Laboratoire de recherche en virologie médicale - Institut Louis ...
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• Etu<strong>de</strong><br />
Comme dans plus d’une c<strong>en</strong>taine <strong>de</strong> pays <strong>de</strong>s régions tropicales et intertropicales du<br />
globe, la <strong>de</strong>ngue constitue un problème <strong>de</strong> santé publique majeur <strong>en</strong> PF. Plusieurs<br />
facteurs, propres à la situation géographique particulière <strong>de</strong> la PF, contribu<strong>en</strong>t à<br />
l’émerg<strong>en</strong>ce régulière d’épidémies <strong>de</strong> <strong>de</strong>ngue: (i) l’augm<strong>en</strong>tation du pool d’individus<br />
réceptifs, par les naissances et les mouvem<strong>en</strong>ts <strong>de</strong> population ; (ii) les échanges<br />
internationaux <strong>en</strong>tre le Pays et <strong>de</strong>s régions où ces virus circul<strong>en</strong>t ou co-circul<strong>en</strong>t,<br />
contribuant à l’introduction d’un sérotype contre lequel une gran<strong>de</strong> partie <strong>de</strong> la<br />
population n’est pas immunisée.<br />
Ces échanges internationaux constitu<strong>en</strong>t égalem<strong>en</strong>t un facteur <strong>de</strong> risque pour<br />
l’introduction d’arbovirus, pour lesquels les espèces <strong>de</strong> moustiques (ou autres insectes)<br />
établies <strong>en</strong> PF sont <strong>de</strong>s vecteurs pot<strong>en</strong>tiels, et vis-à-vis <strong>de</strong>squels la population ne<br />
possè<strong>de</strong> aucune immunité protectrice. La réc<strong>en</strong>te épidémie <strong>de</strong> Chikungunya sur l’île <strong>de</strong><br />
la Réunion, due à <strong>de</strong>s cas importés <strong>de</strong>s Comores, illustre la m<strong>en</strong>ace que constitu<strong>en</strong>t les<br />
arbovirus circulant dans <strong>de</strong>s régions du mon<strong>de</strong> avec lesquels un pays auparavant<br />
in<strong>de</strong>mne multiplie ses échanges.<br />
Le prés<strong>en</strong>t programme <strong>de</strong> <strong>recherche</strong>, prévu sur une pério<strong>de</strong> <strong>de</strong> <strong>de</strong>ux ans (2007/2008) et<br />
qui a récemm<strong>en</strong>t reçu un accord d’ai<strong>de</strong> <strong>de</strong> financem<strong>en</strong>t par le Ministère <strong>de</strong> l’Outre-Mer,<br />
se décline <strong>en</strong> trois volets:<br />
1. Elaboration d’un protocole pour la détection du virus <strong>de</strong> la <strong>de</strong>ngue par RT-PCR<br />
TR à la fois dans le sérum <strong>de</strong> pati<strong>en</strong>ts et dans <strong>de</strong>s lots <strong>de</strong> moustiques capturés.<br />
2. Elaboration d’un protocole <strong>de</strong> RT-PCR universelles « Flavivirus, Alphavirus,<br />
Phlébovirus » et <strong>de</strong> RT-PCR spécifiques.<br />
3. Etu<strong>de</strong> <strong>de</strong> séropréval<strong>en</strong>ce d’arboviroses autres que la <strong>de</strong>ngue dans la<br />
population humaine <strong>de</strong> PF.<br />
• Etat d’avancem<strong>en</strong>t <strong>de</strong>s travaux/Résultats<br />
1. Elaboration d’un protocole pour la détection du virus <strong>de</strong> la <strong>de</strong>ngue par RT-PCR<br />
TR à la fois dans le sérum <strong>de</strong> pati<strong>en</strong>ts et dans <strong>de</strong>s lots <strong>de</strong> moustiques capturés<br />
Le programme a débuté par <strong>de</strong>s essais <strong>de</strong>stinés à l’élaboration d’un protocole <strong>de</strong><br />
RT-PCR TR (SybrGre<strong>en</strong>) pour la détection du DENV dans le sérum <strong>de</strong> pati<strong>en</strong>ts.<br />
Différ<strong>en</strong>ts couples d’amorces et différ<strong>en</strong>ts paramètres (ex. température<br />
d’hybridation, hybridation/élongation <strong>en</strong> une seule étape, durée <strong>de</strong> chaque<br />
étape, etc) ont été testés sur l’ iCycler iQ (Biorad).<br />
Pour chaque couple d’amorces, la s<strong>en</strong>sibilité <strong>de</strong> la RT-PCR TR a été comparée à<br />
celle <strong>de</strong> la RT-PCR nichée actuellem<strong>en</strong>t utilisée pour le diagnostic (1 er tour d1/d2<br />
= RT-PCR conv<strong>en</strong>tionnelle, 2 ème tour d1/TS1-4= PCR nichée).<br />
a. Couple d1/d2: sur une gamme <strong>de</strong> dilution d’ARN extrait d’un sérum (++++ au<br />
1 er tour <strong>de</strong> la RT-PCR nichée soit >10 6 eq DICT 50 *), la limite <strong>de</strong> détection <strong>en</strong><br />
RT-PCR TR est <strong>de</strong> 2,5.10 -1 (≥2,5.10 5 eq DICT 50 ); cette faible s<strong>en</strong>sibilité,<br />
comparée à celle <strong>de</strong> la RT-PCR nichée (10 2 eq DICT 50 ), pourrait s’expliquer par<br />
la taille du fragm<strong>en</strong>t amplifié (511pb), supérieure à celle préconisée pour le<br />
TR (10 2 eq DICT 50 ), soit <strong>en</strong> <strong>de</strong>ssous <strong>de</strong> la s<strong>en</strong>sibilité du 1 er tour<br />
<strong>de</strong> la RT-PCR nichée.<br />
<strong>Institut</strong> <strong>Louis</strong> Malardé – Rapport annuel 2006 36