Laboratoire de recherche en virologie médicale - Institut Louis ...

En outre, afin d’évaluer l’efficacité intrinsèque du traitement DEC – ALB, les données portant
sur les personnes parasitées qui se sont réellement traitées annuellement pendant la durée de
l’étude ont été évaluées.
Les conclusions retenues par le chef de projet (Dr Lam NGUYEN) sont les suivantes :
La stratégie proposée a été mise en œuvre correctement avec une couverture globale de
75% au moins ;
Après l’évaluation intermédiaire de 2003 et l’observation de l’impact très limité du
traitement communautaire dans les sites sentinelles, la couverture médicamenteuse a pu
être améliorée ;
La combinaison DEC – ALB est efficace pour un contrôle de l’endémie ;
Cependant on est loin d’atteindre l’objectif évoqué : éliminer la filariose par rupture de la
transmission, rupture supposée atteinte dès lors qu’une prévalence du parasitisme chez
l’Homme descend en dessous de 1% ;
L’efficacité intrinsèque du traitement (basée sur les analyses de cohortes) est, réelle,
cependant le taux de négativation en microfilaires circulantes est seulement de l’ordre de
40%.
La moyenne géométrique de la microfilarémie des personnes positives qui se sont traitées et
qui sont toujours positives est de l’ordre de 5 Mf/mL, niveau suffisant pour maintenir la
transmission par les moustiques-vecteurs
Dans le site sentinelle de Tevaitoa à Raiatea, une analyse en 4 zones et une illustration par
Système d’Information Géographique (SIG) démontrent un bon échantillonage des
prélèvements, une répartition diffuse des filariens (aucune zone n’est indemne), mais aussi
des différences dans les niveaux d’infection d’une zone à l’autre.
2- Surveillance biologique et entomologique de la filariose - Mise au point et validation de
la détection de larves de Wuchereria bancrofti dans les moustiques (Aedes
polynesiensis, Culex quinquefasciatus) et dans le sang des patients par PCR en temps
réel
En 1993, une technique permettant la détection du parasite W.b dans le moustique Aedes
polynesiensis par amplification spécifique de son l’ADN (PCR) a été développée au laboratoire.
Les amplicons étaient détectés par électrophorèse sur gel d’agarose. Nous avons adaptée cette
technique sur un appareil (icycler iQ, Biorad) qui permet de réaliser une PCR en temps réel,
grâce à une détection des amplicons par fluorescence. Tout d’abord, nous avons utilisé les
mêmes amorces (NV1-NV2) que pour la PCR conventionnelle et le SYBR green comme marqueur
fluorescent. L’observation des courbes de fusions pour chaque échantillons analysés nous
permet d’éliminer d’éventuels faux positifs ce qui augmente la spécificité de cette nouvelle
PCR, la sensibilité restant équivalente. De plus, puisque l’analyse des amplicons se fait
directement sur la machine, il n’est plus nécessaire d’ouvrir les tubes après la réaction ce qui
diminue beaucoup les risques de contamination.
Nous avons testé un autre couple d’amorces (LDR1- LDR2) avec une sonde TaqMan (Fam/Tamra)
comme marqueur fluorescent. La cible de ces amorces est également une séquence d’ADN
génomique répété située à plusieurs centaines de bases du fragment Ssp1 amplifié par NV1-
NV2. Les résultats obtenus sur nos extraits d’ADN d’Aedes polynesiensis, montrent une moins
bonne sensibilité qu’avec le système NV1-NV2-SYBR green, contrairement aux résultats publiés
par une équipe américaine.
A ce jour, la microfilarémie, concentration des microfilaires dans le sang, est déterminée par
comptage direct des microfilaires, après coloration d’un filtre sur lequel 1 ml de sang a été
filtré. Cette technique, nécessite beaucoup de petit matériel et de manipulations.
La mise au point d’une PCR quantitative pour permettre d’obtenir la microfilarémie à partir du
dosage de l’ADN spécifique de W. bancrofti dans le sang est en cours. Plusieurs formes
d’échantillons sanguins (sang frais, sang congelé, buvards imprégnés de sang) et plusieurs kits
d’extraction sont actuellement testés
Institut Louis Malardé – Rapport annuel 2006 31