients et dans des lots de moustiques capturés.
2. Elaboration d’un protocole de RT-PCR universelles « Flavivirus, Alphavirus,
Phlébovirus » et de RT-PCR spécifiques.
3. Etude de séroprévalence d’arboviroses autres que la dengue dans la
population humaine de PF.
• Etat d’avancement des travaux/Résultats
1. Elaboration d’un protocole pour la détection du virus de la dengue par RT-PCR
TR à la fois dans le sérum de patients et dans des lots de moustiques capturés
Le programme a débuté par des essais destinés à l’élaboration d’un protocole de
RT-PCR TR (SybrGreen) pour la détection du DENV dans le sérum de patients.
Différents couples d’amorces et différents paramètres (ex. température
d’hybridation, hybridation/élongation en une seule étape, durée de chaque
étape, etc) ont été testés sur l’ iCycler iQ (Biorad).
Pour chaque couple d’amorces, la sensibilité de la RT-PCR TR a été comparée à
celle de la RT-PCR nichée actuellement utilisée pour le diagnostic (1 er tour d1/d2
= RT-PCR conventionnelle, 2 ème tour d1/TS1-4= PCR nichée).
a. Couple d1/d2: sur une gamme de dilution d’ARN extrait d’un sérum (++++ au
1 er tour de la RT-PCR nichée soit >10 6 eq DICT 50 *), la limite de détection en
RT-PCR TR est de 2,5.10 -1 (≥2,5.10 5 eq DICT 50 ); cette faible sensibilité,
comparée à celle de la RT-PCR nichée (10 2 eq DICT 50 ), pourrait s’expliquer par
la taille du fragment amplifié (511pb), supérieure à celle préconisée pour le
TR (10 2 eq DICT 50 ), soit en dessous de la sensibilité du 1 er tour
de la RT-PCR nichée.
Institut Louis Malardé – Rapport annuel 2006 36