Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

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III-2-6-2 Activité PLD PIP2 sensible......................................................................... 104 III-2-7 Analyse de la composition en acides gras des phospholipides totaux de thymocytes et des triglycérides et phospholipides plasmatiques par chromatographie en phase gazeuse (CPG) ..................................................................................................... 105 III-2-8 Etude des microdomaines................................................................................... 106 III-2-8-1 Isolement des microdomaines à partir des thymocytes de rat..................... 106 III-2-8-2 Dosage du ganglioside GM1 et du PIP2 dans les fractions des gradients... 107 III-2-8-3 Dosage du cholestérol ................................................................................. 108 III-2-8-4 Dosage des phospholipides ......................................................................... 109 III-2-8-5 Dosage des protéines................................................................................... 109 III-2-8-5-1 Dosage des protéines par la méthode de Bradford (1976)................... 109 III-2-8-5-2 Dosage des protéines par la méthode Schaffner–Weissmann (1973).. 109 III-2-9 Electrophorèse en SDS-PAGE et "Western-blotting" : ...................................... 110 III-2-9-1 Préparation des échantillon : ....................................................................... 110 III-2-9-2 Précipitation des protéines par l’acétone à froid : ....................................... 110 II-2-9-3 Electrophorèse en SDS-PAGE : ................................................................... 110 III-2-10 Transcription inverse et Réaction en chaîne de la polymérase........................ 111 III-2-10-1 Préparation des ARN................................................................................. 111 III-2-10-2 Transcription inverse (RT)........................................................................ 112 III-2-10-3 Réaction en chaîne de la polymérase (PCR) ............................................. 112 III-2-10-4 Electrophorèse sur gel d'agarose des ADN ............................................... 114 III-2-11 Analyses statistiques des résultats.................................................................... 114 IV- RESULTATS ................................................................................................................. 115 IV-1 EFFET DES ACIDES GRAS «IN VITRO» SUR LES FONCTIONS IMMUNES........................... 115 IV-1-1 Effet des acides gras « in vitro » sur la réponse proliférative des thymocytes de rat. .................................................................................................................................. 115 IV-1-2 Effet des AGI « in vitro » sur l’activité PLD des thymocytes de rat................... 118 IV-1-2-1 Caractérisation de la PLD des thymocytes de rat ....................................... 119 IV-1-2-2 Effet des acides gras «in vitro» sur l’activité PLD ..................................... 123 IV-1-3 Caractérisation des DRMs dans les thymocytes de rat ...................................... 129 IV-1-3-1 Détection du ganglioside GM1 ................................................................... 130 IV-1-3-2 Détection du PIP2 ....................................................................................... 131 IV-1-3-3 Dosage du cholestérol et des phospholipides.............................................. 132 16
IV-1-3-4 Distribution de la protéine PLD1 dans les radeaux lipidiques.................... 133 IV-1-4 Effets de l’enrichissement des cellules en acides gras sur les radeaux lipidiques ........................................................................................................................................ 134 IV-1-4-1 Effet des AG sur la distribution du GM1, du cholestérol et des phospholipides............................................................................................................ 134 IV-1-4-2 Effet des AG sur la localisation de la protéine PLD1................................. 135 IV-2 ETUDE NUTRITIONNELLE COMPARATIVE DE L’EFFET IMMUNOMODULATEUR DES HUILES DE POISSON, D’ARGAN ET D’OLIVE CHEZ LE RAT ................................................................. 136 IV-2-1 Composition en acides gras des régimes............................................................ 137 IV-2-2 Effets des régimes sur la croissance des rats ..................................................... 139 IV-2-3 Modifications lipidiques induites par les régimes .............................................. 139 IV-2-3-1 Modifications lipidiques plasmatiques induites par les régimes................. 140 IV-2-3-2 Modifications lipidiques des thymocytes de rat induites par les régimes... 140 IV-2-4 Effets des régimes sur la réponse proliférative des thymocytes ......................... 145 IV-2-5 Effets des régimes sur l’activité de la phospholipase D ..................................... 147 IV-2-6 Effets des régimes sur l’expression de la PLD des thymocytes de rat................ 149 V- DISCUSSION .................................................................................................................. 153 VI- CONCLUSIONS GENERALES ET PERSPECTIVES............................................. 160 VII- RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES................................................................... 163 RESUME............................................................................................................................... 205 17
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L’analyse de la composition en AG
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éalisée dans les mêmes condition
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vortexé avant d'être coulé. Apr
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Prolifération des thymocytes (D.O5
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1,0 45 0,9 40 Phospholipides (mg/ml
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L’huile de poisson constitue une
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acide gras est indétectable dans l
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Proportion de 18:2(n-6) dans les ph
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A PLD1 PLD1 / tubulin (unités arbi
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V- Discussion De nombreuses études
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Cependant, il a été observé réc
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VII- Références bibliographiques
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BOWMAN, E. P., UHLINGER, D. J., LAM
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CALDER, P. C., COSTA-ROSA, L. F., C
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DIAZ, O., BERQUAND, A., DUBOIS, M.,
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FOWLER, K. H., MCMURRAY, D. N., FAN
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and Lipid Mediator Profiles and Pro
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HOREJSI, V. The Roles of Membrane M
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JIANG, C., TING, A. T., SEED, B. Pp
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KHAN, N. A., HICHAMI, A. Ionotrophi
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KTISTAKIS, N. T., BROWN, H. A., WAT
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NISHIZUKA, Y. The Molecular Heterog
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YAQOOB, P. Fatty Acids and the Immu
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RESUME L’huile d’argan est extr
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