Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

Tableau XIII: Séquence des amorces utilisées pour la PCR.
Amorces
Séquences
PLD 1a et 1b
Sens : 5’- AGGACAGTCTCTGGGCTCTC -3’
Anti-sens : 5’- TGCCTTTCCGTGAACCACAG -3’
PLD2
Sens : 5’- TGAACAGGGGCAGTGTTTCC -3’
Anti-sens : 5’- AGGTCTGGCCAGGTATTTGC -3’
β actine
Sens : 5’- TCATGAAGTGTGACGTTGACATCCGT-3’
Anti-sens : 5’-CCTAGAAGCATTTGCGGTGCACGATG –3’
Dans un volume final de réaction de 50µl, on incube 5µl du milieu de réaction de la
transcription inverse en présence de 200µM de dNTP, 0,4µM de chaque amorce spécifique et
2 unités d'ADN polymérase Taq (Roche), dans un milieu tamponné Tris-HCl 10mM, pH 8.3,
50mM KCl, 1,5 mM MgCl 2 . Les conditions d'amplification programmées sur le
thermocycleur sont présentées dans le Tableau XIV.
Tableau XIV: Programme de la réaction PCR
PLD1 (a et b) PLD2 β actine
Dénaturation 94°C pendant 45s 94°C pendant 45s 94°C pendant 45s
Hybridation 54°C pendant 45s 56°C pendant 45s 65°C pendant 45s
Extension 72°C pendant 45s 72°C pendant 45s 72°C pendant 30s
Nombre de cycle 40 cycles 35cycles
Extension finale
72°C pendant 10 min.
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