maenas (intertidal zone) and Segonzacia mesatlantica - Station ...

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66 CHAPITRE 2. ESI-MS ET MALLS APPLIQUÉS AUX PIGMENTS RESPIRATOIRES FIG. 2.5 – Induction d’un dipôle oscillant sous l’effet d’un laser. L’onde électromagnétique excitatrice induit l’oscillation de charges au sein de la particule polarisable qui émet à son tour une onde. Les illustrations proviennent du site de la société Wyatt Technology hhtp ://www.wyatt.com/theory. (a) (b) FIG. 2.6 – Diffusion de lumière d’un dimère. (a) deux particules isolées diffusent la lumière avec un déphasage aléatoire dû à leurs mouvements browniens indépendants ; l’intensité diffusée est la somme simple des deux intensités. (b) deux particules liées subissent le même mouvement brownien et la lumière est diffusée en phase par les deux particules ; l’intensité diffusée est le double de celle de deux monomères isolés. Les illustrations proviennent du site de la société Wyatt Technology hhtp ://www.wyatt.com/theory.
2.2. LE MALLS ET LES PIGMENTS RESPIRATOIRES 67 FIG. 2.7 – Schéma d’un système SEC-MALLS. Les signaux mesurés sont les intensités I θ diffusées aux angles θ par la cellule de mesure, illuminée par l’intensité incidente I. 2.2.2 Utilisation du MALLS pour l’étude de complexes non-covalents Le principe d’une analyse en diffusion de lumière (light scattering) est de mesurer l’intensité lumineuse diffusée par une cellule de mesure transparente contenant l’échantillon et illuminée par une source avec une intensité incidente connue. L’intensité diffusée dépend de l’intensité incidente, de la masse molaire et de la concentration du composé, de sa forme et de l’angle d’observation. L’intensité incidente et les angles de mesure étant connus, il est nécessaire de déterminer la concentration dans la cellule pour obtenir l’information de masse et de forme (rayon de gyration). Le système MALLS est en général couplé à un système de séparation afin de réaliser les mesures sur des composés séparés purs (e.g. SEC) (figure 2.7). Il est associé à une mesure de la concentration de l’échantillon passant dans la cellule, en général par mesure du changement d’indice de réfraction (refractive index, RI) ou par mesure de l’absorbance à 280 nm pour les protéines. Les profils d’indice de réfraction ou d’absorbance obtenus peuvent être déconvolués en pics gaussiens à l’aide du logiciel Origin afin de déterminer le nombre d’espèces différentes présentes dans l’échantillon, leurs abondances relatives et les <strong>zone</strong>s de recouvrement. La figure 2.8 présente le profil classique obtenu pour de l’hémolymphe native de Carcinus <strong>maenas</strong>. Deux espèces protéiques majoritaires sont présentes (absorbance à 280 nm) ; il s’agit d’Hc fonctionnelle (vérifié par l’absorbance caractéristique à 337 nm, coefficient d’extinction plus faible qu’à 280 nm). L’analyse par MALLS donne des masses de 922 kDa et 486 kDa, correspondant respectivement au dodécamère et à l’hexamère d’Hc. Une déconvolution en pics gaussiens montre la présence d’une troisième espèce en faible quantité qui élue avant le dodécamère et qui correspond à un 18-mère. L’erreur due aux calculs lors
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THESE DE DOCTORAT DE L’UNIVERSITE
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