Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

par les ARF, mais à un degré moindre que PLD1 (Lopez et al., 1998). La PLD2 n’est pas
activable par les protéines G de la famille Rho.
II-2-5 Structure de la PLD
La séquence peptidique de la PLD montre la présence de quatre domaines fortement
conservés entre les différentes isoformes et entre espèces, nommés CRI à CRIV pouvant être
soit des sites catalytiques, soit des motifs de liaison à des cofacteurs ou des activateurs de la
PLD (Morris et al., 1996) (Figure 8).
II-2-5-1 Motifs HKD et mécanisme catalytique
Les régions CRII (aa 463 à 487 de hPLD1a) et CRIV (aa 894 à 919) sont des régions
hautement conservées, nommées « HKD » parce qu’elles contiennent chacune un motif
invariable HxK(x) 4 D, appelé aussi triade catalytique (Hammond et al., 1995). Ces domaines
sont caractérisés par la présence de résidus conservés (histidine, lysine et acide aspartique) qui
sont indispensables à la catalyse in vitro et pour le fonctionnement de l’enzyme in vivo (Sung
et al., 1997). En effet, il a été montré que la délétion de l’un de ces motifs provoque la perte
de l’activité catalytique de l’enzyme. Cette activité peut être restaurée par cotransfection du
mutant délété avec le domaine manquant dans des cellules Cos. Ceci s’explique par le fait que
les deux parties N- et C-terminales peuvent s’associer physiquement lorsqu’elles sont
exprimées dans les cellules Cos 7 (Xie et al., 2000).
Le mécanisme catalytique implique la formation d’un intermédiare phosphatidyl-enzyme
selon un mécanisme ping-pong (Sung et al., 1997). La structure cristalline de la PLD de
Streptomyces species a pu être déterminée par Leiros et ses collaborateurs (2000). Chez
Streptomyces species, la PLD est constituée d’une seule chaîne polypeptidique comportant
deux domaines caractéristiques. Le repliement de la chaîne mettant en contact ces deux
domaines forme un site actif à l’interface. Ce modèle structural a confirmé la nécessité d’une
dimérisation de deux monomères comportant chacun une triade catalytique HKD pour obtenir
un site actif. En ce qui concerne le mécanisme catalytique, des résultats récents ont permis
d’imaginer un modèle faisant intervenir les résidus histidyl- des deux triades catalytiques. Une
histidine servirait de nucléophile et l’autre servirait à protoner l’oxygène du groupement
partant (Iwasaki et al., 1999) (Figure 9).
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