Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

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Activité PLD
(pmoles de PC hydrolysées/essai)
12
10
8
6
4
2
0
Sans addition
+ PIP2
+PIP2+ GTPγS
Figure 32 : Activité PLD PIP2-sensible dans les thymocytes de rat.
Les lysats cellulaires sont incubés à 37°C pendant 30 min. et l’activité PLD est mesurée en présence
ou absence de PIP2, avec ou sans GTPγS comme decrit dans matériels et méthodes. Les résultats sont
exprimés en pmoles de PC hydrolysées /essai. Ils représentent la moyenne ± SEM de 5 expériences
indépendantes.
Afin d’identifier les isoformes de PLD exprimées dans les thymocytes, nous avons recherché
la présence des ARNm de PLD1 et PLD2 grâce à la technique de RT-PCR et l’utilisation
d’amorces spécifiques de PLD1 et PLD2. Les amorces spécifiques de chaque isoformes ont
été choisies à partir des séquences publiées de PLD1 (Hammond et al., 1997) et de PLD2
(Steed et al., 1998). Le couple d’amorces spécifiques de PLD1 entoure la délétion présente
chez PLD1b, permettant ainsi de révéler à la fois la présence de PLD1a et PLD1b. La
séquence de PLD2 à amplifier a été choisie dans une zone non homologue à PLD1. Dans la
RT-PCR réalisée avec les amorces spécifiques de PLD1, on obtient deux bandes d'ADN
amplifié, de 554 et 437 pb correspondant respectivement aux deux variants rPLD1a et
rPLD1b. Pour rPLD2, on obtient une bande de 489 pb correspondant au fragment attendu.
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