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III-1-2 Réactifs Acide docosahexaénoïque, acide eicosapentaénoïque, acide oléique, acide linoléique, acide palmitique, acide stéarique et acide myristique : proviennent de SIGMA Acide phosphatidique (1-arachidonyl, 2-stearoyl) et phosphatidylbutanol : proviennent de TEBU Acide [5, 6, 8, 11, 12, 14, 15- 3 H] arachidonique (200 Ci/mmol) : provient de Perkin Elmer Life Sciences Anticorps monoclonal anti-tubiline α : provient de SIGMA Anticorps polyclonaux anti-PLD1 et anti-PLD2 ont été généreusement fournis par Dr Sylvain Bourgoin (université Laval, Québec, Canada) Anticorps anti-PIP2 : provient de Assay Designs, Euromedex Anticorps secondaire anti-IgG de souris couplé à la peroxydase de raifort et kit ECL : proviennent de AMERSHAM PHARMACIA BIOTECK Anticorps secondaire anti-IgG de lapin couplé à la peroxydase de raifort : provient de BIORAD Bleu trypan : provient de SIGMA Butylhydroxytoluène : provient de SIGMA Cocktail d’inhibiteurs de protéases (Inhibitor cocktail), saccharose et sous-unité B de la toxine cholérique couplée à la peroxydase : viennent de SIGMA Concanavaline A, Ficoll histopaque, albumine sérine humaine (HSA) delipidée : proviennent de SIGMA Milieu RPMI 1640 (HEPES 25mM, bicarbonate 2g/l) : provient de GIBCO Scintillant liquide Pico Fluor 15 : provient de PACKARD Sérum de vœu fœtal, pénicilline, streptomycine et L-glutamine : proviennent de GIBCO Taq polymérase et kit MTT de prolifération : proviennent de Roche Applied Science Transcriptase inverse M-MLV : vient de PROMEGA Tri Reagent : provient de SIGMA Triton X-100 : provient de Merck 96
III-2 Méthodes III-2-1 Préparation des régimes et administration aux animaux Des rats males Sprague Dawley (OFA) pesant de 140 à 200 g (moyenne 160.24 ± 2.73 ; n=70) au début des expériences, sont placés individuellement dans des cages dans une pièce contrôlée en température et en lumière (22°C, cycle 12 h lumière/ 12 h obscurité). Après une semaine d’acclimatation, les animaux sont séparés au hasard en cinq groupes et sont nourris durant quatre semaines avec un régime sans graisse (Unité Alimentaire Rationnelle, UAR) additionné de différentes huiles à raison de 10% en poids (10g d’huile pour 100g de régime). La composition de base du régime est montrée dans le Tableau XII. Pour chaque régime, une quantité minimale (2% en poids) d’huile de tournesol est apportée comme source d’acide gras n-6 afin de ne pas induire de déficience en acide linoléique, un acide gras essentiel appartenant à la famille n-6. Le régime enrichi en acides gras n-3 (groupe poisson) contient 8% en poids d’huile de sardine (Radi Holding, Casablanca, Maroc) et 2% en poids d’huile de tournesol. Le régime enrichi en acides gras n-6 et n-9 (groupe argan) contient 8% en poids d’huile d’argan (association Targanine, Tamanar, Maroc) et 2% en poids d’huile de tournesol. Le régime enrichi en acides gras n-9 (groupe olive) contient 8% en poids d’huile d’olive (production local, Fès, Maroc) et 2% en poids d’huile de tournesol. Le régime enrichi en acides gras saturés (groupe noix de coco) contient 8% en poids d’huile de noix de coco (coopération pharmaceutique française, Rhône-Poulenc Rorer, Lyon, France) et 2% en poids d’huile de tournesol. Enfin, le régime enrichi en acides gras n-6 (groupe tournesol) contient 10% en poids d’huile de tournesol. Les régimes sont préparés tous les trois jours et stockés à - 20°C à l’obscurité. Dans ces conditions de conservation, ils ne subissent que très peu d’oxydation. Cela a été vérifié par un test à l’acide thiobarbiturique qui détecte le dialdéhyde malonique produit au cours de la peroxydation des acides gras (résultats non montrés). Les animaux reçoivent une ration fraîche chaque jour et sont pesés tous les jours. 97
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N° : 2006-ISAL-0031 ANNEE 2006 THE
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GOUTTE R. (Prof. émérite) CREATIS
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SIGLE ECOLE DOCTORALE NOM ET COORDO
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Dédicace Je dédie ce travail A me
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AVANT-PROPOS Le travail présenté
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FOWLER, K. H., MCMURRAY, D. N., FAN
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and Lipid Mediator Profiles and Pro
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