Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

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Une troisième approche consiste à manipuler un composant lipidique crucial des radeaux lipidiques : le cholestérol. On peut limiter la formation de rafts à la surface cellulaire soit par séquestration du cholestérol par des antibiotiques tels que la filipine et la nystatine, soit par déplétion des membranes cellulaires en cholestérol par la méthyl-β-cyclodextrine, ou encore en inhibant sa biosynthèse par des statines. Le Tableau IV présente les méthodes les plus couramment utilisées pour l’étude des radeaux lipidiques. 42
Tableau IV : Techniques d’analyse des radeaux lipidiques (Pizzo et Viola, 2004). Méthodes Informations obtenues cellules vivantes ? Avantages et limites Extraction biochimique (utilisation de détergents non ioniques) • Présence / absence de molécules spécifiques dans les DRMs Non • Facile, protocole non standardisé. • Artéfacts possibles. • Ne permet pas de détecter les faibles associations. Déplétion du cholestérol • Les fonctions cellulaires associées au cholestérol des membranes (intégrité des rafts) Oui • Possibilité d’effets secondaires des drogues utilisées pour séquestrer le cholestérol. Marquage avec des anticorps et microscopie à fluorescence • Co-localisation de certaines molécules avec les marqueurs des rafts. • dynamique des rafts dans les processus cellulaires Oui / Non • facile ; problème de quantification des données. • analyse des rafts dans des conditions d’activation cellulaire Fluorescence par énergie de transfert de résonance (FRET) 1 • Assemblage des molécules dans les microdomaines. • la dimension des rafts. Oui • technique informative • artéfact possibles Suivi de particule individuelle (SPT) 2 • dynamique d’une molécule associée aux rafts • durée de vie et dimensions des rafts Oui • technique très informative • nécessite des équipements très spécifiques et une grande expérience. 1 FRET : Fluorescence Resonance Energy Transfert ; 2 SPT : Single particle Tracking microscopy 43
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