maenas (intertidal zone) and Segonzacia mesatlantica - Station ...

2.2. LE MALLS ET LES PIGMENTS RESPIRATOIRES 69
d’une estimation de masse par MALLS est faible et est en général inférieure à 1 %. Par contre, l’erreur
réelle possible est de l’ordre de 10 % en raison de l’incertitude introduite lors de la détermination des
lignes de base et du coefficient dn/dc qui varie suivant la glycosylation des protéines.
Pour les acquisitions MALLS sur des échantillons d’Hc de Crustacés, les expériences ont eu lieu
avec un débit de 0,25 ou 0,5 ml/min. Le coefficient dn/dc utilisé est 0,190 g/ml, typique des protéines
non-glycosylées. Une normalisation des détecteurs a été réalisée en utilisant de la BSA (Sigma). La
méthode de Zimm a été utilisée pour calculer les masses à partir des intensités diffusées avec le
logiciel Astra 4.90.08 (Wyatt Technology Corp., Santa Barbara).
2.2.3 Autres possibilités du MALLS
Les méthodes présentées précédemment mesurent la diffusion statique de la lumière, c’est à dire la
diffusion due à des particules dont les mouvements browniens sont moyennés sur le temps d’acquisition
des détecteurs. Ce type de mesure donne accès à la masse et au rayon de gyration des molécules.
Il existe une méthode d’acquisition utilisant des compteurs de photons rapides qui permettent de
mesurer les fluctuations de l’intensité diffusée au cours du temps ; il s’agit alors de diffusion de lumière
dynamique ou QELS pour Quasi-Elastic Light Scattering (diffusion de lumière quasi-élastique).
Ces fluctuations sont dues aux mouvements aléatoires des particules diffusant la lumière, qui provoquent
des interférences alternativement constructives et destructives des ondes émises par chacune
d’entre elles. La corrélation entre les intensités diffusées sur un petit intervalle de temps dépend de la
constante de diffusion des particules dans le solvant. Il est donc possible de déduire la constante de
diffusion à partir d’une mesure en QELS, puis de calculer le rayon hydrodynamique R h des particules.
Le rapport R g /R h donne une indication sur la forme de la particule.
Le MALLS permet également de mesurer le second coefficient de viriel A 2 , qui estime l’interaction
entre les molécules analysées et le solvant.
2.2.4 Application du MALLS à l’étude des pigments respiratoires
Le MALLS est une méthode permettant de déterminer la masse des pigments respiratoires de
haute masse moléculaire en solution de manière relativement précise et rapide (typiquement 1 à 2 h
pour une acquisition en SEC-MALLS). Cette technique permet de tester l’effet de différents tampons,
physiologiques ou non, sur la structure des complexes et ainsi de suivre des processus de dissociation
ou de réassociation (Rousselot et al., 2006). Elle a été utilisée notamment pour déterminer la masse
des hémoglobines géantes d’Annélides (non encore accessible en ESI-MS) et celle de l’Hc de certains
Crustacés Décapodes. Les données de masses natives acquises en MALLS peuvent être utilisées avec