Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

Une incubation de courte durée (2h) avec le complexe acide gras-albumine (rapport 1 et 3
correspondant respectivement à des concentrations en acides gras de 5µM et 15µM) est
suffisante pour induire une augmentation significative de la proportion de chaque acide gras
dans les phospholipides des thymocytes, à l’exception des acides oléique et stéarique qui ne
s’incorporent que faiblement, quel que soit le rapport acide gras/albumine utilisé. La plus
forte incorporation est obtenue avec le 20:5n-3, qui est élongué efficacement en 22 :5n-3 au
rapport acide gras/albumine de 3. L’enrichissement des phospholipides en acides gras est
dose-dépendant, leur incorporation étant plus importante lorsqu’ils sont apportés à une
concentration de 15µM qu’à 5µM.
Avant d’examiner l’effet de ces acides gras sur l’activité PLD thymocytaire, nous avons tout
d’abord caractérisé de façon plus précise les différentes isoformes de PLD présentes dans les
thymocytes de rat. Le dosage de l’activité PLD dans les lysats de thymocytes montre la
nécessité de la présence de PIP2 dans le milieu réactionnel pour l’activité enzymatique. Ces
résultats indiquent la présence de PLD PIP2-sensibles, PLD1 et/ou PLD2, dans ces cellules.
En outre, cette activité est stimulée par un analogue non-hydrolysable du GTP, le GTPγS, ce
qui est en faveur d’une PLD activable par les petites protéines G, essentiellement PLD1. Par
ailleurs, la présence d’oléate de sodium dans le milieu réactionnel n’active pas, mais au
contraire inhibe, la formation de phosphatidylbutanol, indiquant une absence de PLD oléate
dépendante dans les thymocytes de rat. Les expériences ultérieures de RT-PCR, réalisées avec
des amorces spécifiques de PLD1 et PLD2, ont montré que les ARNm des deux isoformes,
PLD1 et PLD2, étaient exprimés dans les thymocytes de rat. De plus, les deux variants
d’épissage PLD1a et PLD1b ont pu être mis en évidence. Ces résultats de RT-PCR ont été
confirmés au niveau des protéines par des expériences de Westen-blotting utilisant des
anticorps spécifiques dirigés contre PLD1 et PLD2. Ainsi, l’ensemble de nos résultats montre
la présence de PLD1a, PLD1b et PLD2 dans les thymocytes de rat, alors que la présence
d’une PLD oléate sensible semble exclue.
Parmi les acides gras étudiés, seuls le 18 :0 et le 20 :5n-3 n’ont pas d’effet sur l’activité PLD
des thymocytes de rat stimulés ou non par la ConA. Alors que l’inefficacité du 18 :0 peut
s’expliquer par un défaut d’incorporation dans les phospholipides cellulaires, l’absence
d’effet du 20 :5n-3 est plus surprenante car c’est l’acide gras le plus efficacement capté par les
thymocytes. Sa proportion dans les phospholipides augmente jusqu’à 36 fois au rapport acide
gras/albumine de 3 par rapport aux thymocytes témoins. Le 18:2n-6, le 22:6n-3 et le 14 :0
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