Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

III-2-10-4 Electrophorèse sur gel d'agarose des ADN
Les fragments d'ADN amplifiés par PCR sont ensuite analysés par électrophorèse sur gel
d'agarose 2%. Le gel est préparé extemporanément en diluant 1g d'agarose dans 50ml de
tampon TBE (Tris-Borate 90mM, pH8, EDTA 1mM). La solution est portée à ébullition, puis
refroidie avant ajout de 5µl d'une solution de bromure d'éthidium (BET) 10 mg/ml. La
solution encore tiède est coulée dans la cuve de migration horizontale et après
refroidissement, le gel polymérise. Il est ensuite immergé dans le tampon de migration. Les
échantillons préparés dans une solution de dépôt (0,05% de bleu de bromophénol, 0,05% de
xylène cyanol et 6% de glycérol) sont déposés dans les puits du gel d’agarose. La migration
se fait de la cathode vers l’anode sous tension constante d’environ 100 volts, et en présence de
marqueurs de taille. Les fragments d’ADN ayant fixé du bromure d’éthidium (BET) sont
visualisés sous lumière UV et le gel est photographié à l'aide d'une caméra CCD
(ImageMaster VDS-CL, Amersham Biotech).
III-2-11 Analyses statistiques des résultats
Les résultats sont la moyenne ± SEM de n expériences indépendantes. Ils ont été analysés par
ANOVA (Statview II, Macintoch) et comparés par un test de t protégé. Les variations sont
considérées comme significatives si la valeur de P est inférieure ou égale à 0,05. Pour les
expériences relatives à l’effet des acides gras sur l’activité PLD thymocytaire in vitro et pour
les essais visant à déterminer l’influence du sérum sur la réponse proliférative, les résultats
sont soumis à une analyse de variance à deux entrées. La valeur de F est donnée dans les
légendes de la figure et du tableau correspondants. Une différence est considérée comme
significative lorsque P≤0,05.
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