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Extérieur de la cellule Sphingomyéline Glycolipide Phosphatidylcholine Cholestérol Phosphatidylsérine Phosphatidylinositol Cytoplasme Phosphatidyléthanolamine Figure 5 : Asymétrie de la composition au niveau des deux feuillets de la bicouche lipidique II-1-4-2-2 Composition protéique De nombreuses protéines ont été identifiées à ce jour dans les fractions membranaires insolubles dans le Triton X-100. Les protéines décrites dans les DRMs sont essentiellement des protéines possédant des modifications lipidiques (Tableau III). Tableau III : Modifications lipidiques des protéines. Type de modification Groupement lipidique transféré Acide aminé cible Acylation Palmitate Cystéine Myristate Glycine N-terminale Prénylation Farnésyle, géranyl-géranyle Cystéine Glypiation Glycosylphosphatidylinositol Extrémité N-terminale Certaines de ces protéines sont liées à la membrane par des chaînes acyles saturées (Brown et London, 1997). Les protéines les plus souvent détectées sont des kinases de la famille Src : p Lck et p fyn , les sous-unités α des protéines G hétérotrimériques, les récepteurs de l’ EGF (Epithelial Growth Factor) et du PDGF (Platelet Derived Growth Factor), les MAP kinases (MAPK), les protéines kinases C …. Pour les kinases Src et les protéines G une double 40
acylation (N-palmitoylation et S-myristoylation) est nécessaire pour permettre leur ancrage aux DRMs (Shenoy-Scaria et al., 1994). D’autres protéines sont liées au feuillet externe des microdomaines par une ancre GPI (Brown et Rose, 1992, Sargiacomo et al., 1993). L’enrichissement particulier de ces protéines à pied d’ancrage GPI dans les DRMs a conduit à considérer leur présence comme un indicateur du degré de purification des microdomaines. Les protéines à ancre GPI les plus souvent décrites comme marqueurs des microdomaines sont : la phosphatase alcaline (Brown et Rose, 1992), la 5’-nucléotidase (Diaz et al., 2002), les protéines Thy1 et Thy 2 et le prion (Madore et al., 1999). II-1-4-3 Radeaux lipidiques : réalité ou artéfact ? La première préparation de radeaux lipidiques a été décrite par Brown et Rose en 1992. Après traitement des lysats de cellules épithéliales par le triton X-100 à froid, ces auteurs ont isolé une fraction résistant à la solubilisation par centrifugation sur gradient de saccharose. Le traitement des membranes à 37°C par le Triton X-100 ne permet d’obtenir qu’une faible quantité de matériel membranaire. Ceci aurait pu signifier que les radeaux n’existent qu’à 4°C. En outre, leur petite taille les rend invisibles en microscopie classique. A cause de ces contraintes, l’existence de DRMs in vivo a été mise en doute. Cependant, plusieurs approches expérimentales récentes sont en faveur de leur existence dans les membranes des cellules vivantes (pour revue voir Horejsi, 2003). Parmi les alternatives aux méthodes biochimiques de fractionnement cellulaire, les approches chimiques (pontage chimique des molécules de surface) et biophysiques (FRET, Single particle tracking, laser trap ou single dye tracking) ont permis de déterminer la composition lipidique et protéique des microdomaines ainsi que leurs caractéristiques physicochimiques et leur taille. D’autre part, les expériences réalisées sur des membranes modèles (Ahmed et al., 1997 ; Schroeder et al., 1998) ont permis de montrer que la membrane préexiste dans une phase Lo avant l’utilisation de détergent, et que c’est bien l’existence de cette phase Lo qui conditionne la résistance au Triton X-100. Dans ces travaux, l’état de phase Lo est provoqué par l’ajout de cholestérol à un mélange de PC et SM dans des rapports molaires physiologiques. 41
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croissantes (0.2M à 0.9M), puis l
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éalisée dans les mêmes condition
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vortexé avant d'être coulé. Apr
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L’huile de poisson constitue une
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and Lipid Mediator Profiles and Pro
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