Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

IV-1-3-1 Détection du ganglioside GM1
Parmi les glycosphingolipides présents dans les DRMs, le ganglioside GM1, l’un des plus
abondants, est le plus souvent utilisé comme marqueur car il est facilement détectable par la
toxine cholérique. La toxine cholérique est constituée de deux sous-unités : A et B. La sous
unité B présente la particularité de reconnaître et de se fixer sur le GM1 de façon spécifique.
L’utilisation de la sous unité B de la toxine couplée de façon covalente à une peroxydase
(Amersham), permet de visualiser le GM1 présent dans chacune des fractions du gradients par
dot blot.
L’analyse densitométrique des spots révélés par ECL a permis de mettre en évidence un
enrichissement spécifique en GM1 des fractions de faible densité en saccharose (14 à 20%)
(Figure 38) correspondant aux densités caractéristiques des radeaux lipidiques. En effet,
environ 60% du GM1 se retrouve dans les DRMs.
59,57%
GM1 (% du total)
30
25
20
15
10
5
GM1
% de saccharose
45
40
35
30
25
20
15
10
5
% de saccharose
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
0
n° Fractions
Figure 38 : Distribution du ganglioside GM1 dans les différentes fractions du gradient de
saccharose.
Les microdomaines sont préparés comme décrit dans Matériels et Méthodes et les fractions du
gradient sont collectées de 1 (fond du tube) à 11 (sommet du tube). 20 µl de chaque fraction sont
déposés sur membrane immobilon et le GM1 est détecté spécifiquement par la sous unité B de la
toxine cholérique et révélé par chimiluminescence. Les résultats représentent la moyenne ± SEM de 3
expériences indépendantes.
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