Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

IV-1-4-2 Effet des AG sur la localisation de la protéine PLD1
Afin de déterminer si un enrichissement en acides gras pouvait modifier la distribution de la
PLD1 entre les fractions rafts et non-rafts des gradients, des expériences de Western blotting
ont été réalisées sur des gradients préparés avec des thymocytes préalablement enrichis en
acides gras. On peut remarquer que dans les cellules enrichies, on ne retrouve pratiquement
plus de PLD1 dans les fractions comprises entre 15 et 20% de saccharose (fractions 6 et 7)
correspondant aux DRMs (Figure 43). La protéine est déplacée à la fois vers les fractions
plus légères (saccharose 30%). Cette
délocalisation est plus importante après un enrichissement en DHA. Il est important de noter
que ces changements de distribution de la protéine PLD1 dans les membranes ne
s’accompagnent d’aucun changement dans la distribution des marqueurs spécifiques des
microdomaines.
a- DHA
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
PLD 1
b- LA
1 2 3
4
5
6
7
8
9
10
11
PLD1
Figure 43 : Effet d’un enrichissement en DHA (a) et en acide linoléique (b) sur la
distribution de la protéine PLD1 dans les fractions des gradients
Les protéines de chacune des fractions des gradients préparés à partir de thymocytes préalablement
enrichis pendant 2h avec les acides gras d’intérêt ont été précipitées par l’acétone à froid comme
indiqué dans Matériels et Méthodes. Le précipité protéique est repris dans 20 µl de tampon de
Laemmeli contenant de l’urée ≈ 4M et de l’EDTA 2,5 mM. Les différentes fractions sont ensuite
analysées par Western blotting avec un anticorps polyclonal anti-PLD1.
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