Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

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IV-1-3-1 Détection du ganglioside GM1 Parmi les glycosphingolipides présents dans les DRMs, le ganglioside GM1, l’un des plus abondants, est le plus souvent utilisé comme marqueur car il est facilement détectable par la toxine cholérique. La toxine cholérique est constituée de deux sous-unités : A et B. La sous unité B présente la particularité de reconnaître et de se fixer sur le GM1 de façon spécifique. L’utilisation de la sous unité B de la toxine couplée de façon covalente à une peroxydase (Amersham), permet de visualiser le GM1 présent dans chacune des fractions du gradients par dot blot. L’analyse densitométrique des spots révélés par ECL a permis de mettre en évidence un enrichissement spécifique en GM1 des fractions de faible densité en saccharose (14 à 20%) (Figure 38) correspondant aux densités caractéristiques des radeaux lipidiques. En effet, environ 60% du GM1 se retrouve dans les DRMs. 59,57% GM1 (% du total) 30 25 20 15 10 5 GM1 % de saccharose 45 40 35 30 25 20 15 10 5 % de saccharose 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 0 n° Fractions Figure 38 : Distribution du ganglioside GM1 dans les différentes fractions du gradient de saccharose. Les microdomaines sont préparés comme décrit dans Matériels et Méthodes et les fractions du gradient sont collectées de 1 (fond du tube) à 11 (sommet du tube). 20 µl de chaque fraction sont déposés sur membrane immobilon et le GM1 est détecté spécifiquement par la sous unité B de la toxine cholérique et révélé par chimiluminescence. Les résultats représentent la moyenne ± SEM de 3 expériences indépendantes. 130
IV-1-3-2 Détection du PIP2 Le PIP2 est un phospholipide qui a été décrit comme principalement localisé dans les radeaux lipidiques qu’ils soit enrichis ou non en caveoline (Hope et Pike., 1996 ; Liu et al., 1998 ; Pike et casey, 1996). Afin de déterminer sa localisation dans les différentes fractions du gradient, nous avons réalisé des expériences de dot Blot en utilisant un anticorps polyclonal anti-PIP2 spécifique pour l’immunodetection. L’analyse densitométrique des spots révélés par ECL a permis de mettre en évidence un enrichissement spécifique en PIP2 des fractions de faible densité en saccharose (
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N° : 2006-ISAL-0031 ANNEE 2006 THE
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GOUTTE R. (Prof. émérite) CREATIS
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SIGLE ECOLE DOCTORALE NOM ET COORDO
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Dédicace Je dédie ce travail A me
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Je remercie également Mme Madelein
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AVANT-PROPOS Le travail présenté
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TABLE DES MATIERES REMERCIEMENTS...
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II-3-5-1 Huile d’olive...........
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YAQOOB, P. Fatty Acids and the Immu
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RESUME L’huile d’argan est extr
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