Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

augmentent significativement l’activité PLD des thymocytes de rat, le 22:6n-3 ayant l’effet le
plus important aussi bien en absence qu’en présence de ConA. Par contre, l’effet activateur du
18:1n-9 reste faible et non significatif. Ces résultats diffèrent sensiblement de ceux rapportés
par Dai et al. (1995) pour la PLD de cœur de rat. Ces auteurs ont montré que l’acide oléique
induit une augmentation de l’activité PLD plus importante que celle induite par l’acide
linoléique. Cela peut être probablement expliqué par la faible incorporation de l’acide oléique
dans les thymocytes de rat dans nos conditions expérimentales. Cependant, Dai et al. (1995)
n’ont pas examiné l’effet des acides gras de la famille n-3 sur l’activité PLD du cœur de rat.
Les résultats obtenus dans notre étude sont en accord avec ceux de Bechoua et al. (1998)
montrant que le 22:6n-3 stimule l’activité PLD des lymphocytes humains alors que le 20:5n-3
n’a pas d’effet.
Les investigations menées dans la suite de notre étude in vitro ont visé à déterminer l’effet
d’un enrichissement en acide gras sur les radeaux lipidiques des thymocytes de rat. Tout
d’abord, nous avons caractérisé ces structures dans nos cellules. Les DRMs sont connus pour
leur composition lipidique particulière, à savoir leur enrichissement en cholestérol et
glycosphingolipides. L’isolement de ces structures est basé sur leur insolubilité dans les
détergents non ioniques à 4°C et leurs propriétés de flottaison sur un gradient de densité
(Montixi et al., 1998). Après fractionnement des lysats de thymocytes traités au triton X-100,
sur un gradient de densité de saccharose, nous avons utilisé plusieurs marqueurs biochimiques
permettant de caractériser les complexes enrichis en glycolipides, flottant au niveau des
fractions de faible densité lors de l’ultracentrifugation. Le ganglioside GM1, couramment
utilisé pour caractériser les radeaux lipidiques des cellules hématopoïétiques (Brown et
London, 1998), nous a permis de mettre en évidence ces structures au niveau des fractions de
faible densité. Nous avons également déterminé la localisation du PIP2 à l’aide d’un anticorps
anti-PIP2 spécifique, ce phospholipide étant décrit comme présent dans les structures résistant
aux détergents non ioniques à froid (Pike et Miller, 1998 ; Martin, 2001). Les fractions de
faible densité isolées par centrifugation entre 15 et 20% de saccharose ont montré un
enrichissement important en GM1, PIP2 et cholestérol, caractéristique des radeaux lipidiques.
Notre équipe avait montré antérieurement que dans les lymphocytes humains, la PLD1
apparaît comme préférentiellement associée aux radeaux lipidiques alors que PLD2 ne l’est
pas. Après enrichissement des membranes lymphocytaires en DHA et stimulation par la
ConA, la PLD1 est délocalisée hors des DRMs vers le reste des membranes solubilisées, alors
que PLD2 n’est pas affectée (Diaz et al., 2002). C’est pourquoi nous avons recherché si la
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