maenas (intertidal zone) and Segonzacia mesatlantica - Station ...
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2.1. L’ESI-MS ET LES PIGMENTS RESPIRATOIRES 57<br />
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FIG. 2.1 – Principe d’un spectromètre de masse. Les molécules contenues dans l’échantillon sont<br />
ionisées par la source et passent en phase gazeuse, puis sont séparées selon leur rapport m/z par<br />
l’analyseur et enfin les ions séparés sont comptés par le détecteur. L’ESI et le MALDI sont les sources<br />
les plus utilisées en biologie, classiquement associées à des analyseurs quadripôle (Q) ou temps de<br />
vol (TOF) ou à une géométrie en t<strong>and</strong>em (Q-TOF par exemple).<br />
sélectifs (Vinh, 1999). En 1988, deux techniques d’ionisation nouvelles sont mises au point : l’ESI<br />
(ElectroSpray Ionization) par John Fenn et le MALDI (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization)<br />
par Franz Hillenkamp. Ces deux techniques d’ionisation sont les principales utilisées en biologie<br />
aujourd’hui et ont ouvert la voie à de nouvelles performances en terme de masse et de résolution.<br />
2.1.2 L’ESI-MS en biologie<br />
La spectrométrie de masse (MS) est une technique à présent couramment employée en biologie.<br />
Elle permet de déterminer de manière beaucoup plus précise et exacte la masse moléculaire des<br />
composés analysés que d’autres techniques comme l’électrophorèse sur gel ou l’ultracentrifugation<br />
analytique. C’est une technique au développement relativement récent qui fut d’abord employée pour<br />
déterminer la masse de petits composés (fortuitine de 1,4 kDa, insuline de 5,8 kDa (Vinh, 1999))<br />
puis d’édifices plus importants avec le développement des sources ESI et MALDI (hémocyanine de<br />
2,2 MDa, capside du batériophage MS2 de 2,5 MDa (Sanglier et al., 2003, Tito et al., 2000)). Elle a<br />
de nombreuses applications en biologie (séquençages, phénotypage, interactions protéine/protéine ou<br />
protéine/substrat, association et dissociation de complexes, cinétiques).<br />
Les sources et les analyseurs utilisés en biologie<br />
Le MALDI et l’ESI sont les deux principales méthodes d’ionisation actuellement utilisées. Le<br />
MALDI consiste à déposer un mélange solide contenant l’échantillon et une matrice de dépôt sur<br />
une plaque métallique, la cible, puis à l’exposer à une décharge laser permettant d’ioniser le mélange<br />
matrice/échantillon et de produire les ions envoyés dans le détecteur (Karas et Hillenkamp, 1988,<br />
Tanaka et al., 1988). L’ESI est une méthode plus douce consistant à produire un spray (nébulisation)<br />
à partir de l’échantillon en phase liquide, au niveau d’un cône possédant un fort potentiel électrique