Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

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sensibilité aux esters de phorbol, puissants activateurs des PKCs. Par contre, la partie N- terminale de PLD2 semble nécessaire à son activité basale. Une délétion dans cette région conduit à une enzyme de faible activité basale qui devient sensible à l’activation par ARF. La région C-terminale est relativement bien conservée entre les PLD (Xie et al., 2000). Contrairement à la région amino-terminale, toutes modifications de cette région, notamment l’introduction d’étiquettes, altèrent l’activité enzymatique. Cette région est impliquée dans l’interaction de la PLD1 avec ARF et Rho (Sung et al., 1999a et 1999b ; Yamazaki et al., 1999). II-2-5-5 La boucle centrale de PLD1 La PLD1 possède une région de 100 à 150 acides aminés au centre de la protéine (aa 505- 620), absente de la PLD2 ou des PLD des organismes inférieurs (Hammond et al., 1995 ; Colley et al., 1997a). Cette région appelée « boucle » aurait une activité régulatrice négative. La délétion de la région boucle ou de la partie N-terminale de PLD1 augmente l’activité basale de l’enzyme. Ceci suggère que ces deux régions sont des domaines de régulation négative qui permettent de maintenir l’activité basale de PLD1 à un niveau faible. L’activité basale de PLD2, qui ne possède pas de séquence boucle, est très élevée. Cette boucle au centre de la PLD1 serait donc impliquée dans un mécanisme d’autoinhibition, levé par des activateurs de l’enzyme (Sung et al, 1999 a et b). II-2-6 Régulation de la PLD L’activité PLD des cellules de mammifères est régulée par des signaux extracellulaires d’origine variée : hormones, neurotransmetteurs, facteurs de croissance, cytokines, antigènes et molécules d’adhésion cellulaire. Trois classes de protéines activatrices sont impliquées dans la régulation de l’activité PLD: les PKC et les petites protéines G monomériques des familles Rho et ARF. De nombreux travaux réalisés sur des cellules perméabilisées ou des membranes isolées montrent que les protéines ARF, Rho et PKC activent la PLD de façon synergique (Geny et Cockcroft, 1992 ; Coorson et Halsam, 1993 ; Whatmore et al., 1994). Ces observations ont été confirmées par des expériences réalisées in vitro avec des protéines recombinantes purifiées (Ohguchi et al., 1995 ; Singer et al., 1996). Les principales caractéristiques et mécanismes de régulation de la PLD sont résumés dans le Tableau VI. 56
Tableau VI: Caractéristiques des PLD. (Okamura et Yamashita, 1994; Colley et al., 1997; Hammond et al., 1997; Kodaki et Yamashita, 1997; Morris et al., 1997b; Brown et al., 1998; Katayama et al., 1998; Lopez et al., 1998; Frohmen et al., 1999). PLD1a, PLD1b PLD2 PLD oléate dépendante Taille 124 Kda (a) a , 119 Kda (b) a 106 Kda a 190 Kda a Localisation membranaire Membranes du Golgi Microsomes, endosmoses Membrane plasmique Membrane plasmique, nucléaire, microsomes Localisation cytosolique probable possible non Activité basale faible forte faible Activation par: * Lipides PIP2 b , PIP3 b PIP2, PIP3 Oléate et arachidonate * Petites Protéines G ARF, Rho A, Rac, Cdc42 mineur non * Protéines Kinases cPKCα, β; nPKCε mineur non Protéines inhibitrices Synaptojanine, fodrine, AP3 Synaptojanine, Synucléïnes inconnu Autre inhibiteurs Oléate, alcools primaires, céramides Oléate, alcools primaires Alcools primaires a taille approximative estimée par électrophorèse. b PIP2: phosphatidylinositol 4, 5-biphosphate, PIP3: phosphatidylinositol 3, 4, 5-triphosphate. 57
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GOUTTE R. (Prof. émérite) CREATIS
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éalisée dans les mêmes condition
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vortexé avant d'être coulé. Apr
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