Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

PLD1
1 2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Figure 42: Détection de PLD1 dans les différentes fractions du gradient de saccharose.
Les protéines de chacune des fractions ont été précipitées par l’acétone à froid comme indiqué dans
Matériels et Méthodes. Le précipité protéique est repris dans 20 µl de tampon de Laemmeli contenant
de l’urée ≈ 4M et de l’EDTA 2,5 mM. Les différentes fractions sont ensuite analysées par Western
blotting avec un anticorps polyclonal anti-PLD1.
IV-1-4 Effets de l’enrichissement des cellules en acides gras sur les radeaux
lipidiques
Plusieurs travaux ont montré que l’enrichissement des lymphocytes T en acides gras
insaturés, spécialement ceux de la famille n-3, était capable de modifier l’association aux
DRMs de certaines protéines comme les tyrosines kinases de la famille Src (Fyn et Lck)
(Stulnig et al., 1998 ; Stulnig et al., 2001 ; Weeb et al., 2000) et la protéine adaptatrice LAT
(Zeyda et al., 2002). De plus, des travaux précédents de notre équipe avaient montré que
l’enrichissement des lymphocytes humains en DHA entraînait une délocalisation de PLD1
hors des DRMs et que cette délocalisation s’accompagnait d’une stimulation de l’activité de
la protéine (Diaz et al., 2002). Nous avons sélectionné pour cette étude les deux acides gras
qui se sont montrés les plus efficaces pour activer la PLD des thymocytes, le 22:6n-3 et le
18:2n-6.
IV-1-4-1 Effet des AG sur la distribution du GM1, du cholestérol et des
phospholipides
Nous avons tout d’abord recherché si l’enrichissement en AG des membranes de thymocytes
modifiait la répartition des constituants lipidiques principaux dans les fractions des gradients.
Nous observons que le GM1 comme le cholestérol et le PIP2 restent principalement localisés
dans les fractions de faible densité correspondant aux DRMs (résultats non montrés).
134