Etude biochimique et nutritionnelle de l'effet immunomodulateur des ...

La quantification en nmoles est faite à l’aide d’un standard interne, la diheptadécanoyl
phosphatidylcholine (PC di 17 :0), ajouté dans les échantillons au moment de l’extraction
lipidique.
Figure 25 : Schéma récapitulatif d’un chromatographe en phase gazeuse.
III-2-8 Etude des microdomaines
III-2-8-1 Isolement des microdomaines à partir des thymocytes de rat
Ces structures ont été purifiées selon le protocole décrit par Montixi et al. (1998), basé sur
leur insolubilité dans les détergents non ioniques à 4°C, et leur propriété de flottaison sur un
gradient de densité conférée par leur enrichissement en sphingolipides et cholestérol. 1.5 10 7
thymocytes sont homogénéisés dans 1.5ml de tampon Tris 25mM, NaCl 150mM, EDTA
5mM, pH 7.5 contenant un mélange d’inhibiteurs de protéase (inhibitor cocktail, Sigma), à
l’aide d’un potter verre-téflon (10x20 allers-retours) puis centrifugés à 900g pendant 10 min à
4°C. Le surnageant post nucléaire (SPN) est incubé avec du triton X100 (1% final) pendant 1h
à 4°C sous agitation douce. Après incubation, le lysat est ajouté à un même volume de
solution de saccharose 2.6M pour avoir une concentration finale de 1.3M en saccharose. Le
gradient est réalisé par dépôts successifs (1ml) de solutions de saccharose de concentrations
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