Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

métaboliquement stable et sa synthèse est spécifique d’une activité PLD. En système a-
cellulaire (lysats cellulaires) la phosphtidylcholine substrat doit être apportée aux membranes
sous forme de liposomes ou de vésicules mixtes (voir Matériels et Méthodes).
IV-1-2-1 Caractérisation de la PLD des thymocytes de rat
Dans un premier temps, nous avons mesuré l’activité PLD des thymocytes intacts, stimulés ou
non par la ConA ou par l’ester de phorbol TPA. Pour cela, les thymocytes marqués avec de
l’acide arachidonique tritié sont incubés 20 min en présence ou en absence de butanol-1 à 1%,
puis pendant 5 min avec ou sans ConA (1µg/10 6 cellules), le choix de cette concentration
découle des études antérieures effectuées par l’équipe (Valette et al., 1991), ou pendant 10
min avec ou sans TPA. On remarque une formation de phosphatidylbutanol, ce qui témoigne
de la présence d’une activité PLD dans ces cellules (Figure 30). Cette activité est augmentée
par la ConA et le TPA.
0,25
PBut (%de la radioactivité liée aux
phospholipides totaux)
0,20
0,15
0,10
0,05
0
sans BuOH
avec BuOH
Témoins + ConA +TPA
Figure 30 : Synthèse de phosphatidylbutanol dans les thymocytes de rat.
Les cellules marquées avec une dose traceuse d’acide arachidonique tritié sont incubées en présence
ou absence de butanol-1 à 1% pendant 20 min, puis pendant 5 min avec ou sans ConA (1µg/10 6
cellules), ou 10 min avec ou sans TPA à une concentration finale de 10 -7 M. A la fin du temps
d’incubation, les lipides sont extraits et séparés par CCM bidimensionnelle comme décrit dans la
partie Matériels et Méthodes. La radioactivité associée au phosphatidylbutanol est exprimée en
pourcentage de la radioactivité incorporée dans les PL totaux.
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