Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

II-2-4 Clonage et caractérisation de la PLD
Les PLD ont d’abord été clonées chez les procaryotes. La première PLD de mammifères à
avoir été clonée est une PLD humaine. Le gène a été isolé à partir d’une banque d’ADN
complémentaire de cellules HeLa, par homologie de séquence avec celui de la levure
(Hammond et al., 1995), et la protéine correspondante a été dénommée PLD1. L’alignement
des séquences de cinq PLD représentatives de chaque règne (vertébrés, invertébrés,
champignons, végétaux et bactéries) révèle la présence de caractéristiques communes
(Liscovitch et al., 2000).
Le gène de la PLD1 humaine (hPLD1) code une protéine de 1072 acides aminés de masse
moléculaire 120 KDa. La PLD1 est caractérisée par une activité basale faible. Elle est activée
par trois classes d’effecteurs : les protéines kinases C, les petites protéines G monomériques
de la famille ARF (ADP-ribosylation factor) et celles de la famille Rho (Ras-homology family
protein). Elle nécessite du PIP2 pour son activité et elle est inhibée par l’oléate (Hammond et
al., 1995). La PLD1 présente deux variants, PLD1a et PLD1b, produits par un épissage
alternatif. PLD1b comporte une délétion de 38 acides aminés (aa 585 à 624) par rapport à
PLD1a (Hammond et al., 1997 ; Katayama et al., 1998). Ces deux variants d’épissage
présentent la même structure et montrent des sensiblilités aux différents effecteurs identiques.
Après le clonage de la PLD1, la séquence complète d’une nouvelle PLD appelée PLD2 a été
décrite (Colley et al., 1997b ; Kodaki et Yamashita., 1997). La PLD2 ne présente que 50%
d’homologie de séquence avec PLD1. Elle est délétée d’une boucle centrale de 106 acides
aminés par rapport à PLD1 (PLD1a, aa 505-620). De plus, elle diffère de PLD1 dans ses
parties N-terminale et C-terminale. La PLD2 est une protéine de 932 acides aminés, de masse
moléculaire 100 KDa environ. Trois variants d’épissage de la PLD2 humaine ont été décrits à
ce jour (Steed et al., 1998). La PLD2 a une activité basale élevée, PIP2 dépendante, qui peut
être activée par l’ajout de quelques micromolaires d’AGI (Kim et al., 1999b), mais elle est
peu ou pas stimulable par les protéines activatrices de PLD1 (Colley et al., 1997a ; Lopez et
al., 1998). Certains travaux ont décrit une activation de PLD2 par les PKC mais d’une
amplitude plus faible que celle de PLD1 (Han et al., 2002 ; Chen et Exton, 2004). La
sensibilité de la PLD2 à la protéine ARF est variable selon les différentes espèces. Ainsi, les
travaux de Jenco et al. (1998) ont montré que les protéines G de la famille ARF n’ont aucun
effet sur la PLD2 murine in vitro. Par contre, la PLD2 humaine a été décrite comme activable
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