maenas (intertidal zone) and Segonzacia mesatlantica - Station ...

2.2. LE MALLS ET LES PIGMENTS RESPIRATOIRES 67
FIG. 2.7 – Schéma d’un système SEC-MALLS. Les signaux mesurés sont les intensités I θ diffusées
aux angles θ par la cellule de mesure, illuminée par l’intensité incidente I.
2.2.2 Utilisation du MALLS pour l’étude de complexes non-covalents
Le principe d’une analyse en diffusion de lumière (light scattering) est de mesurer l’intensité
lumineuse diffusée par une cellule de mesure transparente contenant l’échantillon et illuminée par une
source avec une intensité incidente connue. L’intensité diffusée dépend de l’intensité incidente, de la
masse molaire et de la concentration du composé, de sa forme et de l’angle d’observation. L’intensité
incidente et les angles de mesure étant connus, il est nécessaire de déterminer la concentration dans
la cellule pour obtenir l’information de masse et de forme (rayon de gyration).
Le système MALLS est en général couplé à un système de séparation afin de réaliser les mesures
sur des composés séparés purs (e.g. SEC) (figure 2.7). Il est associé à une mesure de la concentration
de l’échantillon passant dans la cellule, en général par mesure du changement d’indice de réfraction
(refractive index, RI) ou par mesure de l’absorbance à 280 nm pour les protéines.
Les profils d’indice de réfraction ou d’absorbance obtenus peuvent être déconvolués en pics gaussiens
à l’aide du logiciel Origin afin de déterminer le nombre d’espèces différentes présentes dans
l’échantillon, leurs abondances relatives et les zones de recouvrement. La figure 2.8 présente le profil
classique obtenu pour de l’hémolymphe native de Carcinus maenas. Deux espèces protéiques majoritaires
sont présentes (absorbance à 280 nm) ; il s’agit d’Hc fonctionnelle (vérifié par l’absorbance
caractéristique à 337 nm, coefficient d’extinction plus faible qu’à 280 nm). L’analyse par MALLS
donne des masses de 922 kDa et 486 kDa, correspondant respectivement au dodécamère et à l’hexamère
d’Hc. Une déconvolution en pics gaussiens montre la présence d’une troisième espèce en faible
quantité qui élue avant le dodécamère et qui correspond à un 18-mère. L’erreur due aux calculs lors