Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...
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Prolifération <strong>de</strong>s thymocytes<br />
(D.O550-D.O690)<br />
Proliferation ∆D.O<br />
0,60<br />
0,50<br />
0,40<br />
0,30<br />
0,20<br />
0,10<br />
0<br />
68%<br />
Te ConA ConA + TPA<br />
Figure 37 : Eff<strong>et</strong> du TPA sur la réponse proliférative <strong>de</strong>s thymocytes <strong>de</strong> rat.<br />
Les thymocytes sont suspendus dans un milieu compl<strong>et</strong> contenant 10% <strong>de</strong> sérum <strong>de</strong> veau fœtal (v/v), à<br />
une <strong>de</strong>nsité <strong>de</strong> 5x10 5 cellules/puits <strong>et</strong> cultivés pendant 68h en présence ou absence <strong>de</strong> ConA (2,5µg/ml)<br />
<strong>et</strong> en présence ou absence du TPA (10 -7 M). La prolifération cellulaire est mesurée par un test<br />
colorimétrique comme décrit dans Matériels <strong>et</strong> Métho<strong>de</strong>s. Les valeurs représentent la moyenne ± SEM<br />
<strong>de</strong> n=3 expériences indépendantes.<br />
IV-1-3 Caractérisation <strong>de</strong>s DRMs dans les thymocytes <strong>de</strong> rat<br />
L’isolement <strong>de</strong>s DRMs à partir <strong>de</strong> lysats cellulaires est basé sur l’insolubilité <strong>de</strong> ces structures<br />
dans les détergents non ioniques à froid <strong>et</strong> leur flottaison sur un gradient <strong>de</strong> <strong>de</strong>nsité. Lors <strong>de</strong><br />
l’ultracentrifugation sur gradient <strong>de</strong> saccharose d’un l’homogénat cellulaire traité au triton X-<br />
100, les DRMs sont isolés dans les fractions <strong>de</strong> faible <strong>de</strong>nsité alors que le reste <strong>de</strong>s<br />
membranes est concentré dans les fractions <strong>de</strong> forte <strong>de</strong>nsité. C’est la composition lipidique<br />
particulière <strong>de</strong>s DRMs qui leur confère ce comportement caractéristique. Après<br />
ultracentrifugation, le gradient est fractionné en aliquotes <strong>de</strong> 1ml <strong>et</strong> le pourcentage en<br />
saccharose <strong>de</strong> chaque fraction est déterminé. Différents marqueurs caractéristiques <strong>de</strong>s DRMs<br />
sont ensuite dosés.<br />
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