Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

Prolifération des thymocytes
(D.O550-D.O690)
Proliferation ∆D.O
0,60
0,50
0,40
0,30
0,20
0,10
0
68%
Te ConA ConA + TPA
Figure 37 : Effet du TPA sur la réponse proliférative des thymocytes de rat.
Les thymocytes sont suspendus dans un milieu complet contenant 10% de sérum de veau fœtal (v/v), à
une densité de 5x10 5 cellules/puits et cultivés pendant 68h en présence ou absence de ConA (2,5µg/ml)
et en présence ou absence du TPA (10 -7 M). La prolifération cellulaire est mesurée par un test
colorimétrique comme décrit dans Matériels et Méthodes. Les valeurs représentent la moyenne ± SEM
de n=3 expériences indépendantes.
IV-1-3 Caractérisation des DRMs dans les thymocytes de rat
L’isolement des DRMs à partir de lysats cellulaires est basé sur l’insolubilité de ces structures
dans les détergents non ioniques à froid et leur flottaison sur un gradient de densité. Lors de
l’ultracentrifugation sur gradient de saccharose d’un l’homogénat cellulaire traité au triton X-
100, les DRMs sont isolés dans les fractions de faible densité alors que le reste des
membranes est concentré dans les fractions de forte densité. C’est la composition lipidique
particulière des DRMs qui leur confère ce comportement caractéristique. Après
ultracentrifugation, le gradient est fractionné en aliquotes de 1ml et le pourcentage en
saccharose de chaque fraction est déterminé. Différents marqueurs caractéristiques des DRMs
sont ensuite dosés.
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