Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

1,0
45
0,9
40
Phospholipides (mg/ml)
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
35
30
25
20
15
10
5
% de saccharose
Phospholipides
% saccharose
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
0
n° Fractions
Figure 41 : Distribution des phospholipides dans les différentes fractions du gradient de
saccharose.
Les microdomaines sont préparés comme décrit dans Matériels et Méthodes et les fractions sont
collectées de 1 (fond du tube) à 11 (Sommet du tube). Les phospholipides sont dosés par la méthode de
Stewart, comme décrit dans Matériels et méthode, sur chaque fraction du gradient. Les résultats sont
exprimés en mg/ml et représentent la moyenne ± SEM de 3 expériences indépendantes.
IV-1-3-4 Distribution de la protéine PLD1 dans les radeaux lipidiques
Dans les lymphocytes humains, la PLD1 apparaît comme préférentiellement associée aux
radeaux lipidiques alors que la PLD2 est uniquement présente dans les fractions de fortes
densités correspondant aux protéines solubilisées par le détergent (Diaz et al., 2002). Nous
avons donc recherché la présence éventuelle de PLD1 dans les DRMs de thymocytes. La mise
en évidence de la protéine PLD1 dans les fractions du gradient nécessite une étape de
concentration par précipitation des protéines à l’acétone. Cette étape de concentration permet
d’obtenir un signal détectable par nos anticorps lors de la révélation ECL. Les résultats
montrent que la protéine PLD1 est localisée en partie dans les fractions de fortes densités
mais qu’elle est également présente dans les fractions de faible densité correspondant aux
DRMs (Figure 42).
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